Expressão do gene Gus em embriões zigóticos e calos embriogênicos de Coffea arabica e C. canephora

Abstract

A metodologia de biolística foi utilizada para a transformação genética de Coffea spp. Foram bombardeados embriões zigóticos de C. arabica e calos embriogênicos de C. arabica e de C. canephora. Embriões da cultivar IAPAR 59 foram testados nos dias 2, 5, 7, 9 e 12 do período de cultivo anterior ao bombardeamento. A expressão transiente foi observada em 30 embriões de cada idade após 48 horas do bombardeamento, através de teste histoquímico com X-glu. Outros 30 embriões foram mantidos em meio seletivo com imazapyr 300 nM por 15 d. O maior número de pontos azuis nas análises transiente e estável da expressão do gene gus foi observado na idade de 12 d. Com base neste resultado, foram testados 700 embriões da cultivar Mundo Novo nas mesmas condições, sendo a expressão estável analisada em brotos emergentes após 60 d. Verificou-se que partes de alguns brotos apresentaram coloração azul, indicando a formação de mosaicos. O material de calos embriogênicos proveniente de folhas de cafeeiro foi bombardeado em meio C contendo 0; 0,25; e 0,5 M de manitol. Observou-se o maior número de pontos azuis na análise transiente de amostras dos calos submetidos a pré-tratamento osmótico, sugerindo que esta etapa possa otimizar a transformação deste material.

In order to establish an efficient transformation protocol for Coffea spp., it was investigated the gus expression in zygotic embryos of C. arabica and embryogenic calli of C. arabica and C. canephora. Embryos from cultivar IAPAR 59 were bombarded after 2, 5, 7, 9 or 12 d of cultivation. The transient expression was analyzed in 30 embryos of each age after 48 hours from bombardment. Another 30 embryos were maintained under selection of 300 nM imazapyr for 15 d. The results showed that the best expression was achieved with 12 day-old embryos. We have tested the cultivar Mundo novo with the same parameters, except that the transgenic shoots were selected for 60 d. The stable expression of gene gus reveled blue parts of the shoots, characterizing mosaics formation. Embryogenic calli from coffee leaves were bombarded on C medium containing mannitol 0, 0.25 or 0.5 M. We observed the number of blue spots was higher in the samples from calli on osmotic medium. This results suggest the osmotic treatment should enhance the transformation rate of the tested material.