Fungos endofíticos em grãos verdes de café (Coffea arabica L.)

Abstract

Os fungos que invadem as sementes antes da colheita, enquanto as plantas crescem no campo, diferem quanto à sua predominância de acordo com a cultura, a região ou localização geográfica e o clima. Fungos do gênero Aspergillus, Penicillium e Fusarium são os mais comuns componentes da microbiota fúngica associada ao café. Dentre eles, Aspergillus ochraceus apresenta infecção saprofítica e oportunista, sendo que, em algum ponto do sistema de produção do café, ocorre uma combinação de fatores ambientais favorável para a penetração e o desenvolvimento do fungo e a produção de ocratoxina. No presente trabalho foram recuperadas e identificadas espécies de fungos endofíticos e potencialmente toxigênicos em grãos verdes de café, com o objetivo de analisar se há infecção precoce de Aspergillus ochraceus e outros fungos deletérios à qualidade do grão, ainda na lavoura de café. Amostras de grãos verdes de café, provenientes de duas lavouras da região de Lavras, MG, foram desinfestadas superficialmente (álcool 70% e hipoclorito de sódio 3%) e lavados em água esterilizada. Em seguida, os grãos foram descascados, tendo a casca e a película retiradas completamente, e incubados em placas de Petri contendo meio de cultura (SNA e Meio à Base de Glicerol), permitindo assim a recuperação de fungos contaminantes do interior dos grãos. Para recuperar o máximo possível de fungos endofíticos, os grãos foram incubados inteiros, cortados em lascas finas, macerados em almofariz e cortados em formato de discos. .As placas com os grãos de café incubados foram deixadas em temperatura ambiente de 24 +ou- 2oC. Amostras também serviram de testemunhas, sendo tratadas somente com água esterilizada e álcool 70%. Ao primeiro sinal de crescimento micelial nas amostras incubadas, o micélio fúngico foi transferido, com a utilização de uma alça de platina, para placas de Petri contendo meio MA e incubadas para esporulação e identificação. A identificação dos fungos foi realizada por caracterização morfológica e cultural. A avaliação dos resultados foi feita de forma qualitativa, de acordo com a presença de fungo nos grãos, demonstrado por uma análise não paramétrica. Foram isolados e identificados os seguintes fungos endofíticos: Aspergillus flavus, Aspergillus niger var. niger, Aspergillus tamarii, Bipolaris nodulosa, Chaetomium globosum, Cladosporium cladosporioides, Curvularia verruculosa, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Fusarium stilboides, Monilia aureofulva, Nigrospora oryzae, Paecilomyces variotii, Phomopsis archeri, Penicillium janthinellum, Pestalotiopsis palustris, Rhizopus stolonifer, Scedosporium sp., Trichoderma koningii e Verticillium lecanii. As lavouras cultivadas a pleno sol e sombreada possuem incidência de fungos endofíticos diferenciada. A maior incidência destes fungos foi observada nas amostras provenientes das lavouras cultivadas a pleno sol. A partir de grãos macerados em almofariz foi possível recuperar maior número de fungos endofíticos que nos demais procedimentos. O tratamento de desinfestação foi eficiente, não tendo havido contaminação bacteriana no meio. Embora não tenha sido detectada a presença de Aspergillus ochraceus nos tratamentos realizados, não se pode concluir sobre a impossibilidade de sua infecção precoce nos grãos. Isso porque a metodologia empregada neste trabalho pode não ter sido válida para este caso, ou este fungo pode estar presente nas amostras de grãos, mas sob forma latente.The fungi that invade the seeds before the harvest, while the plants grow in the field, differ with regard to their predominance in agreement with the culture, the area or geographical location and the climate. Fungi of the genus Aspergillus, Penicillium and Fusarium are the most common components of the fungi microbiote associated to coffee, which Aspergillus ochraceus introduces saprofitic and opportunistic infection and in some point of the coffee system production a favorable environmental combination for penetration, development and ochratoxin production. In the present work, endophytic and potentially toxigenic fungi species were recovered and identified in green coffee with the objective of analyze if there are the Aspergillus ochraceus precocious infection and other deleterious fungi to the bean quality still in the farming coffee. Samples of green coffee from two farms near Lavras, MG, were disinfected superficially (alcohol 70% and sodium hypochlorite 3%) and washed in sterilized water being shelled soon after and the peel and the film retreats completely and incubated in Petri dishes with media allowing like this the contaminants fungi recovery of the grain inside. To recover the maximum endophytic fungi the grains were incubated entire, cut in fine splint, macerated in almofariz and cut in format of disks. The dishes with the incubated samples were left in ambient temperature of 24 +or- 2oC. Samples also served as witness being only treated with sterilized water and alcohol 70%. In the first sign of mycelial growth in the incubated samples the fungal mycelia were transferred using a platinum loop for Petri dishes with media MA and incubated for esporulation and identification. Identification of fungi was accomplished through morphologic and cultural characterization. The results evaluation was made in a qualitative way in agreement with the fungi presence in the grains that are demonstrated by a non parametric analysis. The following endophytic fungi were identificated: Aspergillus flavus, Aspergillus niger var. niger, Aspergillus tamarii, Bipolaris nodulosa, Chaetomium globosum, Cladosporium cladosporioides, Curvularia verruculosa, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Fusarium stilboides, Monilia aureofulva, Nigrospora oryzae, Paecilomyces variotii, Phomopsis archeri, Penicillium janthinellum, Pestalotiopsis palustris, Rhizopus stolonifer, Scedosporium sp., Trichoderma koningii e Verticillium lecanii. The tillage in full sun and shaded possess endophytic fungi incidence differentiated and in the tillage full sun a larger incidence of these fungi was found. From macerated grains in almofariz it was possible to recover larger number of endophytic fungi that the other procedures. The disinfected treatment was efficient where there wasn't bacterial contamination in the media. Although the Aspergillus ochraceus presence hasn't been detected in the accomplished treatments it cannot end about the impossibility of its precocious infection in the beans and grains because of the methodology in this work cannot have been valid for this case or this fungi can be present in the samples of grains but under latent form.