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    Genome-wide identification, classification and transcriptional analysis of nitrate and ammonium transporters in Coffea
    (Sociedade Brasileira de Genética, 2017) Santos, Tiago Benedito dos; Lima, Joni Esrom; Felicio, Mariane Silva; Soares, João Danillo Moura; Domingues, Douglas Silva
    Nitrogen (N) is quantitatively the main nutrient required by coffee plants, with acquisition mainly by the roots and mostly exported to coffee beans. Nitrate (NO3 –) and ammonium (NH4 +) are the most important inorganic sources for N uptake. Several N transporters encoded by different gene families mediate the uptake of these compounds. They have an important role in source preference for N uptake in the root system. In this study, we performed a genome-wide analysis, including in silico expression and phylogenetic analyses of AMT1, AMT2, NRT1/PTR, and NRT2 transporters in the recently sequenced Coffea canephora genome. We analyzed the expression of six selected transporters in Coffea arabica roots submitted to N deficiency. N source preference was also analyzed in C. arabica using isotopes. C. canephora N transporters follow the patterns observed for most eudicots, where each member of theAMT andNRT families has a particular role in N mobilization, and where some of these are modulated by N deficiency. Despite the prevalence of putative nitrate transporters in the Coffea genome, ammonium was the preferential inorganic N source for N-starved C. arabica roots. This data provides an important basis for fundamental and applied studies to depict molecular mechanisms involved in N uptake in coffee trees.
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    Expressão gênica em larga escala de raizes de Coffea arabica L.
    (Embrapa Café, 2015) Santos, Tiago Benedito dos; Silva, Juliana Costa; Soares, João Danillo Moura; Baba, Viviane Yumi; Pereira, Luiz Filipe Protasio; Vieira, Luiz Gonzaga Esteves; Domingues, Douglas Silva
    A utilização de novas tecnologias de sequenciamento em larga escala (454-mRNAseq) é uma frente inovadora de estudos para a biotecnologia do cafeeiro, promovendo a identificação e caracterização de novos componentes genômicos de interesse. Mudas de cafeeiro foram mantidas sob supressão de fontes nitrogenadas e suas raízes foram utilizadas para construção de bibliotecas de cDNA, que foram sequenciados utilizando a plataforma GS-FLX Titanium da Roche. Foram gerados um total 809.517 reads, os quais geraram 34.654 contigs. Por meio dos transcritos gerados pelo mRNAseq de raiz espera-se identificar e caracterizar molecularmente os genes envolvidos no transporte e metabolismo de nitrogênio no cafeeiro.
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    Efeito da ferrugem e da supressão de nitrogênio no nível transcricional do gene nitrato redutase (CaNR) em Coffea arabica L.
    (Embrapa Café, 2013) Santos, Tiago Benedito dos; Baba, Viviane Yumi; Soares, João Danillo Moura; Carvalho, Kenia de; Braghini, Masako Toma; Pereira, Luiz Filipe Protasio; Domingues, Douglas Silva
    O objetivo do trabalho é avaliar se a ferrugem do cafeeiro (Hemileia vastatrix) pode modular a resposta transcricional de um gene-chave na assimilação de nitrogênio (N), a nitrato redutase, em função da restrição do nutriente e da resposta do cultivar ao patógeno. Sabe-se que o estado nutricional da planta pode influenciar a severidade do ataque por patógenos. A ferrugem no cafeeiro é um problema recorrente em todas as regiões de cultivo, afetando desde a produtividade até a qualidade final da bebida. A despeito da importância da nutrição mineral para a produtividade e seu impacto na resposta à ferrugem, existem poucos estudos relacionados ao estabelecimento da relação molecular entre o estado nutricional do cafeeiro e resposta de defesa a patógenos. Duas cultivares – uma resistente e uma suscetível à ferrugem do cafeeiro - foram submetidas a regimes diferenciais de N e inoculadas com H. vastatrix. A análise por qPCR do gene CaNR em três períodos pós-inoculação evidenciou padrões transcricionais distintos entre as duas cultivares - a cultivar suscetível apresentou um pico de expressão em período anterior a cultivar resistente. Este estudo preliminar evidencia que fatores genotípicos e nutricionais podem influenciar na atividade de genes relacionados ao metabolismo de N, dando suporte a futuras análises bioquímicas que auxiliem na compreensão de respostas fisiológicas e moleculares relacionadas com a interação da resposta de defesa e o estado nutricional.