Biocontrole in vitro de fungos toxigênicos utilizando leveduras isoladas do café e cacau

Abstract

Produtos agrícolas, com expressão para a economia brasileira, como frutos, grãos de café, uvas, dentre outros podem ser contaminados por fungos filamentosos produtores de Ocratoxina A (OTA) desde a lavoura até o armazenamento. Essa micotoxina é considerada uma das mais prejudiciais para a saúde humana devido a sua toxicidade. O uso excessivo de fungicidas e os riscos à saúde humana têm levado a pesquisas sobre formas alternativas como o controle biológico. Neste contexto, objetivou-se avaliar o potencial antagônico de 32 cepas de leveduras pertencentes aos gêneros Debaryomyces, Pichia e Saccharomyces, isoladas de frutos do café e do cacau, em cocultivo com Aspergillus ochraceus e A. carbonarius. As leveduras foram inoculadas (10 4 e 10 7 células/mL) com três isolados de fungos filamentosos, A. carbonarius (isolado 2 e 8CSP3-25), isolados da uva e A. ochraceus (SCM 1.9), isolado do café (10 5 esporos/mL). Realizou-se avaliação do crescimento micelial e contagem de esporos, ambos em meio MEA, e produção de OTA, meios CYA e YES, em 0,98, 0,96 e 0,94 de a w, através da Cromatografia de Camada Delgada (CCD), sendo todas os fatores avaliados após 7 dias de incubação a 28 °C. As leveduras em ambas as concentrações (10 4 e 10 7 células/mL) apresentaram maior efeito inibitório (53% em relação ao controle) do crescimento micelial para o isolado de A.ochraceus. Em relação à produção de esporos, Aspergillus carbonarius 2 apresentou 38% de produção de esporos superior quando comparado com o isolado A. carbonarius 8CSP 3-25. Leveduras do gênero Pichia apresentaram maior efeito inibitório na produção de esporos. Em relação à inibição da produção da OTA, Debaryomyces hansenii UFLA CF693 coincidiu entre os três isolados de Aspergillus. Sendo que a maior inibição da produção de OTA ocorreu nos meios com 0,94 de a w . Concluiu-se que leveduras em cocultivo com fungos filamentosos são capazes de inibir o crescimento micelial, produção de esporos e de OTA, e assim potencialmente diminuir a disseminação destes fungos no processamento de qualquer tipo de produto agrícola e consequentemente a contaminação dos alimentos com micotoxinas, como a Ocratoxina A.

Agricultural products such as coffee fruit and beans, grapes among others which are important for Brazilian economy may be contaminated by filamentous fungi producing ochratoxin A (OTA) from the field to storage. This mycotoxin is considered to be one of the most harmful to human health due to its toxicity. The excessive application of fungicides and the hazards to human health has led to researches into alternatives forms such as biological control. In this context, we aimed to evaluate the antagonistic potential of 32 yeast strains belonging to the genera Debaryomyces, Pichia and Saccharomyces isolated from coffee and cocoa fruit, co-cultivated with Aspergillus ochraceus and A. carbonarius. Yeasts were inoculated (10 4 and 10 7 cell/mL) with three isolates of filamentous fungi, A. carbonarius (isolated 2 and 8CSP3-25) from grape and A. ochraceus (SCM 1.9) from coffee (10 5 spores/mL). The mycelial growth evaluation and spores scoring both in MEA medium, and OTA production in CYA and YES media at 0.98, 0.96 and 0.94 a w was performed by Layer Chromatography (LTC) and all factors evaluated after 7 days of incubation at 28oC. Yeasts in both concentrations (10 4 and 10 7 cell/mL) have shown higher inhibitory effect to mycelial growth (53% in comparison to control) for A. ochraceus isolate. As for spore production, Aspergillus carbonarius 2 had 38% higher spore production in comparison with A. carbonarius 8CSP 3-25. Yeasts belonging to the genus Pichia have screened a higher inhibitory effect on sporulation. Regarding inhibition of OTA production, Debaryomyces hansenii UFLA CF693, were in agreement with the three isolates of Aspergillus and the highest inhibition of OTA production took place at the 0.94 a w media. Therefore, it was possible to conclude that yeasts co-cultivated with filamentous fungi are able to inhibit mycelial growth, sporulation and OTA production. Thus, they are able to decrease the spread of these fungi during any agricultural products processing and thereafter food contamination with mycotoxin such as Ochratoxin A.