SPCB - Simpósio de Pesquisa dos Cafés do Brasil
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Resultados da Pesquisa
Item Caracterização de promotores de Coffea spp. via transformação genética em planta modelo(Embrapa Café, 2019-10) Girotto, Larissa; Ivamoto-Suzuki, Suzana Tiemi; Oliveira, Fernanda Freitas de; Aryoshi, Caroline; Santos, Tiago Benedito dos; Pereira, Luiz Filipe ProtasioAs mudanças climáticas globais têm causados danos a produtividade agrícola cafeeira com impactos econômicos e sociais, e apresentam o potencial de reduzir áreas disponíveis para o plantio de cafeeiros. Diante deste cenário foi investigado o potencial do promotor da galactinol sintase (GolS) do gênero Coffea, que catalisa a primeira etapa da via de síntese de oligossacarídeos da família da Rafinose, cujo acúmulo ocorre principalmente em resposta a estresses abióticos. Entender a estrutura e composição de sequências gênicas promotoras de cafeeiros é de fundamental importância para compreender melhor os mecanismos genéticos e os processos de regulação da expressão gênica induzidos em períodos de estresse hídrico e salino. Neste estudo identificamos 14 promotores GolS presentes nos genomas de Coffea arabica, C. canephora e C. eugenioides. Dentro das regiões promotoras desses genes, foram observados 12 cis-elementos relacionados a regulação de genes em resposta a condições adversas, dentre eles: ARE, ABRE, MYB e STRE. Após a caracterização in silico dos 14 promotores, o promotor da isoforma de GolS3 (CcGolS3) de Coffea canephora (Cc) foi clonada com o objetivo de verificar o seu comportamento frente a estresses abióticos. Plasmídeos contendo a construção pCcGolS3::GUS (gene repórter da β-glucuronidase) foram inseridos em Arabidopsis thaliana via transformação genética com Agrobacterium tumefaciens. A coloração histoquímica do gene repórter GUS foi verificada em todos os tecidos de A. thaliana transformadas. Para analisar o comportamento deste promotor, as plantas de A. thaliana foram submetidas a estresses hídrico e salino in vitro (0h, 12h, 24h e 48h), os seus respectivos RNAs foram extraídos e a síntese de cDNA foi realizada para a quantificação da atividade transcricional do gene repórter GUS via RT-qPCR. Os nossos resultados indicaram que o promotor de CcGolS3 pode ser caracterizado como do tipo estresse-induzido, visto que o perfil transcricional do gene GUS diretamente proporcional ao tempo de duração dos estresses. O promotor do gene CcGolS3 apresenta um grande potencial para ser utilizado em projetos futuros de melhoramento genético de cafeeiros e obtenção de plantas mais tolerantes a estresses abióticos.Item Características morfofisiológicas de genótipos de Coffea canephora sob condições contrastantes de irradiância(Embrapa Café, 2019-10) Silva, Carlos Antônio Pelúzio; Pianissolli, Guilherme Chrisóstomo; Silva, Josimar Aleixo da; Alves, Lucas da Silva; Machado, Lindomar de Souza; Cavatte, Paulo CezarO café é originário das florestas tropicais da África, onde é encontrado em estado espontâneo como vegetação de sub-bosque. Todavia, no Brasil, os cafezais vêm sendo conduzidos quase exclusivamente a pleno sol, Contudo, cafezais a pleno sol são geralmente subsidiados às custas de grandes incrementos no uso de insumos. Sistemas de cultivos sombreados são mais sustentáveis e a utilização de genótipos que apresentem maior eficiência do uso de recursos, fatos que têm despertado um interesse crescente no consórcio do cafeeiro com árvores de maior porte. Assim, objetivou-se avaliar o desempenho de genótipos de C. canephora submetidos a condições contrastantes de irradiância, a partir de características morfofisiológicas. Foram avaliadas as características índice de clorofila (CLO), área foliar unitária (AFU), área foliar especifica (AFE), razão de área foliar (RAF) em 14 genótipos de C. canephora submetidos a diferentes disponibilidades de irradiância (a pleno sol e o 30% de sombra). Todas as características avaliadas foram influenciadas pela disponibilidade de irradiância, exceto o índice de clorofila (CLO), neste foram detectadas apenas diferenças entre os genótipos. Os genótipos apresentaram desempenho diferenciado para CLO, AFU, AFE e RAF. Além, dissoo s genótipos apresentaram maiores valores de AFU sob sombreamento, exceto para o genótipo 4, sendo este um potencial candidato para composição de cultivares tolerantes a baixas irradiâncias.Item Ensaio de déficit hidríco de Setaria viridis transformada com o gene órfão CcUNK8 de Coffea canephora(Embrapa Café, 2015) Duarte, Karoline Estefani; Vieira, Natália Gomes; Rêgo, Érica C. S.; Martins, Polyana Kelly; Ribeiro, Ana Paula; Cunha, Bárbara A. D. B. da; Molinari, Hugo Bruno Correa; Kobayashi, Adilson Kenji; Sousa, Carlos Antônio de; Marraccini, Pierre; Andrade, Alan CarvalhoAs plantas respondem e se adaptam as condições de estresses com uma série de alterações morfológicas, fisiológicas e moleculares. Ao nível molecular, a expressão diferencial de genes para tolerar as condições adversas é um bom indicativo da resposta da planta ao meio ambiente. Encontrar a função destes genes pode facilitar o entendimento da relação planta-ambiente. No intuito de entender os processos que levam algumas plantas a terem uma maior tolerância à seca, ocorreram avanços na descoberta e descrição de genes envolvidos neste processo. Algumas destas sequencias não possuem nenhuma similaridade com sequencias depositadas nos bancos de dados públicos, e são denominadas “no hits” ou genes órfãos. O gene CcUNK8 (UNKnown) foi previamente identificado em plantas de Coffea canephora Conilon como potencialmente envolvido no processo de tolerância à seca. Para estudar a função biológica deste gene, ele foi clonado no T-DNA de um vetor de transformação e sobre o controle do promotor constitutivo pUBI de milho. Essa construção foi usada para realizar a transformação genética de Setaria viridis via o uso de Agrobacterium tumefaciens. Os eventos de Setaria viridis transformados com pUBI:CcUNK8 foram submetidos ao ensaio de déficit hídrico.Item Identificação e caracterização de genes órfãos (“no hits”) de café (Coffea canephora), envolvidos na resposta à seca(Embrapa Café, 2013) Duarte, Karoline Estefani; Vieira, Natália Gomes; Martins, Polyana Kelly; Ribeiro, Ana Paula; Cunha, Bárbara Andrade D. B. da; Molinari, Hugo Bruno Correa; Kobayashi, Adilson Kenji; Marraccini, Pierre; Andrade, Alan CarvalhoO café é uma planta perene, sendo considerada uma das commodities agrícolas mais importantes do mundo. Por consequencia, visando-se o estabelecimento de ferramentas de auxílio para se acelerar o melhoramento genético desta espécie, avanços significativos em genômica do cafeeiro têm ocorrido nos últimos anos. Como exemplo, pode-se citar a recente conclusão do sequenciamento do genoma completo de Coffea canephora, que servirá de referência para utilização em trabalhos avançados de genética molecular, aplicados diretamente ao melhoramento genético desta espécie, tais como o estabelecimento de programas de seleção genômica ampla (SGA) em cafeeiro. Análises recentes de bioinformática dos genomas completos de plantas indicam que cerca de 20-30% do total de genes de cada genoma são inéditos e específicos de cada espécie. Ou seja, essas sequencias genicas não apresentam similaridade alguma com as já depositadas nas bases de dados mundiais e são comumente denominadas de “no hits”. Conceitos recentes, denominam esses “no hits” como “genes órfãos” e postulam que o surgimento dos mesmos são resultantes de respostas adaptativas específicas de cada espécie em função de estresses e condições adversas por essas enfrentadas, durante o processo evolutivo. Nosso trabalho está focado na identificação e caracterização funcional dos genes órfãos de café, por apresentarem alto potencial de inovação e aplicação biotecnológica. O presente estudo apresenta dados obtidos para alguns desses genes orfãos, denominados de CcUnk (Unknown), previamente identificados no genoma de C. canephora e com foco especial àqueles CcUnk genes potencialmente envolvidos na resposta à seca.