Monteiro, Ana Cristina AndradeResende, Mário Lúcio Vilela deAndrade, Camila Cristina Lage deVale, Paula Adrielly SouzaGuimarães, Sandra ElisaBotelho, Deila Magna dos SantosVilela, Rossiane OliveiraVasconcelos, Victor Augusto Maia2015-08-262015-08-262015MONTEIRO, A. C. A. et al. Desenho e teste de primers para RT-PCR de genes que codificam enzimas antioxidantes do cafeeiro. In: SIMPÓSIO DE PESQUISA DOS CAFÉS DO BRASIL, 9., 2015, Curitiba. Anais... Brasília, DF: Embrapa Café, 2015, 4 p.http://www.sbicafe.ufv.br:80/handle/123456789/4137Trabalho apresentado no IX Simpósio de Pesquisa dos Cafés do BrasilPlantas sob estresse geralmente usam um complexo sistema de defesa antioxidante constituído de enzimas, como a superóxido dismutase, catalase, glutationa peroxidase e ascorbato peroxidase. Considerando que Coffea arabica é uma espécie agronômica de importância para os países produtores e que é crescente as pesquisas moleculares envolvendo o cafeeiro, o objetivo deste trabalho foi desenhar primers, para serem utilizados na técnica de RT-PCR, dos genes SOD, CAT, GPX e APX do cafeeiro, que codificam as enzimas superóxido dismutase, catalase, glutationa peroxidase e ascorbato peroxidase, respectivamente. Primers foram desenhados a partir de sequências gênicas depositadas no GenBank e com o auxílio do software Integrated DNA Technologies (IDT). Os primers foram confeccionados pela empresa SIGMA e, em seguida, foi realizada uma RT-PCR dos mesmos com DNA extraído de folhas de mudas de cafeeiro e com água (controle). As condições da reação foram 2 minutos a 95°C, seguidos por 30 ciclos de 40 segundos a 95°C, 35 segundos a 58ºC e 20 segundos a 72°C, e finalizando com 5 minutos a 72°C. Para cada reação, foi utilizado 1,0 μL de DNA, 0,75 μL de cada primer, 5,0 μL de Green GoTaq, 2,0 μL de MgCl2, 0,5 μL de dNTP e 0,125 μL de GoTaq, para um volume final 25,0μL por amostra. A RT-PCR foi visualizada em gel de agarose 1,5%, corado com GelRedTM. Nenhum dos primers amplificou na ausência de DNA. O primer APX amplificou em dois tamanhos diferentes e o primer SOD não ocorreu nenhuma amplificação. Somente os primers CAT e GPX amplificaram no tamanho em que foram desenhados, estando aptos para serem utilizados em trabalhos com RT-PCR.4 páginaspt-BRCoffea arabicaBiologia molecularEnzimas de limpezaCafeicultura::Genética e melhoramentoTrabalho de Evento Cientifico