Navegando por Autor "Brasileiro, Ana Cristina M."

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Expressão do gene Gus em embriões zigóticos e calos embriogênicos de Coffea arabica e C. canephora
(2001) Barros, Érika V. S. A.; Cunha, Welcimar G. da; Teixeira, Joao Batista; Brasileiro, Ana Cristina M.; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
A metodologia de biolística foi utilizada para a transformação genética de Coffea spp. Foram bombardeados embriões zigóticos de C. arabica e calos embriogênicos de C. arabica e de C. canephora. Embriões da cultivar IAPAR 59 foram testados nos dias 2, 5, 7, 9 e 12 do período de cultivo anterior ao bombardeamento. A expressão transiente foi observada em 30 embriões de cada idade após 48 horas do bombardeamento, através de teste histoquímico com X-glu. Outros 30 embriões foram mantidos em meio seletivo com imazapyr 300 nM por 15 d. O maior número de pontos azuis nas análises transiente e estável da expressão do gene gus foi observado na idade de 12 d. Com base neste resultado, foram testados 700 embriões da cultivar Mundo Novo nas mesmas condições, sendo a expressão estável analisada em brotos emergentes após 60 d. Verificou-se que partes de alguns brotos apresentaram coloração azul, indicando a formação de mosaicos. O material de calos embriogênicos proveniente de folhas de cafeeiro foi bombardeado em meio C contendo 0; 0,25; e 0,5 M de manitol. Observou-se o maior número de pontos azuis na análise transiente de amostras dos calos submetidos a pré-tratamento osmótico, sugerindo que esta etapa possa otimizar a transformação deste material.
Transformação genética de Coffea arabica através de bombardeamento
(2000) Barros, Érika V. S. A.; Araújo, Gisele B.; Brasileiro, Ana Cristina M.; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
A manipulação genética de espécies de Coffea através de procedimentos de transformação constitui uma valiosa ferramenta para os programas de melhoramento de café. Vários estudos já foram desenvolvidos para o estabelecimento de um protocolo eficiente de transformação de C. arabica. Entretanto, os mais conhecidos, como uso de protoplastos e transformação mediada por Agrobacterium, foram dificultados por problemas de regeneração in vitro. Desta forma, o objetivo deste trabalho é testar o uso da biolística como uma estratégia alternativa para transformação da região do meristema apical de embriões zigóticos de C. arabica. Neste trabalho são apresentados os resultados provenientes de experimentos preliminares de desenvolvimento de um protocolo de transformação via bombardeamento para obtenção de plantas transgênicas de C. arabica. Foram determinadas as condições básicas para a multibrotação in vitro de meristemas apicais de embriões zigóticos de C. arabica e posterior aclimatação dos brotos obtidos. Além disso, são apresentados os resultados comparativos de reguladores de crescimento de plantas em dois cultivares de C. arabica. A dose seletiva de Imazapyr, a molécula de herbicida utilizada como agente seletivo na transformação de células meristemáticas, também foi estabelecida. Em relação à expressão transiente do gene repórter gus, nossos resultados mostraram que não houve diferença entre três plasmídios testados. Por outro lado, uma variação foi observada em relação à idade do embrião no momento do bombardeamento. A expressão estável do gene gus observada em um broto derivado da região apical de embrião zigótico confirmou a possibilidade de monitoramento da transformação neste tipo de tecido.