Embriogênese somática em explantes foliares de Catuaí Vermelho e de Robusta 201 via cultura líquida

Abstract

A embriogênese somática indireta pode promover uma desejável multiplicação clonal de genótipos de Coffea desde que sejam estabelecidas as condições indutoras para a produção de calos friáveis embriogênicos (CFE), para o estabelecimento de culturas líquidas e para a sua diferenciação embriogênica. Estas condições indutoras têm sido verificadas variar intra e interespecificamente. Assim, submeteram-se explantes foliares obtidos de sistemas caulinares de Coffea arabica cv. Catuaí Vermelho IAC H2077-2-5-15 e de C. canephora cv. Robustão clone 201, cultivados in vitro, a diferentes meios de cultura para a produção de CFE’s com vistas ao estabelecimento de culturas líquidas potencialmente embriogênicas. Todos os explantes foram cultivados em dois meios indutivos, primário e secundário. O meio primário foi utilizado nas quatro semanas iniciais de indução, quando se fizeram, então, subculturas para meios secundários. Para o genótipo Catuaí Vermelho, os meios de cultura primários experimentados foram constituídos dos sais de Murashige e Skoog (MS) ½ força, complexo vitamínico Gamborg, glicina 1 g.m -3 , caseína hidrolisada 100 g.m -3 , extrato de malte 100 g.m -3 , sacarose 3% e GelriteTM 0,3% acrescido dos reguladores de crescimento 2,4-D (1,13 ou 2,26 mmol.m -3 ), AIB (2,45 ou 4,9 mmol.m -3 ) e 2-iP (9,84 ou 19,68 mmol.m -3 ), que originaram os seguintes tratamentos: BM 1 (2,4- D 1,13 mmol.m -3 + AIB 2,45 mmol.m -3 + 2-iP 9,84 mmol.m -3 ); BM 2 (2,4-D 2,26 mmol.m -3 + AIB.4,90 mmol.m -3 + 2-iP 9,84 mmol.m -3 ) e BM 3 (2,4-D 2,26 mmol.m -3 + AIB 4,90 mmol.m -3 + 2-iP 19,68 mmol.m -3 ). Para o clone 201, os meios de cultura primários experimentados foram o meio BM 2, A e B. Os meios A e B foram constituídos dos sais MS, complexo vitamínico Morel, sacarose 3% e GelriteTM 0,3%. Com relação aos reguladores de crescimento, testaram-se 2,4-D 1,5 mmol.m -3 + BAP 7,5 mmol.m -3 e 2,4-D 4,52 mmol.m -3 + cinetina 4 mmol.m -3 para os meios A e B, respectivamente. O meio secundário para explantes Catuaí continha sais MS ½ força, tiamina 20 g.m -3 , glicina 20 g.m -3 , cisteína 40 g.m -3 , mio-inositol 200 g.m -3 , sulfato de adenina 60 g.m -3 , caseína hidrolisada 200 g.m -3 , extrato de malte 800 g.m -3 , sacarose 3% e GelriteTM 0,3% e 2,4-D 4,52 mmol.m -3 + BAP 17,6 mmol.m -3 (BME). Os meios secundários para explantes Robustão foram BME e E, esse de composição semelhante àquela do meio primário A ou B, à exceção dos reguladores de crescimento, que foi BAP 5 mmol.m -3 (E). O pH de todos os meios foi ajustado para 5,6. CFE’s foram induzidos em explantes de ambos os genótipos em resposta a todas as condições indutoras experimentadas. Para explantes Catuaí, estas reações calogênicas ocorreram em freqüências de 6, 32 e 27% para as condições indutoras BM 1 /BME, BM 2 /BME e BM 3 /BME, respectivamente. Para explantes Robustão, as freqüências de CFE’s foram de 88, 22 e 7% para as condições indutoras BM1/BME, A/E e B/E, respectivamente. Estes CFE’ s foram utilizados para estabelecer culturas líquidas. Uma vez estabelecidas, o estudo de suas cinéticas de crescimento revelou, imediatamente após subcultura, uma fase exponencial de crescimento celular até um ponto de inflexão, a partir do qual as taxas de crescimento reduziram-se progressivamente para atingir um peso de matéria fresca de agregados celulares assintótico. As diferenciações embriogênicas das cepas de Catuaí BM 1 /BME, BM 2 /BME e BM 3 /BME produziram 6.600, 17.500 e 11.900 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares, respectivamente. Para as cepas do canéfora 201 BM1/BME, A/E e B/E obtiveram-se 161.000, 134.000 e 121.000 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares, respectivamente. Amostras destes embriões somáticos foram tomadas para avaliação de seus índices de conversão à planta. Encontram-se, também, em curso, avaliações de diferenciação embriogênica das cepas para verificação do efeito da idade da cepa sobre o seu potencial embriogênico.