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Item Transformação genética de Coffea arabica através do bombardeamento de calos embriogênicos e seleção em canamicina(2003) Cunha, Welcimar Gonçalves da; Barros, Érika V. S. A.; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféA obtenção de novos cultivares adaptadas às necessidades da produção agrícola é um desafio constante no melhoramento genético do cafeeiro. Nos últimos anos, a criação de técnicas biotecnológicas vem trazendo novas perspectivas para o melhoramento genético do cafeeiro ao permitir a introdução de genes específicos em variedades elite em um espaço de tempo significativamente reduzido. Entretanto, apesar dos vários estudos já desenvolvidos, ainda não foi descrito um protocolo de alta eficiência para a obtenção de plantas transgênicas de C. arabica. Como alternativa aos protocolos já existentes ou em estudo, o presente trabalho tem por objetivo o estabelecimento de um protocolo eficiente para a introdução de transgenes em C. arabica. Neste trabalho são apresentados resultados do bombardeamento de calos embriogênicos e seleção de transformantes em canamicina. Discos foliares de C. arabica variedade Catuaí Vermelho foram cultivados em meio C modificado contendo 20mM de 2,4-D e incubados por 6 meses. A massa de calos embriogênicos formada foi bombardeada 24 h após pré-tratamento osmótico com manitol 0,5 M. Para este procedimento foi utilizado o vetor pBI 426 contendo o gene gus, que codifica a enzima ²-glucuronidase, e o gene nptII que confere resistência a canamicina. A massa de calos bombardeados foi então transferida para o meio C modificado e subcultivada em doses crescentes de canamicina. Os embriões regenerantes em canamicina 400 mg/L foram transferidos para o meio WPM. O teste histoquímico dos calos, embriões ou folhas das plantas regenerantes em meio seletivo revelou a atividade da enzima GUS, indicando assim que a técnica é eficiente para a introdução de transgenes de interesse em C. arabica. As análises moleculares das plantas obtidas estão em andamento para a confirmação da transformação. Desta forma, os resultados obtidos indicam que uma nova e promissora metodologia, visando à introdução de genes de interesse em C. arabica, está sendo estabelecida. De acordo com os trabalhos de biolística em outras culturas, é possível que este método também seja viável para variados genótipos de café.Item Identificação de sequências NBS-RGA de Coffea canephora(2003) Barros, Érika V. S. A.; Fragoso, Rodrigo R.; Machado, Flávia R.; Bertioli, David; Sá, Maria Fátima Grossi de; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféC. arabica é uma espécie altamente susceptível a pestes e doenças. Os nematóides causam danos severos às plantações de café do Brasil. Atualmente, as espécies de Meloidogyne mais agressivas são M. incognita, M. paranaensis e M. exigua. Neste trabalho são descritos os resultados obtidos da amplificação do DNA de um genótipo de C. canephora resistente ao M. paranaensis através de iniciadores degenerados desenhados para se ligarem ao domínio NBS (nucleotide binding site) dos RGAs (resistance genes analogues) em estudo. Os clones positivos foram seqüenciados e os dados resultantes analisados com os programas Blastx, Staden e Clustal. As análises revelaram que foram isoladas seqüências do tipo NBS, conforme esperado. A comparação das sequências traduzidas revelou correlação com os genes de resistência já descritos em diferentes espécies de plantas. As seqüências tipo NBS clonadas serão úteis na busca dos genes completos de C. canephora que possam ser testados para a conferência de resistência aos nematóides em plantas modelo, com a finalidade futura de desenvolver genótipos elite de C. arabica resistentes aos nematóides.