Análise citogenética de Coffea canephora

Abstract

Com o objetivo de obter cromossomos de C. canephora (2n=2x=22) morfologicamente adequados para serem caracterizados citogeneticamente e identificados para montagem do cariograma desta espécie, empregaram-se novas técnicas citogenéticas associadas às metodologias computacionais de análise de imagens. Sementes foram germinadas em placas de Petri a 28oC, em estufa. Raízes com aproximadamente 0,5 cm foram pré-tratadas com brometo de etídeo a 10 µM com 100 µl de DMSO, por 24h a 5oC. Fixaram-se as pontas de raízes excisadas em solução de metanol: ácido acético (3:1), armazenando-as -20oC. Após 24 horas, as pontas de raízes foram digeridas enzimaticamente com solução de Flaxzyme diluída em água destilada (1:60) por 10 minutos à temperatura ambiente. Prepararam-se as lâminas por dissociação celular do meristema, simultâneamente com gotejamento da solução fixadora, sendo elas, em seguida, secadas ao ar. A coloração foi obtida com solução de Giemsa a 2% em tampão fosfato pH 6,8. As metodologias empregadas permitiram a obtenção de cromossomos com alta qualidade citogenética e resolução adequada para caracterização de cada par de homólogos, aparentemente semelhantes, quando obtidos por meio de técnicas convencionais. A caracterização da morfologia desses cromossomos resultou em dados que diferiram daqueles relatados na literatura.With the objective of obtaining chromosomes morphologically adequate to make a caryogram of this species, it was used a new cytogenetics technique associated to a computer methodology of the image analysis. Seeds were germinated in Petri dishes in the dark at 28 °C. Root 0.5 cm in length were pre-treated at 10 µM ethidium bromide solution plus 100 µl DMSO, for 24 h at 5oC. Root tips were fixed in fresh cold methanol-acetic acid (3:1) and were stored at -20 °C. One day later the root tips were macerated using a Flaxzym enzymatic solution diluted in distilled water (1:60), for 10 min at room temperature. The chromosome slides were prepared by meristem celular dissociations with dropping fixing solution at the same time, air drying and stained with Giemsa 2% in phosphate buffer, pH 6.8, for 5 min. The methodologies used show a good definition to help chromosome identification, apparently similars when obtained by conventional techniques. The chromosomes characterisation as showing in this study do not agree with those related by other authors.