Transformação genética de Coffea arabica através do bombardeamento de calos embriogênicos e seleção em canamicina

Abstract

A obtenção de novos cultivares adaptadas às necessidades da produção agrícola é um desafio constante no melhoramento genético do cafeeiro. Nos últimos anos, a criação de técnicas biotecnológicas vem trazendo novas perspectivas para o melhoramento genético do cafeeiro ao permitir a introdução de genes específicos em variedades elite em um espaço de tempo significativamente reduzido. Entretanto, apesar dos vários estudos já desenvolvidos, ainda não foi descrito um protocolo de alta eficiência para a obtenção de plantas transgênicas de C. arabica. Como alternativa aos protocolos já existentes ou em estudo, o presente trabalho tem por objetivo o estabelecimento de um protocolo eficiente para a introdução de transgenes em C. arabica. Neste trabalho são apresentados resultados do bombardeamento de calos embriogênicos e seleção de transformantes em canamicina. Discos foliares de C. arabica variedade Catuaí Vermelho foram cultivados em meio C modificado contendo 20mM de 2,4-D e incubados por 6 meses. A massa de calos embriogênicos formada foi bombardeada 24 h após pré-tratamento osmótico com manitol 0,5 M. Para este procedimento foi utilizado o vetor pBI 426 contendo o gene gus, que codifica a enzima ²-glucuronidase, e o gene nptII que confere resistência a canamicina. A massa de calos bombardeados foi então transferida para o meio C modificado e subcultivada em doses crescentes de canamicina. Os embriões regenerantes em canamicina 400 mg/L foram transferidos para o meio WPM. O teste histoquímico dos calos, embriões ou folhas das plantas regenerantes em meio seletivo revelou a atividade da enzima GUS, indicando assim que a técnica é eficiente para a introdução de transgenes de interesse em C. arabica. As análises moleculares das plantas obtidas estão em andamento para a confirmação da transformação. Desta forma, os resultados obtidos indicam que uma nova e promissora metodologia, visando à introdução de genes de interesse em C. arabica, está sendo estabelecida. De acordo com os trabalhos de biolística em outras culturas, é possível que este método também seja viável para variados genótipos de café.