Desenvolvimento, produtividade e genes de referência de genótipos de Coffea spp. sob temperaturas adversas

Abstract

O aquecimento global pode promover mudanças no zoneamento agroclimatológico do cafeeiro, e consequêntimente no cenário mundial da cafeicultura. O objetivo geral deste trabalho foi de avaliar o desenvolvimento, produtividade e genes de referência de genótipos de Coffea spp. Sob temperaturas adversas. O trabalho foi dividido em 5 capítulos: Capítulos 1 e 2: O aumento do nível de CO 2 atmosférico e as elevadas temperaturas, podem promover alterações nas plantas. Neste caso os objetivos deste estudo foram: ocorrência de fotoinibição (PSII), seguida de uma caracterização dos mecanismos de proteção da planta, incluindo a dinâmica de pigmentos fotossintéticos, sistemas antioxidantes enzimáticos e não-enzimáticos, a quantificação da família rafinose Oligossacarídeos (RFOs), quantificação de proteína de choque térmico, o estudo detalhado de genes de referência para normalização em análise de expressão de genes selecionados com papéis potenciais na aclimatação por calor. O experimento foi realizado adotando-se o arranjo experimental do tipo fatorial simples, com delineamento inteiramente casualizado, sendo empregado dois fatores, compostos por dois níveis de CO 2 e outro com quatro níveis de temperatura. Foram utilizados dois genótipos de Coffea arabica (cv. Icatu e IPR 108) e um Coffea canephora (cv. Conilon clone 153), cultivadas em vasos de 80 L. O experimento foi realizado em duas câmaras de crescimento, com condições de clima controlado. A primeira câmara foi mantida a 380 ppm de CO 2 e a segunda câmara a 700 ppm de CO 2 . A temperatura foi então gradualmente aumentada de 25/20oC para 42/34oC em ambas as câmaras de crescimento a uma taxa de 0,5oC dia -1 , com 7 dias de estabilização a 31/25, 37/30 e 42/34oC para avaliações. As duas câmaras de crescimento foram mantidas com humidade relativa de 75%, radiação fotossinteticamente ativa de ca. 750-800 micromol m -2 s -1 e fotoperíodo de 12 h, de forma estável. Foi observada tolerância de calor relevante até 37/30oC para ambos [CO 2 ] (380 ppm e 700 ppm), em todos os genótipos. Essa tolerância foi alcançada com o suporte de várias moléculas protetoras (neoxantina, luteína, carotenos, TOC, HSP70, rafinose), alterações das atividades de enzimas antioxidantes (SOD, APX, QR, CAT) e pela expressão sobre-expressão de alguns genes (ELIP e Chape 20). À 42/34oC a fotoinibição foi manifestada, especialmente nas plantas cultivadas a 380 ppm e no genótipo Icatu. Observou- se sobre-expressão no genótipo cv. Conilon clone 153 à temperatura mais elevada, de acordo com a sua melhor tolerância a temperaturas elevadas. TOC e HSP70 foram particularmente relevantes em genótipos de C. arabica. No geral, os resultados obtidos mostraram que o alto [CO 2 ] atenuou o impacto do calor por meio de maior funcionamento fotossintético, sobre-regulação de moléculas protetoras, bem como pela maior atividade de algumas enzimas antioxidantes. Referente ao estudo de genes de referencia, o ranking final obtido com RefFinder classificou o MDH como o gene mais estável para utilização e normalização para análise de expressão de genes, independente do estresse avaliado neste estudo. Capítulos 3, 4 e 5: Levando em consideração o aumento de temperatura previsto pelo Painel Intergovernamental de Mudanças Climáticas (IPCC), pode- se imaginar que algumas áreas agrícolas produtoras de C. arabica poderão se tornar inaptas. Neste sentido plantas de C. canephora possivelmente poderão ocupar essas áreas, por serem plantas que se adaptam melhor a condições estressantes promovidas pelo calor e temperaturas frias positivas. Neste contexto vê-se a necessidade de experimentar genótipos de C. canephora em regiões as quais possuem o risco de mudança de zoneamento agrícola do C. arabica para C. canephora, como é o caso deste estudo. Os objetivos destes estudos foram de: (a) avaliar a capacidade produtiva de 28 diferentes genótipos de Coffea canephora desenvolvidos no clima de altitude elevada. (b) Caracterizar a taxa de crescimento de genótipos de Coffea canephora cultivados em altitude elevada. (c) Identificar genótipos com potencial para ser cultivado na região sul do cerrado de Goiás. O experimento foi realizado no Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia Goiano Campus Morrinhos, Goiás. Utilizando-se 28 genótipos de C. canephora, multiplicados por clones e sementes. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, com quatro repetições, sendo cada repetição composta por cinco plantas. Foram avaliadas as características: Produtividade em sacas/ha em quatro safras, taxa de crescimento e quantificação de nutrientes acumulados nas folhas coletadas no inverno e verão. Os resultados obtidos para o cultivo de C. canephora em altitude revelam variabilidade genética entre os genótipos, condição que favorece a obtenção de ganhos com a seleção clonal, também foi observado elevada herdabilidade, resultado que indica a alta precisão quanto a seleção de genótipos superiores. Os genótipos de C. canephora que se destacaram em produtividade, estabilidade e adaptabilidade foram: os genótipo 3V da variedade “Vitória”; NV2; NV8; P1; VERDIM TA e A1, deve-se considerar que dentre esses seis genótipos considerados superiores existem diferentes graus de similaridade o que depende da característica em questão. As taxas de crescimento de ramos plagiotrópicos e ortotrópicos dos materiais genéticos de C. canephora foram afetados negativamente durante período em que as temperaturas mínimas foram abaixo de 17oC. Para a maioria dos nutrientes observa-se maiores valores médias em folhas coletadas no inverno. A análise de componentes principais indica que os grupos de genótipos de C. canephora alteram as relações entre objetos (genótipos) e descritores (teor de nutrientes) de acordo com e época de coletadas das folhas (inverno e Verão).Global warming may promote changes in Agroclimatic zoning of the coffee, and consequêntimente in the global coffee scene. The general objective of this work was to evaluate the development, productivity and reference genes of Coffea spp genotypes. Under adverse temperatures. The work was divided in 5 chapters: Chapters 1 and 2: Increasing the atmospheric CO 2 level and the high temperatures, can promote changes in the plants. This fact is of concern to mankind as regards the maintenance of food production, especially the world coffee industry. In this case the objectives of this study were: the occurrence of PSII photoinhibition (as photodegradation marker), followed by a characterization of the protection mechanisms, including the dynamics of photosynthetic pigments, enzymatic and non-enzymatic antioxidant systems, and the quantification of the raffinose family Oligosaccharides RFOs) and heat shock protein, in addition, detailed study of reference genes to evaluate the expression of selected genes with potential roles in heat acclimatization. The experiment was carried out using a simple factorial arrangement, in a completely randomized design, using two factors, the first one was composed of two levels of CO 2 and the second factor was composed of four temperature levels. For the experimentation, two C. arabica genotypes (cv. Icatu and IPR 108) and one C. canephora (cv. Conilon clone 153) were grown in 80 L pots. The experiment was carried out in two growth chambers (Model 10000 EHHF, Mark Aralab, Portugal), with controlled climate conditions. The first chamber was controlled to maintain at constant 380 ppm of CO 2 and the second chamber at 700 ppm of CO 2 . In these chambers the temperature was gradually increased every 30 days, taken day / night: 25/20°C; 31/25°C; 37/30°C at 40/34°C. The two growth chambers were submitted to 75% relative humidity, photosynthetically active radiation of ca. 750- 800 micromol m -2 s -1 and photoperiod of 12 h, continuously throughout the experiment. According to results obtained in this study, relevant heat tolerance was observed up to 37/30oC for both [CO 2 ], considering all the genotypes evaluated in this study. This tolerance was achieved with support of several protective molecules (neoxanthin, lutein, carotenes, TOC, HSP70, raffinose), changes in antioxidant enzyme activities (SOD, APX, QR, CAT) and upregulated expression of some genes (ELIP, Chape 20). At 42/34oC the photoinhibition was manifested, especially in plans cultivated the 380 ppm and in the Icatu genotype. At this temperature an overall reinforcement of the antioxidative system was not observed, however, there was a positive regulation of protection mechanisms (HSP70, chaperonins, ELIP and APX Cyt) as well as raffinose content, which together constituted a common line For all genotypes evaluated in this study. A consistently higher expression in CL153 was observed at the highest temperature, according to its better tolerance at elevated temperatures. TOC and HSP70 appeared to be particularly relevant in C. arabica genotypes. The presence of RFOs, lutein, β-carotene, TOC and HSP70, as well as upregulated expression of protective protein-related genes (ELIPS, HSP70, Chape 20 and 60) and antioxidant enzymes (CAT, CuSOD2, APX Cyt, APX Chl), Probably acted together to control the formation and elimination of ROS, induced by the increase in temperature. Overall, the results showed that the high [CO 2 ] attenuated the impact of heat through higher photosynthetic performance, upregulation of protective molecules, as well as higher activity of some antioxidant enzymes. The expression stability varied according to the type of stress for most genes. The final ranking obtained with RefFinder ranked MDH as the most stable gene for aglobal use, regardless of the assessed stress. Chapters 3, 4 and 5: Taking into account the temperature rise predicted by the IPCC, one can imagine that some agricultural areas producing Coffea arabica may become unsuitable for cultivation. In this sense, plants of Coffea canephora may possibly occupy these areas, since they are plants that better adapt to the stressful conditions promoted by heat and possibly positive cold temperatures. In this context, it is necessary to experiment with Coffea canephora genotypes in regions that have the risk of shifting agricultural zoning from Coffea arabica to Coffea canephora, as is the case in this study. (a) To evaluate the productive capacity of 28 different genotypes of Coffea canephora grown in high altitude climate. (b) Characterize the growth rate of Coffea canephora genotypes grown at high altitude. (c) To identify genotypes with potential to be cultivated in the southern region of the cerrado of Goiás. The experiment was carried out at the Federal Institute of Education, Science and Technology Goiano Campus Morrinhos, Goiás. Using 28 genotypes of Coffea canephora, multiplied by clones and Seeds. The design was a randomized block design, with four replications, each replicate being composed of five plants. The following characteristics were evaluated: productivity/ ha of the 28 genotypes of Coffea canephora in 4 seasons, growth rate and quantification of accumulated nutrients in leaves collected in winter and summer. The results showed a significant genetic variability among the genotypes evaluated in this study, a condition that favors the gain of clonal selection. In addition, a high heritability was observed among the genotypes, a result that indicates the high precision regarding the selection of superior genotypes. The genotypes that stood out in terms of productivity stability and adaptability were: the 3V genotype of the "Vitória" variety; NV2; NV8; P1; VERDIM TA and A1, It should be considered that of the six genotypes considered superior there are different degrees of similarity depending on the characteristic in question. The growth rates of plagiotropic and orthotropic branches of the C. canephora genetic material were negatively affected during a period when the minimum temperatures were below 17oC. For most of the nutrients, it is observed higher average values in leaves collected in the winter. Principal components analysis indicates that the genotype groups of C. canephora alter the relationships between objects (genotypes) and descriptors (nutrient content) according to the season of leaves collected (winter and summer).