PROTOCOLO PARA EXTRAÇÃO DE RNA EM SEMENTES DE CAFÉ

Abstract

As sementes são um importante meio de propagação de culturas do gênero Coffea, sendo de fundamental importância a obtenção de sementes com alta qualidade, para a produção de mudas. Estudos moleculares têm se mostrado úteis na obtenção de classes distintas de marcadores moleculares que auxiliam na elucidação dos fatores que afetam a qualidade das sementes. Para o estudo de genes expressos em sementes, há necessidade de se obter RNA de boa qualidade e em quantidades satisfatórias. Assim, nesse estudo, objetivou-se testar e aperfeiçoar metodologia para extração de RNA em sementes de café (Coffea arabica L.) para posterior utilização em técnicas de análise de expressão gênica. Para a quantificação de RNA foram utilizadas amostras de sementes inteiras e endosperma, secos e embebidos, com e sem liofilização. A extração do RNA total foi realizada conforme o protocolo Pury Link Plant RNA Reagent (InvitrogenTM) e a qualidade e integridade do RNA extraído foram verificadas por meio de eletroforese em gel de agarose 1,5%. A utilização de sementes de café secas e sem liofilização foi eficiente na obtenção de RNA de melhor qualidade.

Seeds are an important dispersal strategy used by coffee plants. Obtaining high quality coffee seeds is essential for the production of plant seedlings. For the gene expression analysis in seeds, is necessary to obtain RNA with high quality and quantity. In this work, the objective was to investigate the better methodology of RNA extraction in coffee seeds (Coffea arabica L.) for posterior use in gene expression techniques analysis. For the RNA quantification intact seeds or endosperm, either dry or imbibed, with or without liofilization were used. The total RNA was extracted using Pure Link Plant RNA Reagent protocol (InvitrogenTM). The quality and integrity of RNA extracted was checked by agarose gel electrophoresis. The use of dry coffee seeds without liofilization was efficient to obtain high quality RNA.