Isolamento e purificação da polifenoloxidase em frutos de café

Abstract

Polifenoloxidase (PPO) é uma enzima envolvida em vários processos metabólicos nas plantas, mas seu papel ainda não se encontra muito bem definido. Quando isolada, a PPO catalisa a hidroxilação de monofenóis para o-difenóis e/ou oxidação de o-difenóis para o-diquinonas. Este trabalho teve por objetivo o isolamento e a purificação da PPO em frutos de café no estádio chumbinho. Amostras de frutos de café foram coletadas, congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -86ºC. Após liofilização, o extrato foi aplicado em Fenil Sefarose e DEAE. A série cromatográfica utilizada nesta pesquisa permitiu um fator de purificação de 364. A atividade confirmada em SDS-PAGE e os resultados do Western blot sugerem a existência de uma banda de peso molecular de 63 kDa da PPO.Poliphenoloxidase (PPO) is one enzyme involved in various metabolic process in plants but its role remains hard to define. When isolated, PPO can catalyze one or both of the following reactions: the hydroxylation of monophenols to o-diphenols, and the oxidation of o-diphenols to o-quinones. This paper aimed to isolate and purify the PPO in coffee fruits in pinhead stage. Coffee fruits were collected, frozen in liquid nitrogen, stored at - 86Cº. After liophylization, the extract was applied in Fenil Sefarose and DEAE. The chromatographic serie used in this research gave a purification factor of 364. Activity stained SDS-PAGE gels and Western blots probed with PPO antibodies suggested existence of a 63 kDa PPO.