Estudo dos cromossomos de Coffea arabica por métodos de análise de imagem

Abstract

O Coffea arabica, apesar da grande importância econômica, tem sido pouco estudado citogeneticamente. O pequeno tamanho de seus cromossomos tem dificultado análises morfológicas mais detalhadas. No presente estudo, foram utilizadas técnicas citogenéticas com dissociação celular e secagem ao ar para obtenção de cromossomos morfologicamente mais preservados. Metodologias computacionais foram realizadas para obter medições mais precisas, ampliações de imagens cromossômicas, além da montagem do cariograma desta espécie. Sementes de C. arabica foram germinadas em placas de Petri à 28o C, no escuro. Meristemas radiculares foram pré-tratados com solução de Trifluralin a 3mM com 100ml de DMSO, por 18h à 5o C. A fixação foi realizada com solução de metanol ácido acético (3:1) com três trocas. Após 24 horas, as raízes foram digeridas enzimaticamente com Flaxzyme diluída em água destilada (1:10). As lâminas foram preparadas por dissociação do meristema, gotejamento e técnica de secagem ao ar. A coloração foi realizada pela metodologia convencional de Giemsa à 2% em tampão fosfato de pH 6,8. As técnicas permitiram a identificação de cada par de homólogos, possibilitando a obtenção do cariograma do C. arabica, com cromossomos bem definidos, além de proporcionarem a observação de diferenças e similaridades quanto a morfologia.The Coffea arabica, although have economical importance, the cytogenetic it´s not well studied. The small size of the chromosomes makes it difficult a detailed morphologic analysis. In this study, cytogenetic techniques were used to obtain exact measures, to amplify chromosomes images, and set the cariogram of the species. Seeds of Coffea arabica germinated in Petri dishes at 28 ºC, in the dark. Meristematic roots were pre-treated with Trifluralin solution 3 mM, and DMSO 100 mL, during 18 hours at 4ºC. The fixation was made with methanol and acetic acid (3:1) changed three times. After 24 hours, the roots were digested with Flaxzyme and destileted water solution (1:10). The slides were prepared dissociating the meristem, driping the fixative and the air drying technique was used. The dye was with Giemsa 2% in phosphate buffer, pH 6,8. These techniques allowed the identification of each homologous pair and forming the C. arabica cariogram, with well defined chromosomes and make it possible the observation of similarities and differences on the morphology.