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Item In vitro pollination and fluorescence microscopy for characterization of gametophytic selfincompatibility of Coffea canephora Pierre ex A. Froehner(Crop Breeding and Applied Biotechnology, 2021-11-20) Souza, Carolina Augusto de; Rocha, Rodrigo Barros; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Lopes, Tatiane Almeida; Teixeira, Alexsandro Lara; Espindula, Marcelo CuritibaThe objectives of this study were to optimize in vitro pollination and fluorescence microscopy procedures to characterize the gametophytic selfincompatibility of Coffea canephora genotypes. For that purpose, 115 in vitro pollinations were carried out among 30 parent plants of the Conilon (17) and Robusta (13) botanical varieties. Tester plants of compatibility groups I, II, and III were used as pollen grain donors. On the day of anthesis, pollen grains of the donor genotypes were transferred in vitro to one of the sides of the bifid stigma of each receptor flower. After 30 hours, the development of the pollen tubes was evaluated in fluorescence microscopy. Eleven genotypes (37%) were classified in compatibility Group I, thirteen (43%) in Group II, and six (20%) in Group III. In vitro pollination allowed reduction in the time necessary to diagnose compatibility, without exhibiting contamination caused by the presence of pollen grains of non-donor plants.Item Expression of self-incompatibility in Coffea canephora genotypes grown in the western Amazon(Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária - Embrapa, 2022-12-05) Depolo, Rodrigo Prado; Rocha, Rodrigo Barros; Souza, Carolina Augusto de; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Espindula, Marcelo Curitiba; Teixeira, Alexsandro LaraThe objective of this work was to characterize the expression of gametophytic self-incompatibility in a Coffea canephora breeding population, to assist in the management and development of new cultivars. For that purpose, 550 in vitro pollinations were carried out among 62 parent plants, of which 27 were from the conilon botanical variety and 35 from the robusta. Thirty-two genotypes compatible with all previously known testers were identified, suggesting the existence of new compatibility groups. From these results, hybridizations were carried out in a complete diallel design with reciprocal crosses to characterize new test plants. Based on the compatibility response with the test plants, the genotypes were clustered into the six following groups: group I, 11 (17.74%) genotypes; group II, 13 (20.97%); group III, 6 (9.68%); group IV, 9 (14.52%); group V, 8 (12.90%); and group VI, 15 (24.19%). The genotypes of the botanical variety robusta show a higher frequency of plants in compatibility group VI and a greater genetic variability, whereas those of the conilon variety have a higher frequency of plants in compatibility group II. The identification of new compatibility groups assists in new management practices that seek to increase the efficiency of pollination by favoring, through natural means, fully compatible crosses.Item Caracterização da autoincompatibilidade gametofítica de acessos de banco ativo de germoplasma de Coffea canephora(Embrapa Café, 2019-10) Souza, Carolina Augusto de; Vieira Júnior, José Roberto; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Teixeira, Alexsandro Lara; Ramalho, André Rostand; Espindula, Marcelo Curitiba; Ferrão, Maria Amélia Gava; Rocha, Rodrigo BarrosO Coffea canephora é uma espécie alógama que apresenta autoincompatibilidade gametofítica (AIG), de expressão governada por um único gene multialélico, identificado pela letra S. Na cafeicultura clonal o plantio de clones não compatíveis pode reduzir a produtividade e a qualidade dos grãos devido a menor eficiência da polinização e aumento na taxa de grãos do tipo moca. O objetivo desse trabalho é caracterizar a autoincompatibilidade de acessos do Banco de Germoplasma da Embrapa quantificando a diversidade alélica e genotípica de uma população de melhoramento, fornecendo subsídios para manipulação dessa característica no desenvolvimento de novas variedades. Para isso foram realizadas hibridações in vitro entre 28 genótipos de um campo de hibridação contendo 80 matrizes das variedades botânicas Conilon e Robusta. Os procedimentos de hibridação in vitro se iniciaram um dia antes da antese, com a proteção dos ramos doadores utilizando sacos de papel do tipo kraft de 55x25cm e transferência dos estigmas das plantas receptora para meio de cultura (sacarose 10%). Os genótipos doadores de grãos de pólen BRS 1216, BRS 2299 e BRS 3193 foram utilizados como plantas testadoras dos grupos de compatibilidade I, II e III respectivamente. A polinização in vitro foi realizada no dia da antese com a raspagem dos grãos de pólen que é colocado em contato com apenas um dos dois estigmas de cada pistilo bífido. A compatibilidade das hibridações foi avaliada utilizando coloração com azul de anilina a 1% para visualização do desenvolvimento dos tubos polínicos utilizando microscopia de fluorescência. A eficiência de polinização foi estimada pela relação entre o número de estigmas fertilizados e o número total de estigmas polinizados. A utilização de plantas testadoras dos grupos de compatibilidade permitiu reduzir o número de hibridações necessárias para caracterizar os genótipos das plantas. A polinização in vitro resultou em uma taxa média de pegamento de 60,3% com amplitude de 11 a 85% de pegamento nas hibridações compatíveis. Entre os 28 clones caracterizados 17 genótipos (61%) foram incompatíveis com a planta testadora do grupo I, 5 clones (18%) apresentaram incompatibilidade com a planta testadora do grupo II e 6 clones (21%) foram incompatíveis com o testador do grupo III. Os resultados parciais da caracterização dessa população de melhoramento indicam a distribuição dos genótipos em três grupos de compatibilidade com as frequências dos alelos S 1 , S 2 e S 3 , estimadas em 0,39, 0,41 e 0,20 respectivamente. Apesar da diferença observada entre as frequências alélicas, as frequências genotípicas não diferem das proporções esperadas para uma população em Equilíbrio de Hardy Weinberg (EHW), com 1% de probabilidade. A caracterização do genótipo do gene S é importante, impactando na eficiência de polinização desse cultivo, com o favorecimento natural de cruzamentos compatíveis.Item Vegetative vigor conilon coffee and its potential for in vitro callus induction(Editora UFLA, 2013-10) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Oliveira, Carla Liegi Lonardoni Gomes de; Ramalho, André Rostand; Espíndula, Marcelo CuritibaConsidering the importance of the culture of Coffea canephora in the Brazilian Amazon and the need for genetic improvement of this species for cultivation in the state of Rondonia, he objective of this study was to evaluate the correlation between the initial vigor of clonal plants of C. canephora variety Conilon, under field conditions, and its potential for in vitro propagation. Promising clones belonging to the Genetic Improvement Program of Coffea sp were used Embrapa (Brazilian Agricultural Research Corporation) Rondonia. The plant height, number and length of orthotropic shoots in coffee at 10 months after planting were evaluated. In the laboratory, leaves of plants of each clone were segmented into fragments of 1 cm 2 which were inoculated on MS medium containing half the concentration of salts, AIB (10 μM), 2,4-D (20 μM) and 2iP (10 μM), sugar (20 g cm -3 ) and agar (6 g cm -3 ). Cultures were maintained in a growth chamber under 16 h photoperiod at 2000 lux and 24 ± 2 o C. The callus induction and the percentage of leaf area covered with callus cells were observed within 90 days. Clone 9 showed greater vegetative growth in the field. Only clone 12 showed no callus induced, all other clones were highly responsive to callus induction, and clone 5 showed a higher percentage of leaf area covered with callus cells. There was no phenotypic correlation between early vigor in the field and calogênico potential in vitro, for clones of coffee used.Item DESINFESTAÇÃO DE EXPLANTES FOLIARES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE) PARA ESTABELECIMENTO IN VITRO(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Sarubo, Vânia; Embrapa - CaféA cultura de Coffea canephora Pierre é extremamente relevante na agricultura de Rondônia, o segundo estado produtor e responsável por 15% da produção da variedade Conilon no país. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de um protocolo eficiente de descontaminação de explantes foliares, visando à sua introdução em estudos de calogênese e embriogênese somática. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais da Embrapa Rondônia. As folhas foram lavadas em água bidestilada com auxílio de esponja e detergente. Em câmara de fluxo laminar, as mesmas foram imersas em etanol a 70% (v/v) por 1 minuto e colocadas em soluções de hipoclorito de sódio nas concentrações de 1,00, 1,25 e 1,50% (v/v), nos períodos de 10, 20 e 30 minutos, sendo, em seguida, segmentadas em pedaços de 1 cm2 e inoculados em meio MS. Os cultivos foram mantidos em câmara tipo BOD, no escuro e com temperatura de 24±2oC. Cada unidade experimental foi constituída de 10 explantes. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância, utilizando-se o teste de Tukey, ao nível de 5% de probabilidade, agrupando-se as médias em classes distintas. Foi realizada uma avaliação dez dias após a inoculação. Os aspectos avaliados foram a porcentagem de contaminação e a porcentagem de explantes necrosados e oxidados. Os tratamentos mais eficazes para a desinfestação das folhas foram os que combinaram 30 minutos de imersão com as concentrações de 1,25 e 1,50% de hipoclorito de sódio, resultando em 15% de contaminação nos dois tratamentos. Porém, o tratamento que combinou 30 minutos com 1,50% de hipoclorito resultou em alto nível de oxidação (50%). O tratamento no qual se utilizou 1,00% de hipoclorito por 10 minutos foi o que resultou em maior nível de contaminação, chegando a 60% dos explantes inoculados, além de 10% de oxidação. Considerando-se as variáveis avaliadas, recomenda-se a utilização de 1,25% de hipoclorito, por um período de 30 minutos de imersão.Item AVALIAÇÃO DE CALOGÊNESE EM SEGMENTOS FOLIARES DE CLONES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE)(2009) Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Bragado, Ana Cleide Ribeiro; Embrapa - CaféSegmentos foliares de clones de Coffea canephora, 199, 61, 184, 193, 100, 194, 120 e 59, pertencentes ao programa de melhoramento da Embrapa Rondônia, foram avaliados visando à calogênese para obtenção de embriões somáticos. Os explantes foram inoculados em placas de Petri contendo meio de indução de calos (Boxtel & Bertouly), composto por meio MS/2, tiamina (10 mg/L), piridoxina (1 mg/L), ácido nicotínico (1 mg/L), glicina (1 mg/L) e mio- inositol (100 mg/L), caseína (100 mg/L), extrato de malte (400 mg/L), 2,4-D (2,21 mg/L), 2,i-P (1 mg/L), AIB (1 mg/L), acrescido de 2,0% de sacarose, solidificado com 0,8% de ágar e pH ajustado para 5,7. Os cultivos foram mantidos em câmara do tipo BOD, no escuro, sob temperatura de 28°C, durante 30 dias, sendo avaliada ao final desse período a presença de calos. O experimento foi instalado em delineamento inteiramente casualizado, sendo empregadas 15 placas por repetição, cada uma com cinco explantes. Verificou-se que os clones 199, 184, 193, 194 e 59 foram os mais responsivos, observando-se diferença entre os genótipos empregados.Item BALANÇO HORMONAL DE 2,4-D, 2iP e AIB PARA CALOGÊNESE EM CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE)(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Sarubo, Vânia; Embrapa - CaféConsiderando a relevância da cultura de Coffea canephora Pierre para o estado de Rondônia e a necessidade de melhoramento para resistência a doenças, realizou-se este trabalho com o objetivo de induzir calos em explantes foliares da variedade Conilon, visando contribuir com o estabelecimento de um protocolo rápido e eficiente para a clonagem de genótipos de interesse. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais da Embrapa Rondônia. Após desinfestação, as folhas foram segmentadas em pedaços de 1 cm2, os quais foram inoculados em meio MS, em concentrações variáveis de 2,4-D (0, 10, 20 e 40 μM), 2iP (0, 5, 10 e 20 μM) e AIB (10 μM). O material foi mantido em câmara tipo BOD, no escuro e com temperatura de 24±2oC. Cada unidade experimental foi constituída de 30 explantes. Avaliou-se o intumescimento dos explantes e a indução de calos, durante os 30 dias subseqüentes. As três combinações mais eficientes na indução de calos foram: 5 μM 2iP + 10 μM AIB; 10 μM 2iP + 10 μM AIB; e 20 μM 2iP + 10 μM AIB.Item NÍVEIS DE REGULADORES DE CRESCIMENTO NA OBTENÇÃO DE CALOS EM SEGMENTOS FOLIARES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE)(2009) Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Bragado, Ana Cleide Ribeiro; Embrapa - CaféSegmentos foliares de clones de Coffea canephora foram submetidos a diferentes concentrações de 2,4- D visando seu cultivo para produção de embriões somáticos. Os explantes foram inoculados em tubos de ensaio contendo meio de indução de calos (Boxtel & Bertouly), composto por meio MS/2, tiamina (10 mg/L), piridoxina (1 mg/L), ácido nicotínico (1 mg/L), glicina (1 mg/L) e mio-inositol (100 mg/L), caseína (100 mg/L), extrato de malte (400 mg/L), 2,i-P (1 mg/L), AIB (1 mg/L), acrescido de 2,0% de sacarose, solidificado com 0,8% de ágar e pH ajustado para 5,7. A este meio foram acrescidas várias concentrações de 2,4-D (0; 2,5; 5,0 e 10,0 mg/L). Os cultivos foram mantidos em câmara do tipo BOD, no escuro, sob temperatura de 28°C, durante 30 dias, e, ao final desse período, efetuadas as avaliações do desenvolvimento dos calos. O experimento foi instalado em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4 x 5 (quatro clones x cinco concentrações de 2,4-D), sendo empregadas 20 repetições. As menores concentrações de 2,4-D (2,5 e 5,0 mg/L) resultaram em maior crescimento de calos, observando-se redução na velocidade de produção dos mesmos com o emprego de concentrações mais altas. Os clones apresentaram diferentes respostas às concentrações de 2,4-D.Item DETERMINAÇÃO DA CURVA DE CRESCIMENTO DE CALOS EM CAFÉ CONILON (Coffe canephora PIERRE)(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Sarubo, Vânia; Embrapa - CaféA cultura de calos tem mostrado grande potencial para multiplicação em larga escala de genótipos superiores e em curto espaço de tempo. O objetivo deste trabalho foi induzir a formação de calos em explantes foliares de Coffea canephora var. Conilon, determinar sua curva crescimento e avaliar o desenvolvimento dos calos. Os explantes foram inoculados em meio MS 50 % com 10 mg.L-1 de tiamina, 1 mg.L-1 de piridoxina, 1 mg.L-1 de ácido nicotínico, 1 mg.L-1 de glicina, 100 mg.L-1 de inositol, 100 mg.L-1 de caseína hidrolisada e 400 mg.L-1 de extrato de malte, 20 g.L-1 de sacarose, 8 g.L-1 de ágar e acrescido de AIB (10 μM), 2,4-D (20 μM) e 2iP (10 μM). Para determinar a curva de crescimento, calos foram pesados até o 60o dia de cultivo. A curva de crescimento dos calos apresentou duas fases distintas, lag e exponencial.Item INDUÇÃO DE CALOS IN VITRO A PARTIR DE SEGMENTOS FOLIARES DE Coffea canephora CV. CONILON(2009) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Correia, Arêssa de Oliveira; Reis, Neidiane Farias Costa; Santos, Manuel de Souza; Embrapa - CaféA espécie Coffea canephora possui características genéticas relevantes e que são de amplo interesse em programas de melhoramento vegetal. O objetivo desse trabalho foi avaliar a indução de calos em segmentos foliares de Coffea canephora cv. Conillon, visando facilitar seu posterior desenvolvimento em embriões ou formação de órgãos. Foram utilizados segmentos foliares dessa espécie. Os experimentos foram realizados em condições assépticas, utilizando câmara de fluxo laminar horizontal. Os explantes foram inoculadas em meio MS 50% com diferentes concentrações de ANA (0; 1,0; 2,0 e 5,0 mg.L-1) e AIB (0; 1,0; 3,0 e 5,0 mg.L-1). Na ausência de reguladores de crescimento, não foi observada calogênese. O processo de indução de calos teve início na primeira semana de cultivo. Aos 20 e 30 dias após a inoculação, observou-se grande variação na calogênese entre os tratamentos; aos 40 dias, houve grande manifestação de indução de calos, ou seja, todos os tratamentos com reguladores expressaram calogênese em 100% dos explantes.