Produção de plantas transgênicas de café resistentes ao herbicida glufosinato de amônio

Abstract

Plantas transgênicas de Coffea canephora P. resistentes ao herbicida glufosinato de amônio foram regeneradas a partir de explantes foliares co-cultivados com Agrobacterium tumefaciens EHA105 contendo o plasmídio pCAMBIA3301, que contém os genes bar e uidA ambos sob controle do promotor 35S ou pIBI3 (3300 contendo o gene da ACC oxidase, antisenso) ou ainda bombardeados com o plasmídio pCAMBIA3301. Embriogênese somática direta foi induzida no meio contendo ¼ dos macros e metade dos micronutrientes do meio MS, constituintes orgânicos do meio B5 e 30 g.L-1 de sacarose, suplementado com 5mM N6 - (2-isopentenil)adenina (2-iP) e 10 mM de glufosinato de amônio para seleção de embriões transgênicos putativos. A presença e a integração do gene bar foram confirmados pelas análises de PCR e Southern blot. As plantas transgênicas pulverizadas com 1600 mg.L-1 do herbicida Finale que contém glufosinato como ingrediente ativo, não apresentaram sintomas de toxidez, mantiveram a coloração e continuaram crescendo normalmente na aclimatação ex vitro.Transgenic plants of Coffea canephora P. resistant to the herbicide ammonium glufosinate were regenerated from leaf explants after co-culture with Agrobacterium tumefaciens strain EHA105 harboring either pCambia3301, a plasmid that contains the bar and the uidA genes both under control of 35S promote or pIBI3 (3300 containg the ACC oxidase gene) or bombarded with the pCAMBIA3301 plasmid. Direct somatic embryogenesis was induced on basal medium contained ¼ strength macro salts and half strength micro salts of MS medium, organic constituents of B5 medium and 30 g.L-1 sucrose supplemented with 5 mM N 6 - (2-isopentenyl)adenine (2-iP). Ten mM ammonium glufosinate was used for putative transgenic somatic embryos selection. Presence and integration of the bar gene were confirmed by PCR and Southern blot analysis. Selected transgenic coffee plants sprayed with up to 1600 mg.L-1 of Finale, a herbicide containing glufosinate as the active ingredient, not show any symptom of toxicity, retained their pigmentation and continued to grow normally during ex vitro acclimation.