Trabalhos de Evento Científico

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Autor: search.filters.author.Resende, Mário Lúcio Vilela deAssunto: search.filters.subject.Genética e melhoramento

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    Análise de protocolos para extração de RNA de folhas de cafeeiro
    (Embrapa Café, 2011) Valente, Thaís Cainã Teixeira; Monteiro, Ana Cristina Andrade; Pereira, Vanessa Foresti; Ribeiro Júnior, Pedro Martins; Carvalho, Camila Aparecida; Resende, Mário Lúcio Vilela de
    O presente trabalho objetivou testar quatro métodos de isolamento de RNAs totais de folhas de cafeeiro para a utilização na análise de expressão por RT-PCR.
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    Predição do secretoma de Hemileia vastatrix raça XXXIII
    (Embrapa Café, 2015) Porto, Brenda Neves; Caixeta, Eveline Teixeira; Vidigal, Pedro Marcus Pereira; Lelis, Daniela Teixeira; Zambolim, Eunize Maciel; Zambolim, Laércio; Resende, Mário Lúcio Vilela de
    O uso de cultivares de café resistente à Hemileia vastatrix, o agente causal da ferrugem alaranjada, é a estratégia mais eficiente de controle dessa doença. A obtenção de genótipos resistentes tem sido um desafio devido ao alto potencial adaptativo do fungo e, consequentemente, surgimento de novas raças fisiológicas do patógeno que suplantam as cultivares resistentes. Durante a interação com o café, o fungo secreta proteínas efetoras que modificam a estrutura e função da célula hospedeira, permitindo o estabelecimento da colonização parasitária. Para ampliar o conhecimento das proteínas efetoras de H. vastatrix, neste trabalho, os reads obtidos do sequenciamento denovo do DNA genômico desse fungo foram analisados, e com o proteoma deduzido foi predito o secretoma. Foram identificadas 615 proteínas contendo peptídeo sinal localizado na via de secreção e sem domínios transmembrânicos. Essas foram anotadas e são consideradas as potenciais proteínas secretadas de H. vastatrix. Desse secretoma obtido, 385 proteínas preditas apresentaram homologia com as de Puccinia. graminis f. sp. tritici, 109 com Melampsora larici-populina, 39 com H. vastatrix e 72 não apresentaram homologia com proteínas depositadas no Genbank, as quais podem ser candidatas a efetores específicos de H. vastatrix. Esse resultado confirma que proteínas secretadas são conservadas dentro da mesma família, uma vez que, a maior parte delas mostraram homologia entre as ferrugens pertencentes à família Pucciniaceae (H. vastatrix e Puccinia. graminis f.sp. tritici). O baixo número de homologia encontrado para H. vastatrix (39) deve-se ao fato de que, até o momento, estão depositadas poucas proteínas desse fungo nos bancos de dados públicos. As análises obtidas fornecem uma informação abrangente das proteínas secretadas de H. vastatrix, uma vez que foram realizadas com base no sequenciamento estrutural do genoma.
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    Desenho e teste de primers para RT-PCR de genes que codificam enzimas antioxidantes do cafeeiro
    (Embrapa Café, 2015) Monteiro, Ana Cristina Andrade; Resende, Mário Lúcio Vilela de; Andrade, Camila Cristina Lage de; Vale, Paula Adrielly Souza; Guimarães, Sandra Elisa; Botelho, Deila Magna dos Santos; Vilela, Rossiane Oliveira; Vasconcelos, Victor Augusto Maia
    Plantas sob estresse geralmente usam um complexo sistema de defesa antioxidante constituído de enzimas, como a superóxido dismutase, catalase, glutationa peroxidase e ascorbato peroxidase. Considerando que Coffea arabica é uma espécie agronômica de importância para os países produtores e que é crescente as pesquisas moleculares envolvendo o cafeeiro, o objetivo deste trabalho foi desenhar primers, para serem utilizados na técnica de RT-PCR, dos genes SOD, CAT, GPX e APX do cafeeiro, que codificam as enzimas superóxido dismutase, catalase, glutationa peroxidase e ascorbato peroxidase, respectivamente. Primers foram desenhados a partir de sequências gênicas depositadas no GenBank e com o auxílio do software Integrated DNA Technologies (IDT). Os primers foram confeccionados pela empresa SIGMA e, em seguida, foi realizada uma RT-PCR dos mesmos com DNA extraído de folhas de mudas de cafeeiro e com água (controle). As condições da reação foram 2 minutos a 95°C, seguidos por 30 ciclos de 40 segundos a 95°C, 35 segundos a 58ºC e 20 segundos a 72°C, e finalizando com 5 minutos a 72°C. Para cada reação, foi utilizado 1,0 μL de DNA, 0,75 μL de cada primer, 5,0 μL de Green GoTaq, 2,0 μL de MgCl2, 0,5 μL de dNTP e 0,125 μL de GoTaq, para um volume final 25,0μL por amostra. A RT-PCR foi visualizada em gel de agarose 1,5%, corado com GelRedTM. Nenhum dos primers amplificou na ausência de DNA. O primer APX amplificou em dois tamanhos diferentes e o primer SOD não ocorreu nenhuma amplificação. Somente os primers CAT e GPX amplificaram no tamanho em que foram desenhados, estando aptos para serem utilizados em trabalhos com RT-PCR.