Navegando por Autor "Cardoso, Danielle Cunha"

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Análise quantitativa da expressão gênica de quitinase e peroxidase induzida por acibenzolar-S-metil e extrato vegetal em cafeeiro contra Hemileia vastatrix
(Universidade Federal de Lavras, 2009-10-30) Cardoso, Danielle Cunha; Resende, Mário Lúcio Vilela de
A análise da expressão de genes relacionados à defesa, em resposta ao tratamento com moléculas elicitoras é uma ferramenta importante para estudar os mecanismos de resistência induzida. Este estudo foi realizado com o objetivo de analisar a expressão quantitativa de dois importantes genes, POX e CHI, que codificam para as proteínas quitinase e peroxidase, envolvidas no mecanismo de defesa induzida de plantas a patógenos. Utilizou-se o indutor padrão de resistência acibenzolar-S-metil (ASM) e uma nova formulação constituída por extrato de folhas de café (NEFID) em mudas de cafeeiro susceptíveis à ferrugem, inoculadas e não inoculadas com Hemileia vastatrix. Para a análise do perfil de expressão gênica, utilizou-se a técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR). Os genes CHI e POX foram induzidos em cafeeiro por ambos os tratamentos, tendo os perfis de expressão sido bastante variados em relação ao indutor utilizado e ao gene analisado. ASM induziu a expressão do gene CHI mais rapidamente que NEFID, no entanto, os maiores níveis de expressão de ambos os genes foram observados em plantas induzidas por NEFID. A expressão de genes CHI e POX foi potencializada pelo patógeno em mudas de cafeeiro induzidas, observando-se variações entre os genes, indutores e tempos analisados. Observou-se, ainda, que cafeeiro susceptível à ferrugem eleva os níveis de transcritos dos genes CHI e POX na presença do patógeno e ausência de indutores de resistência.
Seleção de genes endógenos para análises de qRT-PCR em sementes de café
(Embrapa Café, 2013) Schenk, Juliana Camargo Martinati; Cardoso, Danielle Cunha; Maluf, Mirian Perez; Padilha, Lilian
A técnica quantitativa de PCR em tempo real, qRT-PCR, permite analisar a expressão de genes alvo em diferentes condições experimentais. No entanto, a análise precisa dos resultados gerados pela qRT-PCR está diretamente relacionada ao gene normalizador utilizado, o qual deve apresentar expressão constitutiva semelhante para as diferentes amostras/tratamentos avaliados no experimento. Os genes normalizadores escolhidos para as análises em sementes podem diferir daqueles utilizados para as raízes e folhas. Este trabalho teve como objetivo a avaliação de genes normalizadores úteis ao estudo de expressão gênica em sementes. O experimento englobou sementes mantidas nos frutos, sementes desmuciladas mecanicamente ou por meio da fermentação. Essas sementes e frutos foram em seguida, secados à sombra ou em secador até atingirem os teores de água de 12% ou 35%, foram acondicionados em embalagens herméticas e mantidos em câmara fria (10ºC/ 40%UR) por um período de até 12 meses. Foram avaliados 11 genes candidatos a normalizadores, os quais foram escolhidos, previamente, em um estudo de microarranjos. As expressões e estabilidade destes genes foram avaliadas por meio dos softwares geNorm, NormFinder, Delta Ct e BestKeeper. Pela análise conjunta dos resultados obtidos a partir destes softwares, observou-se que a estabilidade de um gene normalizador é variável em função do fator experimental considerado. O gene da actina é indicado como normalizador nas análises de expressão gênica em sementes de café quando forem considerados todos os três fatores avaliados neste estudo, ou seja, processamento, secagem e armazenamento.