Identificação de genes de cafeeiro relacionados à resistência sistêmica adquirida e à resistência vertical

Abstract

Com o objetivo de contribuir para o esclarecimento dos mecanismos de resistência de cafeeiros contra doenças, genes relacionados à resistência sistêmica adquirida (RSA) e à resistência vertical (RV) foram identificados através da técnica de hibridização subtrativa por supressão (HSS). Para o isolamento de genes relacionados à RSA, cafeeiro cv. Mundo Novo foi tratado com o indutor benzotiodiazol (BTH) na concentração de 400 ppm. Após 72h, RNA total foi extraído de folhas de plantas tratada e controle e convertido em cDNA. Através da HSS, produziu-se uma biblioteca subtraída enriquecida de fragmentos de genes induzidos pelo BTH. Para o isolamento de genes relacionados à RV, cafeeiro Híbrido de Timor foi inoculado com urediniosporos de Hemileia vastatrix. Após 72h, seguindo a mesma metodologia anteriormente descrita, produziu-se uma biblioteca subtraída enriquecida de fragmentos de genes induzidos durante a resposta de resistência. Para confirmar que os clones continham fragmentos de genes especificamente induzidos nas condições estudadas, realizou-se seleção diferencial através de hibridização com sondas de cDNAs de plantas tratada e controle. Foram sequenciados 384 clones de cada biblioteca. As sequências obtidas foram comparadas com aquelas presentes no GenBank utilizando-se o programa BLASTX. Os genes encontrados estão envolvidos em diversos processos relacionados à resistência contra fitopatógenos como: formação de espécies de oxigênio ativadas, apoptose, síntese e transporte de metabólitos antimicrobianos, percepção e transdução de sinal e síntese de proteínas relacionadas à patogênese.