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Resultados da Pesquisa
Item Análise histológica comparativa da indução de calos em genótipos de Coffea(2005) Barbosa, Wellington Marota; Meira, Renata Maria Strozi Alves; Cordeiro, Antônio Teixeira; Otoni, Wagner Campos; Sakiyama, Ney Sussumu; Embrapa - CaféNeste trabalho foram avaliados os genótipos Catimor (híbrido UFV 395-141) e o cultivar Apoatã (C. canephora). A reação calogênica em explantes foliares de C. canephora cv. Apoatã foi induzida em cultivo unifásico com BAP como regulador de crescimento. Para o genótipo Catimor utilizou-se o sistema bifásico com citocinina e auxina. Foram confeccionadas lâminas de amostras dos explantes foliares que, depois de coletados e fixados foram incluídos em metacrilato, cortados em micrótomo rotativo, corados com azul de toluidina e submetidos aos testes histoquímicos para detecção de polissacarídeos neutros (P.A.S. - "Periodic Acid Schiff") e de proteína (XP - "Xylidine Ponceau"). Sugere-se que as diferenças na resposta dos explantes a diferentes condições indutoras possam ser utilizadas como marcadores estruturais para seleção de cultivos de explantes potencialmente embriogênicos.Item Calogênese friável em Coffea arabica e C. canephora(2001) Santos, Aparecida Célia Paula dos; Cordeiro, Antônio Teixeira; Figueira, Maíra Lima; Zanetti, Rômulo Sarcinelli; Cruz, Ana Cláudia Ferreira da; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO conhecimento das condições genótipo-específicas para a calogênese friável embriogênica em genótipos de Coffea de interesse é de suma importância para a propagação clonal em grande escala. Para isso, submeteram-se explantes foliares do arábica Catuaí Vermelho e do canéfora Apoatã a diferentes meios de cultura para a indução de calos friáveis embriogênicos. Estes calos, que foram obtidos em explantes de Apoatã e de Catuaí Vermelho aos sete e aos dez meses do início da indução, respectivamente, foram utilizados para o estabelecimento de culturas líquidas. As suspensões celulares revelaram, imediatamente após subcultura, uma fase exponencial de crescimento celular até um ponto de inflexão, a partir do qual as taxas de crescimento reduziram progressivamente, para atingir um peso de matéria fresca dos agregados celulares assintótico. A diferenciação embriogênica de agregados celulares Apoatã, em cultura líquida, rendeu cerca de 12.000 embriões g -1 matéria fresca de agregados celulares.Item Calogênese em Coffea via cultura semi-sólida(2000) Santos, Aparecida Célia Paula dos; Cordeiro, Antônio Teixeira; Campos, Maria Rita de Cássia; Otoni, Wagner Campos; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO conhecimento das condições genótipo-específicas para as calogêneses embriogênica e friável embriogênica em genótipos de Coffea de interesse é de suma importância para as propagações in vitro em grande escala. Para tanto, submeteram-se explantes foliares dos híbridos interespecíficos Catimor e Cavimor, do canéfora Apoatã e do arábica Catuaí Vermelho a diferentes meios de cultura supostamente indutores de calos. À exceção do Cavimor, todos os genótipos estudados responderam favoravelmente à calogênese primária tipo embriogênica, aos quatro meses de cultura. Aos sete meses de pós-indução, enquanto explantes foliares de Apoatã expressavam calos embriogênicos em todos os meios, aqueles de Catuaí os expressaram praticamente quando a razão auxina/citocinina (1/5) foi mantida constante nos meios de indução e de diferenciação. Esta mesma combinação de meios induziu a maior freqüência de calos friáveis embriogênicos em explantes de Apoatã. O rendimento embriogênico foi maior em calos de Apoatã relativamente àqueles de Catuaí Vermelho.Item Embriogênese somática indireta e fusão interespecífica de protoplastos em Coffea(Universidade Federal de Viçosa, 1999) Cordeiro, Antônio Teixeira; Zambolim, Laércio; Universidade Federal de ViçosaEsta pesquisa foi conduzida com o objetivo de verificar a exeqüibilidade da fusão protoplástica interespecífica como ferramenta no melhoramento parassexual em Coffea. Para tanto, pretendeu-se a introgressão das resistências aos nematóides Meloidogyne incognita e M. exigua, do cultivar canéfora Apoatã, nos genótipos arábicas diplóide DH3 e tetraplóides Catimor e Catuaí Amarelo. Com vistas à obtenção dos protoplastos, foi dado início a suspensões celulares embriogênicas a partir de calos friáveis embriogênicos induzidos de explantes foliares. Posteriormente foram estudadas, nas suspensões celulares Apoatã e DH3 , as cinéticas do crescimento e do rendimento protoplástico em função do tempo pós-subcultura, bem como as condições de digestão enzimática da parede celular de seus agregados celulares. Foram realizados, ainda, estudos para a seleção dos heterofusionados. Embora todos os genótipos testados tenham reagido favoravelmente à formação de tecido embriogênico friável, apenas os arábicas DH3 e Catuaí Vermelho requereram a ação conjunta de auxina e citocinina. Os demais Apoatã, Catimor e Catuaí Amarelo reagiram mais favoravelmente quando o regulador de crescimento foi apenas a citocinina BAP. As maiores freqüências de explantes com calos friáveis verificadas para os genótipos canéfora Apoatã e arábicas DH3 , Catimor, Catuaí Amarelo e Catuaí Vermelho foram, respectivamente, 80, 60, 40, 40 e 20%. A diferenciação embriogênica dos agregados celulares, em cultura líquida, rendeu cerca de 241.000, 72.870 e 121.760 embriões g-1 MF de agregados celulares Apoatã, Catimor e DH3 , respectivamente. As suspensões celulares Apoatã e DH3 revelaram, imediatamente após a subcultura, uma fase exponencial de crescimento celular até um ponto de inflexão, a partir do qual as taxas de crescimento reduziram progressivamente para atingir um peso de matéria fresca dos agregados celulares assintótico. Coincidentemente, os menores rendimentos protoplásticos foram observados para tempos pós-subcultura superiores àquele do ponto de inflexão. A pré-plasmólise, a seleção dos agregados celulares de diâmetro inferior a 1 mm e a adição de cisteína 0,83 mM, durante a digestão enzimática, não interferiram no rendimento protoplástico das suspensões celulares Apoatã e DH3 , ao contrário das concentrações das enzimas pectinases e celulase. De maneira geral, o rendimento protoplástico Apoatã, sempre inferior àquele DH3 , foi maior quando as duas pectinases, pectoliase e macerozima, estiveram associadas à celulase, as três nas maiores concentrações testadas. Os 12 meios de cultivo de protoplastos testados não permitiram distinguir os protoplastos parentais Apoatã e DH3 em nível de crescimento dos microcalos. Alternativamente, os inibidores metabólicos iodoacetamida e rodamina, nas respectivas concentrações de 2 e de 0,9 mM, mostraram-se eficazes em inibir a regeneração dos protoplastos parentais em microcalos. Seu aproveitamento permitiu a realização de 23 ensaios de eletrofusão interespecífica, cujos produtos, aparentemente justificados pela complementação metabólica, encontram-se em desenvolvimento com vistas à diferenciação embriogênica e regeneração de plantas. Esta última permitirá análises para verificação do potencial da fusão protoplástica no melhoramento parassexual em Coffea.