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Calogênese em anteras de cafeeiro 'Acaiá cerrado' utilizando 2,4D, cinetina e AIB
(2003) Araújo, José Sérgio de; Rezende, Juliana Costa de; Pereira, Alba Regina; Pereira, Bruno de Carvalho; Pasqual, Moacir; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Os meios nutritivos utilizados para a cultura de tecidos fornecem substâncias essenciais para o crescimento e controlam, em grande parte o padrão de desenvolvimento "in vitro". Objetivou-se induzir calos em anteras de cafeeiro mediante a utilização de diferentes concentrações 2,4-D (2,4 diclorofnoxiacético), Cinetina e AIB (Ácido Indolil Butírico) no meio de cultura. O experimento foi conduzido no Laboratório de Cultura de Tecidos da Universidade Federal de Lavras. Os tratamentos constituíram-se de diferentes concentrações de 2,4-D (0; 1; 2 e 4 mg.L- 1) x Cinetina (0; 2; 4 e 8 mg.L- 1) e 2,4 D (0; 0,5; 1 e 2 mg.L- 1) x AIB (0; 0,5; 1 e 2 mg.L-1) acrescido ao meio de cultura "IC". Observou-se a porcentagem de indução de calos e peso da matéria fresca dos calos. Houve interação significativa para 2,4-D e cinetina na indução de calos, enquanto, para peso da matéria fresca de calos somente houve efeito significativo dos fatores isolados. Sendo que o aumento da produção de calos ocorreu até a concentração de 2 mg.L -1 de 2,4-D, ponto a partir do qual, o regulador de crescimento passou a inibir a produção de calos. A melhor resposta para indução de calos foi promovida pela interação entre 2,4-D (2 mg.L -1 ) e cinetina (2 mg.L -1 ): Observou-se, acréscimo no peso da matéria fresca dos calos com adição de até 2 mg.L -1 de 2,4-D, o mesmo comportamento foi observado na concentração de até 4 mg.L -1 de cinetina, sendo que após essas respectivas concentrações houve um decréscimo no peso da matéria fresca do calo. Houve também interação significativa para 2,4-D e AIB para porcentagem de indução de calos e peso da matéria fresca de calos, sendo que, maiores porcentagens de indução de calos ocorreram com 2 mg.L -1 de AIB, na ausência de 2,4-D, com 1 mg.L -1 de 2,4-D combinado com a concentração de 1 mg.L -1 de AIB e com 2 mg.L -1 de 2,4-D, na ausência de AIB. Maior peso da matéria fresca de calos foi observado na interação entre 1 mg.L -1 de 2,4-D e 0,5 mg.L -1 de AIB. Diante dos resultados obtidos pode-se concluir que, a cultivar Acaiá Cerrado responde as diferentes concentrações dos reguladores de crescimento na indução de calos em anteras. Sendo que as combinações mais eficientes foram de 2 mg.L -1 de 2,4-D X 2 mg.L -1 de cinetina e 1 mg.L -1 de 2,4-D x 1 mg.L -1 de AIB.
Embriogênese somática direta em Coffea arabica L. cv. Acaia Cerrado
(Universidade Federal de Lavras, 2005-02-18) Pereira, Alba Regina; Carvalho, Samuel Pereira de
A inexistência de metodologia para a propagação vegetativa de Coffea arábica L. em escala comercial tem sido a maior restrição ao emprego desta técnica para o uso de híbridos de cafeeiros obtidos pelo melhoramento genético. A técnica de cultura de tecidos é uma opção viável para a obtenção de grande número de plantas com alta qualidade genética e fitossanitária, em curto espaço de tempo. Este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de embriogênese somática direta em Coffea arábica cv. Acaiá Cerrado. Na indução direta de embriões somáticos avaliou-se a influência de cinetina (0; 1; 2; 4 e 8mg L-¹) x GA3 (0; 2,5; 5,0; 10 e 20mg L-¹) em segmentos foliares, oriundos de plântulas estabelecidas in vitro, com tamanho médio de lcm². Avaliou-se a influência de sacarose (0; 30; 60; 90 e 120g L-¹) x BAP (0; 2; 4 e 8mg L-¹) em embriões somáticos oriundos da embriogênese direta. No desenvolvimento das plântulas, testaram-se ANA (0; 0,25; 0,5 e 1 mg L-¹) x GA, (0; 2,5; 5,0; 10 e 20mg L-¹) em brotações, com tamanho médio de 1 a 1,5cm, oriundas de embriões somáticos in vitro. Durante a etapa de indução de embriões, o experimento foi conduzido em sala de crescimento em condições de obscuridade e, na etapa de desenvolvimento dos embriões e plântulas, os explantes foram submetidos à irradiância em torno de 32uM m-² s-¹ temperatura de 25 ± 1°C e fotoperíodo de 16 horas. Na aclimatização, avaliou-se o efeito da presença e ausência de raízes em plântulas de cafeeiro oriundas de embriogênese somática direta. A ação combinada entre cinetina (5,6mg L-¹) e GA3(10mg L-¹) estimula a indução de embriões somáticos pela via direta. A adição de 90g L-¹) de sacarose e 2mg L-¹ de BAP ao meio de cultura proporciona melhor crescimento in vitro de embriões de cafeeiro. Utilizando-se 0,5mg L-¹ de ANA e 14,2mg L-¹ de GA3 obtém-se maior comprimento da parte aérea de brotações de C. arábica L. cv. Acaiá Cerrado. O enraizamento de brotações de cafeeiro cultivar Acaiá Cerrado pode ocorrer simultaneamente ao processo de aclimatização.
Embriogênese somática direta em foliares de Coffea arabica L. cv. acaiá cerrado: efeito de cinetina e ácido giberélico
(Editora UFLA, 2007-03) Pereira, Alba Regina; Carvalho, Samuel Pereira de; Pasqual, Moacir; Santos, Flávia Carvalho
Objetivou-se estudar o efeito da cinetina, GA 3 e ANA na indução in vitro de embriões somáticos de cafeeiro pela via direta. Segmentos foliares retirados de plântulas cultivadas in vitro foram inoculados em meio de cultura MS com 50% dos sais contendo as seguintes combinações de cinetina (0; 1; 2; 4 e 8 mg L -1 ) e GA 3 (0; 2,5; 5; 10 e 20 mg L -1 ). Os meios de cultura utilizados tiveram pH ajustado para 5,8 ± 1 antes de serem autoclavados. O experimento foi mantido em sala de crescimento a 25 ± 1°C. Avaliou-se número total de embriões somáticos, o número de embriões cotiledonares, o número de embriões torpedo e a média dos comprimentos dos embriões. A ação combinada entre cinetina, GA 3 e ANA estimulou a indução de embriões somáticos pela via direta. O maior comprimento de embriões foi observado quando se utilizou 8 mg L -1 de cinetina e 8,0 mg L -1 de ANA ou 17 mg L -1 de GA 3 e 8,0 mg L -1 de ANA isoladamente.
Embriogênese somática indireta em explantes foliares de Coffea arabica L. cv. Obatã
(Editora UFLA, 2003-01) Maciel, Anna Lygia de Rezende; Pasqual, Moacir; Pereira, Alba Regina; Rezende, Juliana Costa de; Silva, Adriano Bortolotti da; Dutra, Leonardo Ferreira
Objetivou-se, com este trabalho, estudar a embriogênese somática indireta em Coffea arabica L. cv. Obatã, incluindo as etapas de indução de calos, diferenciação, regeneração e formação de embriões. Segmentos foliares retirados de plantas em condições de campo foram desinfestados com álcool 70% por 1 e hipoclorito de sódio 1% durante 15 e inoculados em meio IC (indução de calos) suplementado de 2,4-D (0, 1, 2 e 4 mg.L -1) e Cinetina (0, 2, 4 e 8 mg.L -1). Posteriormente, os calos foram transferidos para o meio DC (diferenciação de calos), adicionado de diferentes concentrações de 2,4-D (0, 1, 2 e 4 mg.L -1) e BAP (0, 2, 4 e 8 mg.L -1); em seguida, durante a etapa de regeneração, os calos embriogênicos friáveis foram inoculados em meio R suplementado de BAP (0, 2, 4 e 6 mg.L -1 ) e sacarose (0, 15, 30, 45 e 60 g.L -1). Os meios de cultura utilizados tiveram pH ajustado para 5,6 1 antes de serem autoclavados. Os experimentos foram mantidos em sala de crescimento a 26 1 0 C. Durante as etapas de indução e diferenciação de calos, os experimentos ficaram em condições de obscuridade, e na etapa de regeneração, os experimentos foram mantidos sob fotoperíodo de 16 horas e intensidade luminosa de 35 mol.m -2 .s -1 . Concluiu-se que a combinação entre 4 mg.L -1 de 2,4-D e 2 mg.L -1 de cinetina favoreceu a indução de calos primá- rios mistos. Maior freqüência de calos embriogênicos friáveis ocorreu na presença de BAP (8 mg.L -1), associado ou não ao 2,4-D, e maior número de embriões por explante foram obtidos quando utilizou-se sacarose (30 g.L -1 ) e BAP (3 mg.L -1).
Indução in vitro de calogênese em anteras de cafeeiro utilizando diferentes níveis de 2,4D e citocinina
(2003) Araújo, José Sérgio de; Ribeiro, Bruno de Carvalho; Pereira, Alba Regina; Rezende, Juliana Costa de; Pasqual, Moacir; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Uma das características da cultura de tecidos vegetais é a possibilidade de indução do crescimento e da morfogênese a partir de explantes in vitro. Os meios nutritivos utilizados para a cultura de células, tecidos e órgãos de plantas fornecem as substâncias essenciais para o crescimento dos tecidos e controlam em grande parte, o padrão de desenvolvimento in vitro, daí a importância de se conhecerem detalhes dos componentes e propriedades dos meios de cultura, a metodologia para preparar um meio de cultura bem como a relação e necessidade dos reguladores de crescimento que irão compor o meio de cultura. Para tanto, com vistas á indução de calos em anteras de cafeeiro, submeteram-se tais explantes florais do arábica cultivar ‘Rubi’ e de uma população segregante F 2 , às diferentes concentrações de 2,4 D ( 0, 1, 2, e 4 mg.L -1 ) combinadas com cinetina (0, 2, 4, e 8 mg.L -1 ).adicionadas ao meio de cultura "IC". As variáveis observadas foram porcentagem de indução de calos e peso da matéria fresca dos calos. Observou-se a interação significativa entre as concentrações de 2,4-D e cinetina para a porcentagem de indução de calos e peso da matéria fresca de calos da população segregante. Sendo que a combinação entre 1 mg.L -1 de 2,4-D e 8 mg.l -1 de cinetina promoveu a maior indução de calos, com valor aproximado de 32,18%. Observando-se que após um máximo a concentração de regulador de crescimento passou a inibir a indução de calos. Foi também observada interação significativa entre as concentrações de 2,4-D e cinetina para a porcentagem de indução de calos e peso da matéria fresca de calos para a cultivar ‘Rubi’, sendo que a combinação entre 2 mg.L -1 de 2,4-D e 4 mg.L -1 de cinetina promoveu a maior indução de calos, com valor aproximado de 40%. Pelos resultados obtidos para indução de calos em anteras de cafeeiro, independente do material genético, pode-se concluir que é necessária uma auxina juntamente com uma citocinina, e ainda que ambos os materiais respondem de forma diferente às concentrações dos reguladores de crescimento 2,4-D e cinetina na indução de calos em anteras. Sendo que para a cultivar ‘Rubi’ a combinação mais eficiente foi de 2 mg.L -1 , de 2,4-D x 4 mg.L -1 de cinetina, enquanto que para a população segregante F 2 , a combinação mais eficiente foi de 1 mg.L -1 de 2,4-D e 8 mg.L -1 de cinetina.