Teses e Dissertações
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Item Levantamento populacional do nematoide das galhas em cafeeiros do Cerrado mineiro e diagnose de Meloidogyne exigua por meio de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP)(Universidade Federal de Viçosa, 2022-02-25) Babilônia, Gustavo Braga; Lopes, Everaldo Antônio; Vieira, Bruno SérgioO nematoide das galhas (Meloidogyne spp.) parasita as principais culturas agricolas, incluindo o cafeeiro. O ataque de nematoide das galhas ao cafeeiro causa prejuizos à cadeia produtiva do café e para o controle eficiente deste fitopatógeno é importante ressaltar algumas medidas, como o levantamento populacional por regiões, afim de evitar a introdução do patógeno na lavoura, e a correta identificação da espécie. Visando tais medidas, abordou-se neste trabalho o levantamento populacional do nematoide das galhas na região produtora de café do Cerrado mineiro, e o estabelecimento de um ensaio para a utilização da amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) a fim de identificar M. exigua. No Capítulo 1, abordou-se levantamento populacional do nematoide das galhas no Cerrado mineiro. Após a coleta, as amostras foram identificadas utilizando eletroforese de isoenzimas, reação em cadeia da polimerase, observação dos padrões perineais da fêmea e da morfologia do macho. Após o levantamento, a espécie mais encontrada foi M. exigua, seguida de M. paranaensis e M. incognita. Também foi diagnosticado em uma amostra M. arenaria. No Capítulo 2, foi realizada uma revisão sobre a utilização da LAMP na identificação de fitonematoides, discutindo detalhes da técnica e seu potencial para diagnose desses patógenos. No Capítulo 3 estabelecemos um ensaio LAMP para a identificação de M. exigua, com primers baseados na região 28S do rDNA do patógeno, sendo monitorada em gel de eletroforese e a olho nu por colorimetria, utilizando o mastermix WarmStant?. A reação proposta foi capaz de amplificar especificamente DNA de M. exigua, não amplificando de M. incognita e M. paranaensis. Além disso, o ensaio LAMP foi altamente sensível, amplificando 0,0026 ng de DNA alvo. Palavras-chave: Identificação. Isoenzimas. Medidas. Patógeno.Item Teste de tetrazólio em café: fisiologia e bioquímica de enzimas na estimação da germinação das sementes(Universidade Federal de Lavras, 2018-02-28) Fantazzini, Tatiana Botelho; Rosa, Sttela Dellyzete Veiga Franco da; Clemente, Aline da Consolação SampaioDevido às discrepâncias entre os resultados do teste de germinação e do teste de tetrazólio na avaliação da qualidade de sementes de café, quatro estudos foram realizados objetivando-se investigar estas discrepâncias. Foram avaliadas as mudanças metabólicas que ocorrem em sementes de café com diferentes níveis de qualidade em relação aos testes de germinação e de tetrazólio. Primeiramente, foi realizado um estudo estatístico de dados históricos de resultados do teste de germinação e do teste de tetrazólio em amostras de sementes de café, analisando-se a correlação existente entre estes resultados, por meio de modelos de Regressão Generalizados Aditivos de Locação, Escala e Forma (GAMLSS). De acordo com os resultados da análise GAMLSS, a estimativa da germinação pelo teste de tetrazólio é variável em função das classes de porcentuais de germinação. Há maiores correlações de GAMLSS entre as porcentagens de plântulas normais e de viabilidade no teste de tetrazólio, para valores de germinação acima de 70% e baixas correlações abaixo deste valor, evidenciando que a avaliação de sementes de café, baseada apenas no teste de tetrazólio, pode não corresponder ao real desempenho fisiológico. No segundo estudo foi avaliada a aplicabilidade do teste de tetrazólio para estimar a viabilidade de sementes de café com diferentes tipos e níveis de estresses. Constatou-se que o teste de tetrazólio pode superestimar o potencial de sementes de café para produzir plântulas normais, principalmente em lotes de sementes com baixo nível de qualidade. No terceiro estudo, as alterações fisiológicas, respiratórias e de enzimas desidrogenases foram avaliadas em endospermas e embriões de sementes de café submetidas a diferentes tipos de estresses. O teste de tetrazólio superestima a germinação das sementes de baixa qualidade, principalmente quando estas são submetidas aos estresses de secagem em alta temperatura, exposição à temperatura subzero e armazenamento em ambiente não controlado. As enzimas glicose-6-fosfato desidrogenase, álcool desidrogenase e glutamato desidrogenase apresentam maior atividade em embriões do que em endospermas de sementes de café. Ocorrem variações na atividade das isoformas das enzimas xantina desidrogenase e diaforase nos embriões e endospermas das sementes de café. No quarto e último estudo, foram avaliadas as alterações fisiológicas e do sistema enzimático antioxidante em endospermas e em embriões de café, após estes serem submetidos a diferentes condições de estresse. As discrepâncias entre os resultados do teste de germinação e os resultados do teste de tetrazólio com superestimação da germinação foi confirmada neste estudo. As enzimas catalase e isocitrato liase apresentam maior atividade em endospermas do que em embriões, sendo esta atividade associada à maior deterioração. A enzima peroxidase não apresenta atividade em embriões de sementes de café.Item Expressão de genes relacionados ao processo oxidativo durante a secagem de sementes de café(Universidade Federal de Lavras, 2010-08-05) Santos, Gustavo Costa; Pinho, Édila Vilela de Resende VonAs sementes são um importante meio de propagação de culturas do gênero Coffea. A obtenção de sementes de café com alta qualidade é fundamental para a formação de mudas. O estresse oxidativo durante o processo de secagem é fator limitante para a obtenção de sementes com alta qualidade fisiológica. Diante do exposto, foi proposto nesta pesquisa estudar o efeito de diferentes métodos de secagem e graus de umidade na qualidade fisiológica de sementes de Coffea arabica e Coffea canephora e na expressão de alguns genes relacionados aos sistemas enzimáticos de combate ao estresse oxidativo, catalase e peroxidase. A colheita dos frutos no estádio cereja foi realizada no campo experimental da UFLA, na cidade de Lavras/MG. As sementes foram submetidas à secagem lenta e rápida até atingirem os graus de umidade de 40, 30, 20 e 12%. Como testemunha uma amostra de sementes não recebeu qualquer tratamento de secagem, permanecendo com grau de umidade de 46%. As amostras foram submetidas às análises de qualidade fisiológica utilizando-se as variáveis protrusão radicular e plântulas normais aos 15 dias, normais e normais fortes aos 30 dias, plântulas com abertura cotiledonar e matérias secas de hipocótilo e radícula aos 45 dias. Para as análises fisiológicas utilizou-se DIC com esquema fatorial [(2x4) + 1]. As sementes foram submetidas às analises das isoenzimas esterase, catalase, peroxidase e endo-β-mananase. Foi realizada a busca por genes alvo no banco de dados do genoma café brasileiro. As sequências foram analisadas por bioinformática e posteriormente utilizadas para confecção de primers específicos. Foi avaliada a expressão gênica por meio da técnica de RT-qPCR dos genes catalase e peroxidase em cada amostra. De forma geral, na espécie C. arabica foram observados os melhores resultados de qualidade fisiológica em sementes com 20% de grau de umidade submetidas à secagem rápida e com 40 e 12% de grau de umidade, em sementes submetidas à secagem lenta. Para a espécie C. canephora obteve-se os melhores resultados de qualidade fisiológica em sementes submetidas à secagem rápida. Nessa mesma espécie, houve tendência de perda de qualidade fisiológica com a redução do grau de umidade, em ambos os métodos de secagem. Pelos resultados pode-se inferir que as sementes de C. arabica e C. canephora apresentaram maior tolerância à dessecação quando são submetidas à secagem rápida. Houve redução dos níveis de expressão dos transcritos das enzimas catalase (CAT3) e peroxidase (POXa) com a secagem das sementes de C. arabica e C. canephora. Os padrões de expressão dos genes peroxidase e catalase são diferentes, apesar de ambos serem ligados ao estresse oxidativo. A expressão de genes associados ao processo oxidativo é influenciada pelo método de secagem.Item Variabilidade genética e biológica de Meloidogyne exigua e patogenicidade de Meloidogyne spp. em genótipos de cafeeiro(Universidade Federal de Lavras, 2007-12-19) Muniz, Maria de Fátima Silva; Campos, Vicente PauloEstudos isoenzimáticos e técnicas moleculares (SCAR e RAPD-PCR) foram realizados em 15 populações de três raças de Meloidogyne exigua, parasitas do cafeeiro no Brasil, Bolívia e Costa Rica e em uma população obtida de seringueira no Brasil. Esses estudos revelaram quatro fenótipos de esterase (E1, E2, E2a e E3) e três de malato-desidrogenase (N1, N1a e N2). Os primers SCAR em condição multiplex-PCR permitiram a identificação de todas as populações de M. exigua. Análises filogenéticas mostraram alto polimorfismo intra-específico (25,9-59,6%) para todas as populações estudadas. Entretanto, todas agruparam-se com 100% de bootstrap. Além disso, a caracterização de uma população de M. exigua obtida de seringueira revelou algumas diferenças, comparadas àquelas populações descritas no cafeeiro, principalmente na morfologia do estilete de macho e fêmea. Todavia, apresentou similaridades em várias características morfológicas e morfométricas, fenótipo E1 de esterase (Rm 1,5), em dados citológicos (número de cromossomos) e moleculares (SCAR e RAPD-PCR). Em outro estudo, 10 populações de Meloidogyne spp. foram inoculadas em sete genótipos de cafeeiro em casa de vegetação. As cultivares Obatã IAC 1669-20, Sarchimor IAC 4361 e Tupi Amarelo IAC 5111 exibiram suscetibilidade às quatro populações brasileiras de M. exigua. Entretanto, cv. Tupi Vermelho IAC 1669-33 mostrou-se resistente (FR = 0,7) a uma população de M. exigua proveniente de Lavras, MG, Brasil. A população de M. exigua oriunda de Bom Jesus de Itabapoana, RJ, Brasil, foi altamente virulenta (FR = 165,7) à cv. IAPAR 59, portadora do gene de resistência Mex-1 e ao genótipo H 419-5-4-5-2 (FR = 396,2). A população de Meloidogyne sp. do cafeeiro, Garça, SP, Brasil, reproduziu-se em baixos níveis (FR = 0,1-3,9) sobre todos os genótipos. Todas as cultivares foram suscetíveis a M. incognita e M. paranaensis. A reprodução de M. mayaguensis obtida de goiabeira, PR, Brasil, foi baixa (FR = 0,0-1,6), em todos os genótipos testados. Entretanto, a mesma espécie obtida do cafeeiro na Costa Rica apresentou valores de FR que variaram de 0,8 a 12,4. Os resultados deste trabalho mostraram, pela primeira vez, a quebra de resistência da cultivar IAPAR 59, resultante do cruzamento C. arabica cv. Villa Sarchi x Híbrido do Timor por uma população de M. exigua obtida em campo.