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AVALIAÇÃO DE CALOGÊNESE EM SEGMENTOS FOLIARES DE CLONES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE)
(2009) Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Bragado, Ana Cleide Ribeiro; Embrapa - Café
Segmentos foliares de clones de Coffea canephora, 199, 61, 184, 193, 100, 194, 120 e 59, pertencentes ao programa de melhoramento da Embrapa Rondônia, foram avaliados visando à calogênese para obtenção de embriões somáticos. Os explantes foram inoculados em placas de Petri contendo meio de indução de calos (Boxtel & Bertouly), composto por meio MS/2, tiamina (10 mg/L), piridoxina (1 mg/L), ácido nicotínico (1 mg/L), glicina (1 mg/L) e mio- inositol (100 mg/L), caseína (100 mg/L), extrato de malte (400 mg/L), 2,4-D (2,21 mg/L), 2,i-P (1 mg/L), AIB (1 mg/L), acrescido de 2,0% de sacarose, solidificado com 0,8% de ágar e pH ajustado para 5,7. Os cultivos foram mantidos em câmara do tipo BOD, no escuro, sob temperatura de 28°C, durante 30 dias, sendo avaliada ao final desse período a presença de calos. O experimento foi instalado em delineamento inteiramente casualizado, sendo empregadas 15 placas por repetição, cada uma com cinco explantes. Verificou-se que os clones 199, 184, 193, 194 e 59 foram os mais responsivos, observando-se diferença entre os genótipos empregados.
BALANÇO HORMONAL DE 2,4-D, 2iP e AIB PARA CALOGÊNESE EM CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE)
(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Sarubo, Vânia; Embrapa - Café
Considerando a relevância da cultura de Coffea canephora Pierre para o estado de Rondônia e a necessidade de melhoramento para resistência a doenças, realizou-se este trabalho com o objetivo de induzir calos em explantes foliares da variedade Conilon, visando contribuir com o estabelecimento de um protocolo rápido e eficiente para a clonagem de genótipos de interesse. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais da Embrapa Rondônia. Após desinfestação, as folhas foram segmentadas em pedaços de 1 cm2, os quais foram inoculados em meio MS, em concentrações variáveis de 2,4-D (0, 10, 20 e 40 μM), 2iP (0, 5, 10 e 20 μM) e AIB (10 μM). O material foi mantido em câmara tipo BOD, no escuro e com temperatura de 24±2oC. Cada unidade experimental foi constituída de 30 explantes. Avaliou-se o intumescimento dos explantes e a indução de calos, durante os 30 dias subseqüentes. As três combinações mais eficientes na indução de calos foram: 5 μM 2iP + 10 μM AIB; 10 μM 2iP + 10 μM AIB; e 20 μM 2iP + 10 μM AIB.
DESINFESTAÇÃO DE EXPLANTES FOLIARES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE) PARA ESTABELECIMENTO IN VITRO
(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Sarubo, Vânia; Embrapa - Café
A cultura de Coffea canephora Pierre é extremamente relevante na agricultura de Rondônia, o segundo estado produtor e responsável por 15% da produção da variedade Conilon no país. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de um protocolo eficiente de descontaminação de explantes foliares, visando à sua introdução em estudos de calogênese e embriogênese somática. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais da Embrapa Rondônia. As folhas foram lavadas em água bidestilada com auxílio de esponja e detergente. Em câmara de fluxo laminar, as mesmas foram imersas em etanol a 70% (v/v) por 1 minuto e colocadas em soluções de hipoclorito de sódio nas concentrações de 1,00, 1,25 e 1,50% (v/v), nos períodos de 10, 20 e 30 minutos, sendo, em seguida, segmentadas em pedaços de 1 cm2 e inoculados em meio MS. Os cultivos foram mantidos em câmara tipo BOD, no escuro e com temperatura de 24±2oC. Cada unidade experimental foi constituída de 10 explantes. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância, utilizando-se o teste de Tukey, ao nível de 5% de probabilidade, agrupando-se as médias em classes distintas. Foi realizada uma avaliação dez dias após a inoculação. Os aspectos avaliados foram a porcentagem de contaminação e a porcentagem de explantes necrosados e oxidados. Os tratamentos mais eficazes para a desinfestação das folhas foram os que combinaram 30 minutos de imersão com as concentrações de 1,25 e 1,50% de hipoclorito de sódio, resultando em 15% de contaminação nos dois tratamentos. Porém, o tratamento que combinou 30 minutos com 1,50% de hipoclorito resultou em alto nível de oxidação (50%). O tratamento no qual se utilizou 1,00% de hipoclorito por 10 minutos foi o que resultou em maior nível de contaminação, chegando a 60% dos explantes inoculados, além de 10% de oxidação. Considerando-se as variáveis avaliadas, recomenda-se a utilização de 1,25% de hipoclorito, por um período de 30 minutos de imersão.
DETERMINAÇÃO DA CURVA DE CRESCIMENTO DE CALOS EM CAFÉ CONILON (Coffe canephora PIERRE)
(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Sarubo, Vânia; Embrapa - Café
A cultura de calos tem mostrado grande potencial para multiplicação em larga escala de genótipos superiores e em curto espaço de tempo. O objetivo deste trabalho foi induzir a formação de calos em explantes foliares de Coffea canephora var. Conilon, determinar sua curva crescimento e avaliar o desenvolvimento dos calos. Os explantes foram inoculados em meio MS 50 % com 10 mg.L-1 de tiamina, 1 mg.L-1 de piridoxina, 1 mg.L-1 de ácido nicotínico, 1 mg.L-1 de glicina, 100 mg.L-1 de inositol, 100 mg.L-1 de caseína hidrolisada e 400 mg.L-1 de extrato de malte, 20 g.L-1 de sacarose, 8 g.L-1 de ágar e acrescido de AIB (10 μM), 2,4-D (20 μM) e 2iP (10 μM). Para determinar a curva de crescimento, calos foram pesados até o 60o dia de cultivo. A curva de crescimento dos calos apresentou duas fases distintas, lag e exponencial.
INDUÇÃO DE CALOS IN VITRO A PARTIR DE SEGMENTOS FOLIARES DE Coffea canephora CV. CONILON
(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Correia, Arêssa de Oliveira; Reis, Neidiane Farias Costa; Santos, Manuel de Souza; Embrapa - Café
A espécie Coffea canephora possui características genéticas relevantes e que são de amplo interesse em programas de melhoramento vegetal. O objetivo desse trabalho foi avaliar a indução de calos em segmentos foliares de Coffea canephora cv. Conillon, visando facilitar seu posterior desenvolvimento em embriões ou formação de órgãos. Foram utilizados segmentos foliares dessa espécie. Os experimentos foram realizados em condições assépticas, utilizando câmara de fluxo laminar horizontal. Os explantes foram inoculadas em meio MS 50% com diferentes concentrações de ANA (0; 1,0; 2,0 e 5,0 mg.L-1) e AIB (0; 1,0; 3,0 e 5,0 mg.L-1). Na ausência de reguladores de crescimento, não foi observada calogênese. O processo de indução de calos teve início na primeira semana de cultivo. Aos 20 e 30 dias após a inoculação, observou-se grande variação na calogênese entre os tratamentos; aos 40 dias, houve grande manifestação de indução de calos, ou seja, todos os tratamentos com reguladores expressaram calogênese em 100% dos explantes.
NÍVEIS DE REGULADORES DE CRESCIMENTO NA OBTENÇÃO DE CALOS EM SEGMENTOS FOLIARES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE)
(2009) Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Bragado, Ana Cleide Ribeiro; Embrapa - Café
Segmentos foliares de clones de Coffea canephora foram submetidos a diferentes concentrações de 2,4- D visando seu cultivo para produção de embriões somáticos. Os explantes foram inoculados em tubos de ensaio contendo meio de indução de calos (Boxtel & Bertouly), composto por meio MS/2, tiamina (10 mg/L), piridoxina (1 mg/L), ácido nicotínico (1 mg/L), glicina (1 mg/L) e mio-inositol (100 mg/L), caseína (100 mg/L), extrato de malte (400 mg/L), 2,i-P (1 mg/L), AIB (1 mg/L), acrescido de 2,0% de sacarose, solidificado com 0,8% de ágar e pH ajustado para 5,7. A este meio foram acrescidas várias concentrações de 2,4-D (0; 2,5; 5,0 e 10,0 mg/L). Os cultivos foram mantidos em câmara do tipo BOD, no escuro, sob temperatura de 28°C, durante 30 dias, e, ao final desse período, efetuadas as avaliações do desenvolvimento dos calos. O experimento foi instalado em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4 x 5 (quatro clones x cinco concentrações de 2,4-D), sendo empregadas 20 repetições. As menores concentrações de 2,4-D (2,5 e 5,0 mg/L) resultaram em maior crescimento de calos, observando-se redução na velocidade de produção dos mesmos com o emprego de concentrações mais altas. Os clones apresentaram diferentes respostas às concentrações de 2,4-D.
Vegetative vigor conilon coffee and its potential for in vitro callus induction
(Editora UFLA, 2013-10) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Oliveira, Carla Liegi Lonardoni Gomes de; Ramalho, André Rostand; Espíndula, Marcelo Curitiba
Considering the importance of the culture of Coffea canephora in the Brazilian Amazon and the need for genetic improvement of this species for cultivation in the state of Rondonia, he objective of this study was to evaluate the correlation between the initial vigor of clonal plants of C. canephora variety Conilon, under field conditions, and its potential for in vitro propagation. Promising clones belonging to the Genetic Improvement Program of Coffea sp were used Embrapa (Brazilian Agricultural Research Corporation) Rondonia. The plant height, number and length of orthotropic shoots in coffee at 10 months after planting were evaluated. In the laboratory, leaves of plants of each clone were segmented into fragments of 1 cm 2 which were inoculated on MS medium containing half the concentration of salts, AIB (10 μM), 2,4-D (20 μM) and 2iP (10 μM), sugar (20 g cm -3 ) and agar (6 g cm -3 ). Cultures were maintained in a growth chamber under 16 h photoperiod at 2000 lux and 24 ± 2 o C. The callus induction and the percentage of leaf area covered with callus cells were observed within 90 days. Clone 9 showed greater vegetative growth in the field. Only clone 12 showed no callus induced, all other clones were highly responsive to callus induction, and clone 5 showed a higher percentage of leaf area covered with callus cells. There was no phenotypic correlation between early vigor in the field and calogênico potential in vitro, for clones of coffee used.