Teses e Dissertações
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Item Indução de embriões somáticos em diferentes clones de Coffea canephora(Universidade Federal de Lavras, 2022-10-21) Silva, Paloma Carmelina da; Paiva, Luciano Vilela; Pinto, Renan TerassiCom o advento da tecnologia CRISPR, a busca por novas técnicas eficientes de cultura de tecidos no cafeeiro tem se intensificado cada vez mais, visando principalmente o aperfeiçoamento de parâmetros relacionados às técnicas utilizadas atualmente, como a baixa eficiência dos eventos de edição e extenso período de tempo para a obtenção de plantas geneticamente editadas. Considerando que o Brasil ocupa a liderança na produção de café, sendo C. Canephora a segunda espécie mais cultivada, este trabalho teve como objetivo a determinação de protocolos eficientes de obtenção de embriões somáticos de C. canephora, utilizando embriogênese somática direta (ESD) e suspensão celular embriogênica de protoplastos, almejando aplicações em futuros trabalhos com edições genéticas via tecnologia CRISPR/Cas9. Para tal, foram realizados diferentes experimentos de indução ESD em C. canephora, inicialmente foram realizados testes para a verificação da influência de diferentes protocolos de ESD (para os clones 2 e 14), sendo também avaliado a influência das diferentes regiões das folhas ao serem inoculadas em meio para ESD (para clone 2), e posteriormente verificou-se a influência de diferentes clones no processo da ESD (para os clones 2, 14 e 22). Concomitantemente, buscou-se neste trabalho a indução de embriões somáticos de suspensão celular embriogênica de protoplastos (ECS) de C. canephora (Clone 14), para isso, utilizou-se meio de cultura Yasuda, enriquecido com carvão e variando agentes antioxidantes, carboidratos e concentrações de ácido abscísico (ABA). Os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado e para as análises dos experimentos de ESD utilizou-se o teste de Tukey a 95% de confiança, já para os experimentos de indução de embriões em ECS, utilizou-se análise de regressão linear. No experimento de ESD foram avaliadas médias de frequência de regeneração e número médio de embriões por explante. Para o experimento de indução de embriões em suspensão celular embriogênica de protoplasto, foi avaliado o número médio de embriões obtidos em cada tratamento. Os resultados alcançados neste estudo, demonstraram que o clone 2 foi mais responsivo na embriogênese somática quando comparado aos clones 14 e 22, tanto em maiores frequências de regeneração de explantes, quanto em números de embriões por cada explante regenerado, indicando assim que a ESD é uma técnica altamente dependente do genótipo. Para o experimento da influência de diferentes regiões da folha na resposta embriogênica, não foi verificado diferenças entre as médias obtidas, assim como para diferentes protocolos utilizados. Tratando-se da indução de formação de embriões somáticos de ECS, foi observado a produção de embriões somente no meio de cultura enriquecido com 30 gL-1 sacarose e acrescido de ABA, não havendo diferença significativas entre diferentes concentrações de do regulador de crescimento na formação de embriões. Desta forma, conclui-se com este trabalho que é possível utilizar a ESD como forma de regeneração de embriões geneticamente editados, bem como a aplicação de protoplastos na edição do cafeeiro, embora ainda sejam necessários estudos mais aprofundados em relação ao aumento da frequência de regeneração e seu posterior amadurecimento.Item Comportamento de cafeeiros propagados via embriogênese somática(Universidade Federal de Lavras, 2007-03-15) Almeida, Gustavo Rennó Reis; Guimarães, Rubens JoséA micropropagação do cafeeiro permite a multiplicação de híbridos e de genótipos em segregação e reduz de 30 para, aproximadamente, 10 anos, o tempo necessário para a obtenção de novas cultivares de café. Entretanto, esta técnica ainda não está otimizada para a propagação em larga escala de Coffea arabica L. e o comportamento em condições de campo das plantas produzidas por este processo ainda é pouco conhecido. Este trabalho objetivou estudar o comportamento de plantas propagadas via embriogênese somática indireta. Foram realizados dois ensaios, comparando-se plantas propagadas por embriogênese somática com plantas oriundas de sementes. O primeiro foi conduzido em casa de vegetação, para estudar a morfologia do sistema radicular e a resposta à falta e ao de excesso de água no solo. O segundo ensaio foi conduzido no campo para avaliar o crescimento vegetativo durante os primeiros meses pós-plantio. No ensaio em casa de vegetação, as plantas propagadas por embriogênese somática apresentaram crescimento vegetativo significativamente maior que as plantas propagadas por semente em massa seca de folhas e de caule, altura e número de nós do ramo ortotrópico. A resposta ao excesso ou à falta de água no solo foi semelhante para os dois métodos de propagação. No ensaio de campo, as plantas provenientes de embriogênese somática apresentaram maior crescimento vegetativo durante os sete primeiros meses de cultivo, para todas as características avaliadas. Concluiu-se que plantas propagadas por embriogênese somática apresentam maior desenvolvimento vegetativo durante os primeiros meses de cultivo e, mesmo ao excesso ou à falta de água no solo, que plantas provenientes de sementes.Item Caracterização de suspensões celulares e obtenção de sementes sintéticas de Coffea arabica cv. Catiguá(Universidade Federal de Lavras, 2014-08-22) Ribeiro, Luciene de Oliveira; Paiva, Luciano VilelaObjetivou-se nesse trabalho analisar as características histológicas, moleculares e a capacidade de regeneração de suspensões celulares embriogênicas, bem como a otimização de um protocolo para produção de sementes sintéticas a partir de embriões somáticos de C. arabica cv. Catiguá. Não foram observadas diferenças nos aspectos histológicos das amostras analisadas, bem como na relação da expressão dos genes analisados com o potencial regenerativo das ECS. Contudo, foi possível observar uma relação transiente de indução entre BBB e SERK, altos níveis de expressão de SERK nos diversos estádios de desenvolvimento dos embriões, níveis basais de expressão do WUS em todas as amostras de ECS mostrando-se significativamente expresso a partir do estádio cordiforme/torpedo. Foi possível identificar que linhagens de ECS tidas como embriogênicas pelo aspecto visual não se comportaram da mesma maneira quanto aos padrões de regeneração. Nas pesquisas realizadas observou-se que a maturação dos embriões em meio MGM líquido é favorável para a obtenção de embriões somáticos no estádio torpedo e cotiledonar, frente a este mesmo meio no estado sólido. Em relação à produção de sementes sintéticas, resultados apontam para a utilização da técnica convencional de encapsulamento, porém com a adição de solução nutritiva DEV na matriz de encapsulamento, para uma taxa de conversão das sementes sintéticas em plântulas de 77,5%.