USP - Dissertações
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Item Sequenciamento e análise da variabilidade genética de vírus transmitidos por ácaros do gênero Brevipalpus no Brasil(Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” - Universidade de São Paulo, 2016) Jesus, Camila Chabi de; Freitas-Astúa, Juliana deAcredita-se que o Brasil é o centro de diversidade de vírus transmitidos por ácaros do gênero Brevipalpus (VTB). Alguns desses VTB infectam culturas fundamentais para o agronegócio brasileiro como citros e café, além de maracujá e de várias plantas ornamentais. Na última década os genomas de dois deles, Citrus leprosis virus C (CiLV-C) e Coffee ringspot virus (CoRSV) foram sequenciados, mas ainda é escasso o conhecimento sobre a diversidade genética e processos evolutivos envolvidos na população dessas espécies. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi caracterizar molecularmente novas estirpes de CiLV-C e CoRSV que infectam citros e café, respectivamente. E revelar as relações filogenéticas com espécies de VTB conhecidas, assim como avaliar a variabilidade genética da população de CiLV- C no Brasil. Para o estudo de CiLV-C, 47 amostras de Citrus sinensis apresentando sintomas típicos da leprose dos citros foram coletadas em diferentes regiões do Brasil no período de 2011-2015. A presença de CiLV-C foi detectada por RT-PCR em todas as amostras coletadas e, posteriormente, foi realizado o sequenciamento de quatro regiões do genoma viral (p29, p15, RI e MP) de cada isolado. As sequências obtidas foram utilizadas no estudo de filogenia e variabilidade da população de CiLV-C no Brasil. Foi demonstrado que a população de CiLV-C apresenta uma variabilidade relativamente baixa; entretanto, foi identificada a existência de duas linhagens dentro da espécie, nomeadas Cor e SJRP. Os genomas completos de CiLV-C SJRP e também do dicorhavirus tentativo CoRSV identificado em Limeira, SP, foram obtidos mediante o sequenciamento de RNA de pequeno tamanho (siRNA). Cada sequência foi validada mediante o sequenciamento de fragmentos gerados por RT-PCR ao longo do genoma. CiLV-C SJRP apresenta cerca de 85% de identidade de nucleotídeo com o membro-tipo do gênero Cilevirus e exibe evidências de recombinação com isolados da linhagem Cor, a prevalente no território brasileiro. Globalmente, o genoma de CoRSV Limeira apresenta mais de 90% de identidade de nucleotídeo com isolado CoRSV Lavras, o que indica que ambos os isolados são membros da mesma espécie tentativa de dichorhavirus.Item Desenvolvimento de armadilha de auto-inoculação para o controle de Hypothenemus hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera: Curculionidae) com Beauveria bassiana (Bals.) Vuil (Ascomycota: Hypocreales) em tecido sintético(Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” - Universidade de São Paulo, 2013) Mota, Luiz Henrique Costa; Delalibera Júnior, ItaloO controle de Hypothenemus hampei é realizado basicamente com uso de inseticidas químicos, especialmente aqueles a base de endossulfan, cuja comercialização será proibida no Brasil a partir de julho de 2013. Diante disso, outras estratégias devem ser integradas buscando-se o controle desta praga com menor impacto ao ambiente. Nesse contexto, o fungo Beauveria bassiana destaca- se como um dos agentes de controle biológicos mais promissores. Neste estudo, buscou-se a associação da técnica de impregnação de tecido têxtil com B. bassiana associado à armadilha contendo a mistura de alcoóis metanol: etanol (1:1 v/v) como atraentes químicos para H. hampei, visando a auto-inoculação e disseminação do fungo pelo inseto, visando o seu controle. Inicialmente foi determinado em laboratório, a virulência de nove isolados de B. bassiana, através da pulverização de suspensões de 10 7 conídios.mL -1 , diretamente sobre adultos de H. hampei. Todos os isolados apresentaram baixa virulência ao inseto, com mortalidade máxima de 38,5%. O isolado ESALQ-PL63 foi escolhido para dar continuidade aos estudos por possuir registro de comercialização. Posteriormente, sete tecidos têxteis sintéticos foram avaliados quanto à produção do isolado selecionado sobre sua superfície em duas condições de luz (fotofase de 0 e 12 horas). O tecido sintético Lã “Sherpa” foi selecionado por permitir uma maior produção de conídios nas duas condições testadas, atingindo até 5,44 × 10 8 conídios.cm -2 . A exposição de H. hampei ao tecido com o fungo por apenas 5 segundos foi suficiente para causar 88,5% de mortalidade dos insetos. Em área de café sombreado foram conduzidos dois experimentos para avaliar uma armadilha de auto-inoculação contendo o patógeno produzido sobre o tecido. Foram usadas duas armadilhas controle, sendo uma armadilha de auto- inoculação sem fungo e uma armadilha de eficiência reconhecida (modelo IAPAR). A eficiência de coleta da armadilha de auto-inoculação com o fungo foi menor do que a armadilha IAPAR, mas esta se mostrou eficiente na contaminação e mortalidade dos insetos pelo fungo. No primeiro experimento, a mortalidade confirmada pelo patógeno no último dia de avaliação (151 dias) foi de 64,7%. A viabilidade dos conídios passou de 98,3%, logo após a montagem das armadilhas, para 86,9% após 65 dias. Após160 dias a viabilidade reduziu para 44,0%. No segundo experimento, a última avaliação foi realizada após 40 dias, sendo nesta data observada mortalidade confirmada de 89,9% e viabilidade dos conídios de 78,1%. Em ambos os experimentos a concentração de conídios reduziu-se ao longo do tempo. O sistema de auto-inoculação apresentou resultados promissores, mas sendo necessárias alterações na armadilha para aumentar a captura de insetos e estudos epizootiológicos para avaliar a capacidade de disseminação da doença no campo pelos insetos que passaram pela armadilha.Item Ocorrência de poliandria na broca-do-café, Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae: Scolytinae)(Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” - Universidade de São Paulo, 2014) Costa, Camila Moreira; Bento, José Maurício SimõesEstudos relacionados ao sistema de acasalamento nos insetos permite a compreensão dos aspectos evolutivos do comportamento reprodutivo de uma espécie. Esses sistemas são classificados, geralmente, pelo número de parceiros sexuais de um indivíduo durante um período de acasalamento. Em fêmeas, pode ocorrer monogamia, quando a cópula for realizada com somente um macho e, poliandria, quando há ocorrência de múltiplas cópulas com machos diferentes ou com o mesmo macho (cópulas repetidas). Em espécies como a broca-do-café, Hypothenemus hampei, que passam a maior parte de sua vida (ovo a adulto) no interior do fruto de café e possuem ciclo multivoltino os estudos envolvendo o sistema de acasalamento são escassos. Portanto, este trabalho visou estudar o acasalamento da broca-do-café, avaliando se há ocorrência de poliandria e os possíveis efeitos de múltiplas cópulas e cópulas repetidas sobre a bioecologia da fêmea e sua prole. Os resultados revelaram pela primeira vez a ocorrência de poliandria em H. hampei. Foi observado um maior número de recópulas em fêmeas colonizadoras, quando comparado com as fêmeas em oviposição, sugerindo que a condição fisiológica da fêmea foi um fator decisivo no momento da recópula. Além disso, a duração da recópula foi menor nas fêmeas em oviposição do que em fêmeas colonizadoras. A fecundidade foi afetada negativamente pela poliandria, sugerindo a presença de um custo associado a realização de múltiplas cópulas. A longevidade não foi influenciada pelo sistema de acasalamento, demonstrando que a poliandria não influenciou o tempo de vida das fêmeas. A recuperação larva:adulto em H. hampei não foi influenciada pelo sistema de acasalamento. Por outro lado, a taxa de eclosão de larvas foi superior na condição de poliandria, comparativamente à monogamia