UFLA - Teses
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Item Isolamento de leveduras de cavernas e avaliação do seu potencial biotecnológico para fermentar hidrolisados lignocelulósicos(Universidade Federal de Lavras, 2023-02-27) Bonett, José Eduardo Abril; Duarte, Whasley Ferreira; Ferreira, Rodrigo LopesPretendeu-se, neste trabalho, isolar, identificar e realizar uma avaliação biotecnológica de leveduras isoladas de 15 cavernas localizadas no estado de Minas Gerais. Para tal fim, usaramse amostras de solo em distintas zonas das cavernas e, para o isolamento, realizaram-se plaqueamentos usando o meio Extrato Malte. Para a identificação das leveduras, utilizou-se a técnica de MALDI-TOF. A avaliação biotecnológica das leveduras foi realizada em relação à produção de xilitol, etanol, proteína e biomassa e, para isso aplicaram-se testes de fermentação de xilose e em hidrolisados de substratos lignocelulósicos de café. A produção de etanol foi avaliada pela técnica de HPLC, e a determinação de proteína, pelo método de Kjeldahl. A produção de biomassa foi calculada por meio de uma curva de calibração. Do isolamento, obtiveram-se 236 leveduras, analisadas por MALDI-TOF. Dessa análise, encontraram-se espécies ainda não relatadas para cavernas. Quanto à avaliação biotecnológica, foi encontrado que nenhuma cepa produziu xilitol e que algumas cepas foram capazes de produzir etanol. A respeito da produção de proteína, uma cepa identificada como C. orthopsilosis apresentou maior porcentagem de proteína (35,8%). Os resultados obtidos permitiram verificar que as cavernas não são ambientes totalmente isolados do meio externo. A estrutura da caverna, a sua interação com o meio externo e as alterações do meio circundante influenciam na entrada de matéria orgânica nas cavernas. Isso influencia na presença de leveduras nas diferentes zonas das cavernas. Além disso, este é o primeiro trabalho em que é realizada a caracterização biotecnológica de leveduras de caverna. Os resultados obtidos permitiram conhecer os parâmetros-chave para melhorar a produção de etanol, proteína e biomassa dessas leveduras em hidrolisados lignocelulósicos para futuros trabalhos.Item Aplicação do agente biológico Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries “Cladosporin” como bioprotetor da qualidade do café (Coffea arabica L.)(Universidade Federal de Lavras, 2012-02-27) Angélico, Caroline Lima; Pimenta, Carlos JoséO produto à base do agente bioprotetor da qualidade do café Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries é uma alternativa promissora para a aplicação no frutos de café ainda na lavoura, por se tratar de um produto biológico contendo um micro-organismo com características GRAS (General Regarded as Safe) e com reconhecida ação deletéria sobre fungos prejudiciais à qualidade do produto final. A aplicação do produto nos frutos poderia promover a manutenção ou a melhoria da qualidade de cafés com histórico de problemas de bebida, principalmente em regiões com alta umidade relativa do ar. O produto “Cladosporin” foi aplicado em diferentes doses e épocas em frutos de café da cultivar Catuaí Amarelo IAC 62, com 3 anos de idade, durante dois anos consecutivos em uma lavoura da Fazenda Santa Helena, no município de Alfenas – MG, localizada às margens da represa de Furnas. Os testes de viabilidade apontaram que refrigeração e congelamento foram as melhores temperatura para a manutenção do fungo; apenas um aplicação, num intervalo de 60 dias antes da colheita na menor dose testada, é suficiente para que ocorra uma colonização de Cladosporium no frutos e diminua, consideravelmente, a incidência de fungos potencialmente toxigênicos; Cladospororium inibiu a germinação dos fungos potencialmente toxigênicos por período superior a 20 dias e hiperparasitou o conídio de Aspergillus ochraceus G. Wilh, alterando sua estrutura e textura; os parâmetros condutividade elétrica, lixiviação de potássio, sólidos solúveis totais, açúcares totais e atividade da polifenoloxidase se apresentaram como importantes marcadores de qualidade. Conclui-se que a aplicação do “Cladosporin” promoveu melhoria da qualidade nos cafés com resultados mais significativos para a fração boia.Item RNA-guided silencing pathways in Coffea spp.: genome-transcriptome-wide analyses(Universidade Federal de Lavras, 2017-02-24) Brum, Christiane Noronha Fernandes; Chalfun Junior, AntonioO Brasil é o maior produtor e exportador de café, a segunda commodity mais comercializada no mundo. O café é uma cultura bianual cuja fenologia é fortemente influenciada por fatores ambientais, como fotoperíodo, temperatura e distribuição de chuvas. A planta do cafeeiro apresenta desenvolvimento floral sequencial e vários eventos de florescimento. Esses eventos levam à maturação desigual dos frutos e, portanto, a uma baixa qualidade da bebida e a um aumento nos custos de produção. Dentro do panorama das mudanças climáticas, são extremamente necessários estudos que visem esclarecer os mecanismos de regulação do desenvolvimento para o melhoramento genético. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de RNAs pequenos não codificantes (sRNAs), com 21 nt de comprimento, em média, que regulam a expressão de mRNA em plantas inibindo a sua tradução com ou sem clivagem do alvo. O objetivo desta tese foi fornecer uma ampla análise de miRNAs de café e desvendar as vias de silenciamento guiadas por RNA nesta cultura. Para isso, o genoma de C. canephora foi pesquisado para a identificação e caracterização dos miRNAs e dos componentes das vias de silenciamento de RNA. Além disso, foram construídas bibliotecas de RNAseq pequenos RNAs a partir de gemas florais de C. arabica em diferentes estádios de desenvolvimento, visando identificar genes miRNAs conservados e de gênero específico relacionados ao desenvolvimento floral no café. Estes dois estudos representam um trabalho pioneiro que oferece um passo significativo para uma melhor compreensão da regulação transcricional e pós- transcricional desta grande cultura. A identificação e caracterização dos componentes das vias de silenciamento guiadas por RNA nesta importante cultura não somente proporcionam conhecimento da biologia destas plantas, mas também fornecem base para o melhoramento vegetal através de ferramentas biotecnológicas para lidar com as restrições dessa cultura.Item Molecular mechanisms in the first step of ABA-mediated response in Coffea ssp(Universidade Federal de Lavras, 2016-09-16) Cotta, Michelle Guitton; Andrade, Alan CarvalhoO ácido abscísico (ABA) é um fitohormônio universalmente conservado entre as plantas o qual coordena vários aspectos de resposta ao déficit hídrico, tais como, arquitetura radicular, dormência de sementes e regulação do fechamento estomático. Um mecanismo de transdução de sinal de ABA foi proposto envolvendo os receptores intracelulares de ABA (PYR/PYL/RCARs) que interagem com as fosfatases PP2Cs e proteínas quinases SnRK2. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar pela primeira vez os genes ortólogos desse sistema tripartite em Coffea. Sequências proteicas de Arabidopsis, citros, arroz, uva, tomate e batata foram escolhidas como query para buscar genes ortólogos no Coffee Genome Hub (http://coffee- genome.org/). A expressão diferencial em folhas, sementes, raízes e órgãos florais foi verificada por meio de análises in silico. As análises de expressão gênica in vivo foram também realizadas por RT-qPCR em folhas e raízes de clones de C. canephora (Cc) tolerantes (D T 14, 73 e 120) e suscetíveis (D S 22) à seca os quais foram submetidos ou não ao déficit hídrico. Os perfis de expressão desses genes foram também analisados em folhas de plantas de Ca e Cc crescidas em condição hidropônica e submetidas à tratamento com ABA exógeno (500 μM). Essa abordagem permitiu a identificação e a caracterização de 24 genes candidatos (9 PYL/RCARs, 6 PP2Cs e 9 SnRK2s) no genoma de Cc. Os motivos proteicos identificados permitiram caracterizar os respectivos genes como membros das famílias de receptores PYL/RCARs, fosfatases PP2Cs e quinases SnRK2 da via de resposta ABA- dependente. Essas famílias foram funcionalmente anotadas no genoma de Cc. Análises in vivo revelaram que oito genes foram super expressos em condição de seca em tecidos foliares e radiculares. Entre eles, três genes que codificam fosfatases foram expressos em todos (D T e D S ) clones, consequentemente sugerindo que esses genes foram ativados como uma resposta geral para lidar com o déficit hídrico. Entretanto, dois outros genes que codificam fosfatases foram super expressos somente nos clones D T , sugerindo que eles constituem genes-chave para a tolerância a seca nesses clones. Os clones D T também apresentaram perfil de expressão gênica diferencial para cinco outros genes e desse modo reforçam a ideia de que múltiplos mecanismos biológicos estão envolvidos na tolerância a seca em Cc. Em resposta a ABA exógeno, 17 genes foram expressos em folhas de plantas de Cc e Ca. Muitos genes foram diferencialmente expressos no clone 14 D T tanto em condição controle como após 24h de tratamento com ABA. Em condição controle, cinco genes foram mais expressos tanto nas plantas D T de Cc como de Ca. A quinase CcSnRK2.6 se destacou por ser expresso somente nas plantas de Cc (D T e D S ) após 72h de tratamento com ABA. De forma geral, foi observado que a via de sinalização de ABA é atrasada nos Ca var Rubi D S . Tais evidências moleculares corroboram com as análises microscópicas que mostram que o clone 14 D T foi mais eficiente para controlar o fechamento estomático em resposta ao tratamento com ABA do que as outras plantas de café. Todas essas evidências irão nos ajudar a identificar o determinismo genético para a tolerância à seca por meio da via ABA-dependente essencial para obter marcadores moleculares que podem ser usados em programas de melhoramento.Item Expression of the CcDREB1D promoter in coffea arabica: functional genomics and transcriptome analysis(Universidade Federal de Lavras, 2017-04-20) Torres, Luana Ferreira; Diniz, Leandro Eugenio CardamoneA mudança climática está colocando um grande desafio para a produção mundial de café e uma das estratégias para superar esses problemas consiste na geração de culturas com maior tolerância à seca e outros estresses abióticos, através de abordagens biotecnológicas e avançadas técnicas de melhoramento molecular. Ao longo de sua evolução, as plantas desenvolveram uma série de mecanismos de tolerância ao estresse abiótico. No entanto, a ativação desses mecanismos varia dependendo da espécie da planta, que determina o seu nível de tolerância ao estresse. A elucidação da função dos genes de tolerância ao estresse e também do processo de defesa vegetal nestas condições é de fundamental importância para a obtenção de variedades agrícolas mais resistentes, o que consequentemente pode contribuir para a redução de perdas nas culturas em condições climáticas adversas. Estudos recentes resultaram na identificação de muitos genes candidatos em Coffea para tolerância à seca apresentando perfis de expressão diferencial contrastantes entre genótipos. Entre estes genes, os DREBs estão envolvidos na via de resposta ao estresse hídrico como os fatores de transcrição vegetais que regulam a expressão de muitos genes induzíveis por estresse e desempenham um papel crítico na melhoria da tolerância ao estresse abiótico das plantas através da interação com um cis –elemento (DRE/CRT) presente na região promotora de vários genes responsivos ao estresse abiótico. Entre outros DREBs, o gene CcDREB1D mostrou um aumento nos níveis de mRNA durante a aclimatação por estresse de seca. Isto indica uma regulação distinta para a expressão de genes homólogos nos dois genótipos e sugere que este gene pode contribuir para a diversidade observada entre genótipos. Atualmente, as estratégias de sequenciamento de alto desempenho do transcriptoma (RNA-Seq) permitem gerar um grande volume de dados, a baixo custo e em um curto período de tempo. Esta informação permite a realização de estudos de perfis transcripcionais e redes genéticas numa compreensão aprofundada de vários perfis de genes. Diante deste contexto, o capítulo 1 apresenta uma revisão de literatura englobando desde as características de origem e comerciais do café até o estudo de genes e seu transcriptoma. O Capítulo 2 compreendeu o estudo de três haplótipos do promotor CcDREB1D isolados de clones tolerantes e sensíveis à seca de C. canephora avaliando a capacidade do promotor para controlar a expressão do gene repórter uidA em resposta ao déficit hídrico. O Capítulo 3 compreendeu o estudo do haplótipo pHP16L isolado de C. canephora e sua participação na expressão do gene repórter uidA em resposta aos estresses de seca, altas e baixas temperaturas, alta intensidade luminosa e aplicação exógena de ABA, acompanhados de dados de RT-qPCR. O capítulo 4 compreendeu analisar as condições de expressão do haplótipo pHP16L do promotor DREB1D sob uma faixa representativa dos estresses abióticos mais comuns, utilizando a técnica de RNA-seq como ferramenta para entender o mecanismo de tolerância ao estresse das plantas e a expressão dos genes estresse induzido bem como dos genes DREBs, acompanhados de validação dos dados pela técnica RT-qPCR.Item Calogênese em anteras de cafeeiro Coffea arabica L.(Universidade Federal de Lavras, 2004-01-30) Araújo, Jose Sérgio de; Pasqual, MoacirObjetivou-se com este trabalho, estudar a calogênese em anteras oriundas de uma população segregante F, de Coffea arabica L. Na indução de calogênese, foi efetuada a assepsia dos botões florais com álcool 70% por 1”, hipoclorito de sódio 1,4% durante 15º. Em seguida, as anteras foram extraídas, inoculadas em meio “IC” (indução de calos) e mantidas em estufa tipo BOD, sob temperatura de 27 + 1º €. Para controlar a contaminação causada por fungos e bactérias, foram acrescidos ao meio 10 mg L” de benomyl e 50 mg L' de cloranfenicol após o meio ter sido autoclavado. Os meios de cultura tiveram o pH ajustado para 5,7 + 1 antes de serem autoclavados. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com 4 repetições e 30 anteras por placa. Experimento 1: meio IC suplementado de 2,4-D (0, 1,2 e 4 mg L'") e cinetina (0, 2, 4e 8 mg L'). Experimento 2: meio IC suplementado de cinetina (0, 2, 4e 8 mg L”"), ácido indol butírico (0;0,5;1e2 mg Le 2mgL' | ' de 2,4-D. Experimento 3: meio IC suplementado de cinetina (0, 1,2,4e $mg L', ácido giberélico (0; 2,5, 5; 10 e 20 mg L!) e 8 mg L'! de ácido naftalenoacético. Concluiu-se que a presença de fungicida e bactericida adicionado ao meio de cultura reduz consideravelmente a contaminação causada por microorganismos. A combinação entre 2,4-D e cinetina favorece a indução de calos primários. A combinação de concentrações de 8 mg L* cinetina e AIB a 1 mg L'! atua favoravelmente na indução de calos. Sugere-se que o Gás tenha um efeito no aumento da rapidez de crescimento dos calos provenientes de anteras de cafeeiro.Item Incidência de fungos do gênero Aspergillus seção Circumdati e Nigri em grãos de café cultivados em Minas Gerais e o efeito in vitro de fatores abióticos no crescimento e na biossíntese de ocratoxina A(Universidade Federal de Lavras, 2016-06-02) Oliveira, Gislaine; Batista, Luís RobertoOs fatores abióticos que mais influenciam o crescimento e a biossíntese de ocratoxina A (OTA) em fungos são a temperatura e a atividade de água (aw). Nesse sentido, esse estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a incidência de fungos do gênero Aspergillus Seção Circumdati e Nigri em grãos de café cultivados em duas regiões produtoras de Minas Gerais, além de avaliar o efeito in vitro de dois fatores abióticos (temperatura e aw) no crescimento e na biossíntese de OTA por A. carbonarius e A. ochraceus em meio de cultura sintético à base de café. Foram analisadas 14 amostras de grãos de café arábica (Coffea arabica L.), sendo sete da região Sul de Minas e sete da região do Cerrado de Minas. A identificação foi realizada com base nas características morfológicas. A quantificação de OTA dos isolados foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Foram isolados e identificados 90 fungos do gênero Aspergillus Seção Circumdati e Nigri, dos quais 82% eram pertencentes à Seção Nigri e 18%, pertencentes à Seção Circumdati. Na região Sul de Minas, a porcentagem de contaminação dos grãos de café por fungos filamentosos foi de 65,5%. A porcentagem de contaminação das amostras do Cerrado foi de 34,5%. Nas duas regiões avaliadas, a espécie encontrada com maior frequência foi A. niger. Neste estudo, 43,24% dos isolados pertencentes à Seção Nigri foram produtores de OTA. Dos isolados pertencentes à Seção Circumdati, 81,25% foram produtores de OTA. Para avaliar o efeito dos fatores abióticos, foi utilizado um delineamento central composto. Os isolados produtores de OTA foram cultivados em meio de cultura sintético à base de café. Os isolados de A. carbonarius apresentaram o maior crescimento nos intervalos de aw entre 0,935 a 0,965 e temperatura entre 25 °C a 32 °C. Do mesmo modo, as condições ótimas de crescimento para os isolados de A. ochraceus ocorreram nos intervalos de aw, entre 0,940 a 0,990 e temperatura entre 21 °C a 30 °C. A maior quantidade de OTA produzida por A. carbonarius CCDCA10288 e CCDCA10293 (19,7-15,7 μg/g respectivamente) foi obtida em aw de 0,99 e temperatura entre 15 °C a 25 °C. Verificou-se uma tendência para maior produção de OTA por A. ochraceus CCDCA10211 e CCDCA10212 (8.9-7,9 μg/g, respectivamente) em aw entre 0,98 a 0,99 e temperatura entre 25 °C a 35 °C e 22 °C a 32 °C, respectivamente. Essas informações demonstram que o crescimento e a produção de OTA estão relacionados com a aw e a temperatura. O efeito destes fatores sobre a produção de OTA pode contribuir para o desenvolvimento de modelos que simulem cenários climáticos, proporcionando estratégias de adaptação.Item Análise do perfil transcriptômico e proteômico de raízes de diferentes clones de Coffea canephora em condições de déficit hídrico(Universidade Federal de Lavras, 2015-04-30) Costa, Tatiana Santos; Andrade, Alan CarvalhoO café é uma das principais commodities agrícolas do mundo, sendo o Brasil o maior produtor. A seca é um problema frequente no país, uma vez que é considerado um fator limitante que possibilita oscilações na produtividade do cafeeiro. Em resposta ao déficit hídrico as plantas ativam mecanismos que a auxiliam suportar períodos de seca, promovendo alterações na fotossíntese, respiração, translocação, absorção de íons, o metabolismo de nutrientes e hormônios. O presente trabalho tem por objetivo avaliar a expressão diferencial de genes e proteínas em raízes de clones de C. canephora var. Conilon, sendo o clone 22 (sensível à seca) e os clones 14, 73 e 120 (tolerantes à seca), cultivados em condições controladas em condições irrigada e sob estresse hídrico. Para cada clone e regime hídrico foi extraído o RNA total e avaliado o perfil transcriptômico e proteômico das raízes por meio do sequenciamento 454 e da espectrometria LC-MS, respectivamente. Os resultados apresentados possibilitaram uma melhor compreensão de alguns mecanismos de resposta em raízes em clones C. canephora quanto a tolerância ao déficit hídrico, por meio da diferença de expressão gênica e dos nos níveis de proteínas entre as condições avaliadas (I e NI). Foi possível verificar que, entre os clones tolerantes há diferentes mecanismos de respostas ao estresse. O pirossequenciamento 454 permitiu gerar mais de 4 milhões de reads a partir de 08 bibliotecas de raízes de C. canephora provenientes dos clones nas duas condições, o que possibilitou a ampliação dos dados de sequências para este tecido. Vários genes candidatos foram identificados e avaliados quanto à resposta da planta ao déficit hídrico, como em relação a biossíntese do ABA e aos estresses osmóticos e oxidativos. A técnica LC-MS permitiu a identificação de 598 proteínas, o que representa cerca de 1% do proteoma conhecido de C. canephora. Para algumas proteínas foi possível identificar diferentes formas alélicas. De forma geral, a resposta dos clones de C. canephora ao déficit hídrico foi evidenciada neste trabalho. Na maioria dos casos há correspondência entre os resultados das técnicas “Omicas” utilizadas. Entretanto, ainda é necessário o aprimoramento das técnicas para identificação proteica, como por meio da utilização de sequências genótipo-específicas, considerada uma alternativa para futuras análises integradas, possibilitando a compreensão dos mecanismos de regulação e dos pontos de controle do fluxo da informação gênica. Em complemento aos trabalhos anteriores, no qual foram utilizadas folhas, também foi possível identificar vários genes de tolerância à seca em raízes de cafeeiro.Item Micropropagação do cafeeiro por embriogênese somática via biorreator de imersão temporária(Universidade Federal de Lavras, 2011-11-18) Maciel, Anna Lygia de Rezende; Pasqual, MoacirO trabalho foi realizado em 2 etapas, na primeira, o objetivo foi otimizar a micropropagação do cafeeiro por embriogênese somática via biorreator. Os delineamentos experimentais utilizados foram inteiramente casualizados e os materiais vegetais foram matrizes 03, 05 e 18 da população de Siriema. Experimento 1: foi instalado em esquema fatorial 2x2, constituídos por 2 meios de cultura: “T3” e “MM” e 2 tipos de calos: claros e escuros, com 6 repetições. Avaliou-se, aos 60 dias, por meio da: massa fresca final e aumento de massa dos calos, densidade final das células e porcentagem do incremento de calos. Experimento 2: foram utilizadas concentrações de ANA - ácido naftaleno acético - (0,0; 0,25; 0,50; 1,00 e 2,00 mg.L -1 ) adicionadas em meio “RM”, com 6 repetições. Avaliou-se aos 60 dias o número total de embriões. Experimento 3: foram usadas 5 concentrações de Prolina (0,0; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 g.L -1 ) adicionadas em meio RR, com 5 repetições e 4 setores de 100g de calos. Avaliou-se aos 120 dias o número total de embriões. Experimento 4: os tratamentos constituíram-se dos meios de cultura: T5A, T5A 1, T5A 2, T5A3 e T5A4 com 6 repetições, sendo inoculados 500 embriões por biorreator. Após 84 dias, avaliaram-se: número de embriões germinados, % de plântulas pequenas, médias e grandes e % de plântulas pequenas, médias e grandes enraizadas. O meio de cultura “MM” apresenta a maior multiplicação de calos, ANA e prolina promovem maior número de embriões e o emprego do biorreator é eficiente no processo. O objetivo da segunda etapa foi avaliar a aclimatização de somaclones de cafeeiro oriundos de biorreator. Experimento 1: foi instalado em esquema fatorial 4X3 (4 substratos: fibra de coco; 2/3 fibra de coco+1/3 areia; plantmax e 2/3plantmax+1/3 areia e 3 tamanhos de embriões cotiledonares: pequeno, médio e grande) com 4 repetições de 25 embriões. Aos 60 dias, foi avaliada a % de conversão de embriões cotiledonares em plântulas. Experimento 2: foi instalado em esquema fatorial 4X5 (4 substratos: fibra de coco; 2/3 fibra de coco+1/3 vermiculita; plantmax e 2/3plantmax+1/3 vemiculita e Stimulate: 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; e 2,0 ml.L -1 ) com 4 repetições de 25 embriões. Aos 60 dias, avaliou-se a porcentagem de conversão. Experimento 3: foi em esquema fatorial 2X5 (substratos: plantmax e 2/3plantmax + 1/3 de vermiculita e osmocote: 0,0; 2,72; 5,45; 8,18 e 10,90g.L -1 ), com 4 repetições e 5 plantas por parcela. As avaliações foram realizadas aos 180 dias por meio: altura de plantas, diâmetro de caule, número de pares de folhas, área foliar, matéria fresca e seca de raízes e parte aérea e teores de nutrientes nas folhas. O maior porcentual de conversão é obtido com plântulas médias em plantmax, o substrato composto por plantmax e vermiculita apresenta maior porcentagem de conversão em concentrações crescentes destimulate e o osmocote na concentração de 10,9g.L -1 proporciona maior desenvolvimento das mudas.Item Embriogênese somática indireta em clones elite de Coffea arabica L.(Universidade Federal de Lavras, 2008-08-29) Rezende, Juliana Costa de; Pasqual, MoacirEste trabalho foi conduzido visando alcançar alta eficiência na embriogênese somática indireta em explantes foliares de plantas matrizes de Coffea arabica. Na indução de embriões somáticos, avaliou-se o potencial de produção de calos embriogênicos de clones elites em diferentes meios de cultura e variações nas concentrações de 2,4-D e 2-iP, nos meios primário e secundário de Teixeira et al. (2004 ). Na fase de multiplicação de calos, os tratamentos constituíram-se de dois meios de cultura (meio do estágio dois de Albarran et al., 2004 e meio de multiplicação de Teixeira et al., 2004) e dois sistemas de cultivo (gelificado e líquido). As avaliações foram realizadas aos 21, 42 e 63 dias após a instalação do experimento, por meio da pesagem dos calos. Na conversão de embriões somáticos em estádio cotiledonar para plântulas, avaliou-se o efeito do IBA e do BAP no meio de crescimento (PRM) de Teixeira et al. (2004). Plantas produzidas via embriogênese somática foram comparadas, em condições de campo, com plantas provenientes de sementes. Observou-se que a produção de embriões somáticos é fortemente dependente do genótipo. A indução de calos depende da época de coleta dos explantes e da relação de 2-iP e 2,4-D. O sistema gelificado apresentou maior eficiência na multiplicação de calos embriogênicos dos clones estudados. Considerando a porcentagem plântulas normais e plântulas com raízes e os valores médios do comprimento da parte aérea, não há necessidade da adição de IBA e BAP, no protocolo empregado, para a conversão de embriões somáticos em estádio cotiledonar para plântulas. As plantas provenientes de embriogênese somática apresentaram maior diâmetro de copa em relação às plantas provenientes de sementes, não havendo diferença significativa para as demais características avaliadas. Não foi detectada, pela inspeção visual, qualquer alteração no fenótipo na plantas provenientes da embriogênese somática. Assim, o comportamento de plântulas de Coffea arabica produzidas via embriogênese somática é semelhante ao de plântulas oriundas de sementes.