SPCB - Simpósio de Pesquisa dos Cafés do Brasil
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Item Análise histológica comparativa da indução de calos em genótipos de Coffea(2005) Barbosa, Wellington Marota; Meira, Renata Maria Strozi Alves; Cordeiro, Antônio Teixeira; Otoni, Wagner Campos; Sakiyama, Ney Sussumu; Embrapa - CaféNeste trabalho foram avaliados os genótipos Catimor (híbrido UFV 395-141) e o cultivar Apoatã (C. canephora). A reação calogênica em explantes foliares de C. canephora cv. Apoatã foi induzida em cultivo unifásico com BAP como regulador de crescimento. Para o genótipo Catimor utilizou-se o sistema bifásico com citocinina e auxina. Foram confeccionadas lâminas de amostras dos explantes foliares que, depois de coletados e fixados foram incluídos em metacrilato, cortados em micrótomo rotativo, corados com azul de toluidina e submetidos aos testes histoquímicos para detecção de polissacarídeos neutros (P.A.S. - "Periodic Acid Schiff") e de proteína (XP - "Xylidine Ponceau"). Sugere-se que as diferenças na resposta dos explantes a diferentes condições indutoras possam ser utilizadas como marcadores estruturais para seleção de cultivos de explantes potencialmente embriogênicos.Item Manose como fonte de carboidrato na calogênese induzida em explantes foliares de Coffea arabica e de C. canephora(2003) Barbosa, Wellington Marota; Cordeiro, Antônio Teixeira; Cruz, Ana Claudia Ferreira da; Otoni, Wagner Campos; Zambolim, Laércio; Sakiyama, Ney Sussumu; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféNa cultura de tecidos, o carboidrato mais comumente utilizado como fonte de energia e carbono é sacarose. Outros carboidratos podem promover diferentes variações de crescimento, a exemplo de manose, que pode inviabilizar o crescimento celular em espécies como Bixa orellana e Zea mays. Este resultado origina-se da ausência da enzima isomerase da manose-fosfato, que impedindo a metabolização da manose-fosfato, causa efeitos negativos no processo glicolítico e na disponibilidade de ortofosfato. Esta característica pode, entretanto, ser útil para a seleção de regenerantes de tecidos desprovidos da enzima transformados com o gene manose-fosfo- isomerase. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de manose na calogênese induzida em explantes foliares de Coffea arabica cv. Catuaí Vermelho IAC H2077-2-5-15 e C. canephora cv. Apoatã IAC LC 2258, que reagem favoravelmente à produção de calos friáveis embriogênicos (CFE) quando o carboidrato utilizado é sacarose. Explantes foliares desinfestados foram cultivados em placas de Petri contendo meios autoclavados constituídos de açúcar 30 Kg.m -3 , vitaminas de Gamborg combinados com macro e micronutrientes MS, cisteína 0,272 mol.m -3 , Gelriteä 0,3%, 2,4-D 4,6 mmol.m -3 e KIN 18,6 mmol.m -3 (NS), com macro e micronutrientes MS, cisteína 0,272 mol.m -3 , ágar 0,8% e BAP 20 mmol.m -3 (A) ou com macro e micronutrientes Yasuda, cisteína 0,165 mol.m -3 e BAP 5 mmol.m -3 (B). O componente açúcar foi suprido nas seguintes combinações sacarose:manose 3:0, 2:1, 1:1, 1:2 e 0:3. O pH foi ajustado para 5,6. As placas foram mantidas no escuro a 25 ± 2ºC. Quatro semanas após o início da indução, todos os explantes foram subculturados para os mesmos meios indutores, à exceção daqueles cultivados no meio NS, que foi modificado nas concentrações de macro e micronutrientes e de KIN, reduzidas à metade e para 4,6 mmol.m -3 , respectivamente, e na substituição da auxina, 2,4-D por ANA 0,54 mmol.m -3 . As renovações posteriores ocorreram a intervalos de quatro ou oito semanas. Após 24 semanas de pós-indução, os explantes de ambos os genótipos cultivados na seqüência NS produziram praticamente calos mistos, independentemente do tipo de açúcar no meio semi-sólido. Calos mistos são formações globulares compactas associadas a formações amorfas de células alongadas e moles ao tato, que se caracterizam por crescimento visivelmente mais rápido. Todavia, quando explantes foliares do arábica Catuaí Vermelho foram cultivados em meio A, a reação calogênica mais freqüente foi a cicatricial em resposta a todas as combinações de sacarose:manose, à exceção de quando a fonte de açúcar foi 100% manose, que induziu também calos embriogênicos em 7% dos explantes, aproximadamente. Relativamente aos explantes foliares do canéfora Apoatã cultivados em meio B, todas as razões sacarose:manose induziram CFE’s. Todavia, as maiores freqüências desta reação calogênica foram induzidas quando ambas as fontes foram utilizadas nos meios indutivos. A combinação das duas fontes duplicou, de maneira geral, as freqüências de CFE’s (60 a 72%) relativamente a apenas sacarose (32%). Os CFE’s obtidos foram utilizados para estabelecer culturas líquidas com vistas a estudos futuros relacionados à influência da razão sacarose:manose na cinética de crescimento e diferenciação embriogênica das cepas.Item Embriogênese somática em híbridos de Coffea arabica para a propagação clonal(2003) Barbosa, Wellington Marota; Cordeiro, Antônio Teixeira; Cruz, Ana Claudia Ferreira da; Zambolim, Laércio; Sakiyama, Ney Sussumu; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféA propagação clonal de cafeeiros, em grande escala, requer a indução de calos friáveis embriogênicos (CFE) para o estabelecimento de culturas líquidas e sua diferenciação embriogênica posterior. Considerando-se que as condições indutoras para a produção de CFE’s possuem, aparentemente, um caráter de genótipo-especificidade, testaram-se diferentes meios de cultura para a indução desta reação calogênica em explantes foliares de três genótipos híbridos segregantes oriundos do programa de melhoramento genético da UFV-EPAMIG. Os genótipos escolhidos foram o híbrido Catimor F 3 UFV 395-141, o híbrido F 1 337- 610, entre Catuaí Vermelho x Híbrido de Timor CIFC 832-1, e o híbrido F 1 447-12, entre Mundo Novo x Híbrido de Timor UFV 337-1. Explantes foliares destes cafeeiros, após desinfeção em solução de hipoclorito de cálcio 5% contendo Tween 20 0,04%, foram distribuídos com o lado adaxial em contato com o meio semi-sólido contido em placas de Petri estéreis. Cada placa recebeu, inicialmente, cinco explantes, sendo o conjunto repetido vinte vezes e mantidos em condições de obscuridade a 25ºC. Os meios de cultura continham sacarose 30 Kg.m -3 , Gelriteä 0,3%, vitaminas de Gamborg combinados com macro e micronutrientes MS ½ força, cisteína 0,272 mol.m -3 e os reguladores de crescimento BAP (B = 0; 0,1; 1; 5; 10 e 20 mmol.m -3 ) e 2,4-D (D = 0; 1 e 10 mmol.m -3 ), que originaram os seguintes tratamentos: B0,1 (BAP 0,1 mmol.m -3 e 2,4-D 0 mmol.m -3 ); B0,1D1; B1; B1D1; B1D10; B5; B5D10; B10; B10D1; B10D10; B20; B20D10 e D10. A barra indica sucessão de dois meios de cultivo, primário e secundário, com o segundo introduzido na primeira repicagem, que ocorreu aos trinta dias do início da indução. As subculturas subseqüentes ocorreram a intervalos variando de 30 a 60 dias entre si. Aos oito meses de pós-indução, calos embriogênicos (CE) foram induzidos em explantes dos três genótipos experimentados. Todavia, as suas condições indutoras confirmaram o caráter de genótipo-especificidade. Assim, as maiores produtividades embriogênicas ocorreram para os genótipos Catimor 395 (45 embriões.explante -1 ) e os híbridos 337 (38 embriões.explante -1 ) e 447 (45 embriões.explante -1 ) quando 2,4-D foi suprido no meio primário e BAP no meio secundário, ambos os reguladores associados apenas no meio secundário e ambos os reguladores associados apenas no meio primário, respectivamente. CFE’s foram induzidos em explantes foliares dos três genótipos. Embora para os híbridos 337 (10%) e 447 (12%) o único tratamento eficaz tenha sido B5/B5D10, explantes de Catimor induziram CFE’s em resposta aos tratamentos B5/ B5D10 e B20D10, nas freqüências de 12 e 7% dos explantes, respectivamente. Estes calos foram utilizados para o estabelecimento de culturas líquidas. Todavia, aqueles CFE’s obtidos em explantes Catimor em resposta ao meio B20D10 oxidaram-se rapidamente em meio líquido com perda do potencial embriogênico. Para todos os genótipos experimentados, os agregados celulares induzidos com B5/B5D10 foram distribuídos e transferidos para meios líquidos contendo B5D10, B5D5 e B5D1. Depois de estabelecidas tais cepas, avaliaram-se seus potenciais embriogênicos em meios contendo sais MS força total (MD 1 ) ou ½ força (MD 2 ). Após oito semanas, a produtividade embriogênica do Catimor foi de 145.000, 140.000, 148.000, 140.000, 120.000 e 80.000 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares para as cepas B5D10-MD 1 , B5D10-MD 2 , B5D5-MD 1 , B5D5-MD 2 , B5D1-MD 1 e B5D1-MD 2 , respectivamente. Relativamente ao híbrido 337, as produtividades embriogênicas foram 78.000, 80.000, 160.000, 90.000, 168.000 e 100.000 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares para as cepas B5D10-MD 1 , B5D10- MD 2 , B5D5-MD 1 , B5D5-MD 2 , B5D1-MD 1 e B5D1-MD 2 , respectivamente. Já para o híbrido 447, tais produtividades embriogênicas foram de 90.000, 92.000, 16.000 e 40.000 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares para as cepas B5D10-MD 1 , B5D10-MD 2 , B5D5-MD 1 e B5D5-MD 2 , respectivamente. A cepa B5D1, independentemente da concentração de macro e microelementos MS, não diferenciou embriões. Amostras de embriões somáticos tipo torpedo dos três genótipos foram tomadas para avaliação do desenvolvimento embriogênico, em curso no momento. Uma segunda avaliação de diferenciação embriogênica das cepas encontra-se em curso, no momento, para verificação do efeito da idade da cepa sobre o seu potencial embriogênico.Item Embriogênese somática em explantes foliares de Catuaí Vermelho e de Robusta 201 via cultura líquida(2003) Fontes, Marcelo A.; Cordeiro, Antônio Teixeira; Frederico, Antônio H.; Zanetti, Rômulo S.; Camargo, Francelino P.; Cruz, Ana Claudia Ferreira da; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféA embriogênese somática indireta pode promover uma desejável multiplicação clonal de genótipos de Coffea desde que sejam estabelecidas as condições indutoras para a produção de calos friáveis embriogênicos (CFE), para o estabelecimento de culturas líquidas e para a sua diferenciação embriogênica. Estas condições indutoras têm sido verificadas variar intra e interespecificamente. Assim, submeteram-se explantes foliares obtidos de sistemas caulinares de Coffea arabica cv. Catuaí Vermelho IAC H2077-2-5-15 e de C. canephora cv. Robustão clone 201, cultivados in vitro, a diferentes meios de cultura para a produção de CFE’s com vistas ao estabelecimento de culturas líquidas potencialmente embriogênicas. Todos os explantes foram cultivados em dois meios indutivos, primário e secundário. O meio primário foi utilizado nas quatro semanas iniciais de indução, quando se fizeram, então, subculturas para meios secundários. Para o genótipo Catuaí Vermelho, os meios de cultura primários experimentados foram constituídos dos sais de Murashige e Skoog (MS) ½ força, complexo vitamínico Gamborg, glicina 1 g.m -3 , caseína hidrolisada 100 g.m -3 , extrato de malte 100 g.m -3 , sacarose 3% e GelriteTM 0,3% acrescido dos reguladores de crescimento 2,4-D (1,13 ou 2,26 mmol.m -3 ), AIB (2,45 ou 4,9 mmol.m -3 ) e 2-iP (9,84 ou 19,68 mmol.m -3 ), que originaram os seguintes tratamentos: BM 1 (2,4- D 1,13 mmol.m -3 + AIB 2,45 mmol.m -3 + 2-iP 9,84 mmol.m -3 ); BM 2 (2,4-D 2,26 mmol.m -3 + AIB.4,90 mmol.m -3 + 2-iP 9,84 mmol.m -3 ) e BM 3 (2,4-D 2,26 mmol.m -3 + AIB 4,90 mmol.m -3 + 2-iP 19,68 mmol.m -3 ). Para o clone 201, os meios de cultura primários experimentados foram o meio BM 2, A e B. Os meios A e B foram constituídos dos sais MS, complexo vitamínico Morel, sacarose 3% e GelriteTM 0,3%. Com relação aos reguladores de crescimento, testaram-se 2,4-D 1,5 mmol.m -3 + BAP 7,5 mmol.m -3 e 2,4-D 4,52 mmol.m -3 + cinetina 4 mmol.m -3 para os meios A e B, respectivamente. O meio secundário para explantes Catuaí continha sais MS ½ força, tiamina 20 g.m -3 , glicina 20 g.m -3 , cisteína 40 g.m -3 , mio-inositol 200 g.m -3 , sulfato de adenina 60 g.m -3 , caseína hidrolisada 200 g.m -3 , extrato de malte 800 g.m -3 , sacarose 3% e GelriteTM 0,3% e 2,4-D 4,52 mmol.m -3 + BAP 17,6 mmol.m -3 (BME). Os meios secundários para explantes Robustão foram BME e E, esse de composição semelhante àquela do meio primário A ou B, à exceção dos reguladores de crescimento, que foi BAP 5 mmol.m -3 (E). O pH de todos os meios foi ajustado para 5,6. CFE’s foram induzidos em explantes de ambos os genótipos em resposta a todas as condições indutoras experimentadas. Para explantes Catuaí, estas reações calogênicas ocorreram em freqüências de 6, 32 e 27% para as condições indutoras BM 1 /BME, BM 2 /BME e BM 3 /BME, respectivamente. Para explantes Robustão, as freqüências de CFE’s foram de 88, 22 e 7% para as condições indutoras BM1/BME, A/E e B/E, respectivamente. Estes CFE’ s foram utilizados para estabelecer culturas líquidas. Uma vez estabelecidas, o estudo de suas cinéticas de crescimento revelou, imediatamente após subcultura, uma fase exponencial de crescimento celular até um ponto de inflexão, a partir do qual as taxas de crescimento reduziram-se progressivamente para atingir um peso de matéria fresca de agregados celulares assintótico. As diferenciações embriogênicas das cepas de Catuaí BM 1 /BME, BM 2 /BME e BM 3 /BME produziram 6.600, 17.500 e 11.900 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares, respectivamente. Para as cepas do canéfora 201 BM1/BME, A/E e B/E obtiveram-se 161.000, 134.000 e 121.000 embriões.g -1 de matéria fresca de agregados celulares, respectivamente. Amostras destes embriões somáticos foram tomadas para avaliação de seus índices de conversão à planta. Encontram-se, também, em curso, avaliações de diferenciação embriogênica das cepas para verificação do efeito da idade da cepa sobre o seu potencial embriogênico.Item Calogênese friável em Coffea arabica e C. canephora(2001) Santos, Aparecida Célia Paula dos; Cordeiro, Antônio Teixeira; Figueira, Maíra Lima; Zanetti, Rômulo Sarcinelli; Cruz, Ana Cláudia Ferreira da; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO conhecimento das condições genótipo-específicas para a calogênese friável embriogênica em genótipos de Coffea de interesse é de suma importância para a propagação clonal em grande escala. Para isso, submeteram-se explantes foliares do arábica Catuaí Vermelho e do canéfora Apoatã a diferentes meios de cultura para a indução de calos friáveis embriogênicos. Estes calos, que foram obtidos em explantes de Apoatã e de Catuaí Vermelho aos sete e aos dez meses do início da indução, respectivamente, foram utilizados para o estabelecimento de culturas líquidas. As suspensões celulares revelaram, imediatamente após subcultura, uma fase exponencial de crescimento celular até um ponto de inflexão, a partir do qual as taxas de crescimento reduziram progressivamente, para atingir um peso de matéria fresca dos agregados celulares assintótico. A diferenciação embriogênica de agregados celulares Apoatã, em cultura líquida, rendeu cerca de 12.000 embriões g -1 matéria fresca de agregados celulares.Item Calogênese em Coffea via cultura semi-sólida(2000) Santos, Aparecida Célia Paula dos; Cordeiro, Antônio Teixeira; Campos, Maria Rita de Cássia; Otoni, Wagner Campos; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO conhecimento das condições genótipo-específicas para as calogêneses embriogênica e friável embriogênica em genótipos de Coffea de interesse é de suma importância para as propagações in vitro em grande escala. Para tanto, submeteram-se explantes foliares dos híbridos interespecíficos Catimor e Cavimor, do canéfora Apoatã e do arábica Catuaí Vermelho a diferentes meios de cultura supostamente indutores de calos. À exceção do Cavimor, todos os genótipos estudados responderam favoravelmente à calogênese primária tipo embriogênica, aos quatro meses de cultura. Aos sete meses de pós-indução, enquanto explantes foliares de Apoatã expressavam calos embriogênicos em todos os meios, aqueles de Catuaí os expressaram praticamente quando a razão auxina/citocinina (1/5) foi mantida constante nos meios de indução e de diferenciação. Esta mesma combinação de meios induziu a maior freqüência de calos friáveis embriogênicos em explantes de Apoatã. O rendimento embriogênico foi maior em calos de Apoatã relativamente àqueles de Catuaí Vermelho.