Metodologia cromatográfica para avaliação de diterpenos em tecidos de café: polpa, perisperma, endosperma e folhas

Abstract

Caveol e cafestol, principais diterpenos do café, compõem a fração lipídica insaponificável e apresentam efeitos conhecidos na saúde humana, em alguns casos indesejáveis como a ação hipercolesterolêmica, mas atuam também como anticarcinogênicos e antioxidantes. A determinação dos diterpenos em diferentes tecidos da planta e do grão em cereja permitiria, pela integração com a Engenharia Genética, o estudo das vias metabólicas e identificação de genes envolvidos na produção destes compostos. Na literatura encontram-se apenas referências a avaliações em grãos de café verde ou torrado e bebidas. O objetivo do trabalho foi testar uma metodologia por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência para determinação de cafestol e caveol em folhas de café, polpa, endosperma e perisperma do grão. Empregou-se como condição cromatográfica coluna de fase reversa, eluição com acetonitrila 55 % em água e detecção a 230 e 290 nm. A saponificação direta, extração com terc-butil metil éter e limpeza com água mostrou ser eficiente para o preparo da amostra dos diferentes tecidos, sem necessidade de emprego de outras técnicas de limpeza. Tendo em vista as diferenças de concentração observadas, a detecção dos dois compostos a 230 nm não se mostrou adequada, recomendando-se a leitura de cada diterpeno no seu máximo. As condições cromatográficas empregadas permitiram a identificação dos diterpenos de interesse em todas as matrizes estudadas e indicando a possibilidade de quantificação de caveol e cafestol por uma metodologia simples e rápida.

Kahweol and cafestol, main diterpenes of the coffee bean, compose the unsaponifiable fraction and present known effects in the human health. In some cases, they are undesirable as the hypercholesterolaemic effect, but these compounds also have anticarcinogenic and antioxidants action. The analysis of the diterpenes in different plant tissues and in green bean would allow, by integration with Genetic Engineering, the study of metabolic pathways and identification of the genes involved in the production of these compounds. In the literature there are just reports related to evaluations in green or roasted coffee beans and coffee beverages. The objective of the work was to test a methodology by High Performance Liquid Chromatography for determination of cafestol and kahweol in coffee leaves, pericarp, endosperm and perisperm of the coffee beans. Reverse phase column, isocratic elution with acetonitrile/water (55/45 vv) and detection at 290 and 230 nm were used. Direct saponification, extration with terc-butyl methyl ether and clean up with water presented efficiency for the preparation of the different coffee tissues, with no necessity of additional clean up procedures. Considering the differences observed in the diterpene contents, the detection at 230 nm did not achieve good results, being recommended the detection of each diterpene at its maximum wavelength. The chromatographic conditions applied allowed the identification of the diterpenes in all the matrices studied and suggested the possibility of the quantification of kahweol and cafestol by a simple and rapid methodology.