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Associação de Xylella fastidiosa com espécies e híbridos interespecíficos de cafeeiro
(2000) Yorinori, Marcos Akio; Ribas, Alessandra Ferreira; Leite, Rui Pereira; Funada, Caio Katsumi; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
A bactéria Xylella fastidiosa possui uma ampla gama de plantas hospedeiras que inclui espécies de pelo menos 28 famílias de mono e dicotiledôneas. No cafeeiro, a ocorrência dessa bactéria foi relatada em cultivares da espécie Coffea arabica. Estudos foram realizados para determinar a presença de X. fastidiosa em diferentes espécies e híbridos interespecíficos de cafeeiro (Coffea spp.). As espécies de Coffea examinadas foram: C. kapakata, C. canephora, C. racemosa, C. arabica, C. dewevrei, C. stenophylla e C. eugenioides. Os híbridos examinados foram: C. arabica x C. dewevrei, C. arabica x C. eugenioides, C. arabica x C. racemosa e C. arabica x C. robusta. Foram coletadas quatro amostras de ramos plagiotrópicos de plantas diferentes para cada espécie e híbrido, tendo sido utilizadas quatro repetições. A detecção de X. fastidiosa nas amostras foi realizada pelo teste serológico de DAS-ELISA. A bactéria foi detectada nas sete espécies e nos quatro híbridos examinados. Entretanto, as plantas examinadas aparentemente não apresentavam sintomas de alteração no seu desenvolvimento.
Caracterização de Colletotrichum spp. associado ao cafeeiro no Estado do Paraná
(2005) Silva, Michele Regina Lopes da; Meneguim, Luciana; Gonçalves, Juliana S.; Pistori, Juliana F.; Leite, Rui Pereira; Embrapa - Café
No Brasil, existem diversos relatos da ocorrência de doenças em cafeeiro associadas a fungos do gênero Colletotrichum, como antracnose, seca-de-ramos, queda-de-frutos, seca-de-frutos e mancha-manteigosa. Entretanto, a falta de estudos mais detalhados sobre as características de Colletotrichum spp. que ocorrem em cafeeiro no Brasil e das doenças que eles realmente causam tem gerado dúvidas a respeito da patogenicidade desses fungos para cafeeiro e dos danos que podem causar para a cultura. Estudos foram realizados com os objetivos de obter informações sobre a identidade e características deste organismo. Os resultados obtidos nos estudo de caracterização de Colletotrichum spp. associados ao cafeeiro indicam que espécies desse fungo estão presentes em necroses em folhas, ramos e frutos de cafeeiro de diferentes cultivares nas diversas regiões produtoras do Estado do Paraná. O exame de mais de 400 isolados revelaram que a única espécie presente em cafeeiro é C. gloeosporioides, sendo que para pouco mais de 5% dos isolados foi também constatada a forma perfeita Glomerella cingulata. Estudos adicionais devem ser conduzidos para determinar a patogenicidade desse fungo para cafeeiro, e sua capacidade de infectar diferentes partes da planta, como também determinar a possibilidade de outras espécies de Colletotrichum estarem associadas ao cafeeiro no Paraná
Caracterização genética de isolados de Xylella fastidiosa de cafeeiro do estado do Paraná através de eletroforese em campo pulsado
(2001) Carvalho, Flávia Maria de Souza; Meneguim, Luciana; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Xylella fastidiosa é responsável por doenças em muitas plantas de importância econômica. Esta bactéria causa a clorose variegada dos citros (CVC), que se tornou séria ameaça para a citricultura em vários Estados brasileiros. Em cafeeiro (Coffea arabica), plantas infectadas por X. fastidiosa apresentam sintomas de depauperamento generalizado, incluindo desfolha e ramos com internódios curtos. No presente estudo, 27 isolados de X. fastidiosa procedentes de isolamentos de cafeeiros das regiões Norte, Norte Pioneiro e Noroeste do Paraná e isolados de videira, ameixeira e citros da coleção de bactérias fitopatogênicas do Laboratório de Bacteriologia e Virologia do Instituto Agronômico do Paraná foram caracterizados através da análise genômica em eletroforese de campo pulsado. Perfis genômicos obtidos a partir de restrição com a endonuclease Swa I permitiram diferenciar três grupos geneticamente distintos entre os 27 isolados de cafeeiro. Os seis isolados de outras plantas hospedeiras apresentaram perfis genômicos distintos e diferentes dos três perfis encontrados para os isolados de cafeeiros. Os isolados de cafeeiros das regiões Norte, Norte Pioneiro e Noroeste do Paraná apresentaram similaridade genética que variou entre 0,87 e 0,93. No entanto, os coeficientes de similaridade revelaram grande variabilidade genética (0,27 a 0,86) entre isolados de X. fastidiosa de diferentes plantas hospedeiras.
Caracterização patogênica de isolados de Colletotrichum spp. obtidos de cafeeiro e outras culturas no estado do Paraná
(2007) Rampazo, Luís Gustavo; Marçal, Viviani Vieira Marques; Leite, Rui Pereira; Embrapa - Café
A interação Colletotrichum-cafeeiro tem atraído a atenção de diferentes grupos de pesquisa no Brasil. A susceptibilidade entre cultivares e testes de patogenicidade cruzada em diferentes hospedeiros são empregados para caracterização patogência dos isolados. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a patogenicidade de isolados de Colletotrichum spp. de cafeeiros e outras plantas cultivadas pela inoculação de frutos verdes de diferentes cultivares de Coffea arabica L. Dez dias após a inoculação, lesões típicas de antracnose foram observadas nos frutos de todos os cultivares de cafeeiro usados, principalmente quando inoculados com o isolado I-12 de C. gloeosporioides. O cultivar Semperflorens mostrou-se o mais susceptível, apresentando até 100% de frutos com lesões. Com o cultivar Catuaí Arrepiado foi possível verificar a ocorrência de uma provável especialização patogênica, pois somente os isolados obtidos de cafeeiro foram capazes de induzir lesões nos frutos deste cultivar. A incidência de frutos com lesões sob inoculação artificial obtida neste estudo foi até mais elevada que as anteriormente descritas na literatura. Entretanto, testes com outros cultivares de cafeeiro e isolados de Colletotrichum spp. de diferentes culturas devem ser realizados para a melhor compreensão da especialização patogênica entre estes. e seus diferentes hospedeiros.
Comparação genética entre isolados de Colletotrichum spp. provenientes de cafeeiro e outras plantas cultivadas por meio de PCR/RFLP
(2007) Marçal, Viviani Vieira Marques; Rampazo, Luís Gustavo; Silva, Michele Regina Lopes da; Gonçalves, Juliana S.; Campos, Vanessa B.; Pacolla-Meirelles, Luzia D.; Leite, Rui Pereira; Embrapa - Café
A variabilidade genética de isolados de Colletotrichum spp. obtidos de cafeeiro e de outras plantas cultivadas foi estimada através da técnica de PCR/RFLP, usando primers específicos para a amplificação das regiões transcritas internas (ITS1 e ITS2) do DNA ribossomal. O produto de PCR foi digerido com enzimas e as relações entre os perfis genômicos foram analisadas com o programa NTSYS pelo método Dice/UPGMA. Os resultados obtidos permitiram dividir os isolados em dois grupos, de acordo com os isolados padrões de Colletotrichum gloeosporioides e Colletotrichum acutatum utilizados para fins comparativos. Entre os doze isolados obtidos de cafeeiro, nove apresentaram 100% de similaridade entre si e todos eles apresentaram elevada similaridade com C. gloeosporioides. Em relação aos isolados de outras plantas cultivadas, cinco dos treze isolados apresentaram similaridade com o C. acutatum. Para a maioria destes isolados, não foi possível correlacionar caracteres morfológicos, perfis genéticos e o hospedeiro de origem. Neste sentido, novas técnicas moleculares devem ser aplicadas no estudo de isolados de Colletotrichum spp.
Detecção de Xylella fastidiosa em Cicadelíneos coletados em lavouras cafeeiras no estado do Paraná
(2003) Paião, Fernanda; Novaes, Tanara G. de; Motomura, Karina F.; Rossini, Viviane; Meneguim, Ana Maria; Lovato, Lidiana; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
A bactéria Xylella fastidiosa, responsável pela doença requeima do cafeeiro, é transmitida naturalmente por cigarrinhas sugadoras do xilema das plantas. Homópteros pertencentes às famílias Cercopidae, Cicadidae e Cicadellidae são considerados potenciais vetores da bactéria. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar os vetores da bactéria entre as espécies mais freqüentes pertencentes à sub família Cicadellinae coletadas nas principais regiões cafeeiras do Estado do Paraná. Foram realizadas amostragens quinzenais, através de armadilha adesiva amarela e rede entomológica, em lavouras comerciais localizadas nos municípios de Londri-na, Paranavaí, Mandaguari, Ribeirão do Pinhal e Altônia, PR, durante o período de novembro de 1998 a outubro de 2001. Através da identificação taxonômica, os insetos foram agrupados em famílias e subfamílias, e os cicadelíneos coletados em maior freqüência foram submetidos ao teste de PCR (reação de polimerase em cadeia) e nested PCR, utilizando os primers RST31 e RST33 e RST31-interno e RST33-interno, respectivamen-te, para detecção da bactéria X. fastidiosa. Oito espécies de cicadelíneos foram mais freqüentes, sendo elas: Acrogonia citrina, Bucephalogonia xanthophis, Dilobopterus costalimai, Oncometopia fascialis, Macugonalia cavifrons, Molomea consolida, Scopogonalia subolivaceae e uma espécie pertencente a um taxon novo, Neosonia sp.. Do total de 232 amostras submetidas ao teste de PCR, 31% delas apresentaram resultado positivo para a presença de X. fastidiosa, sendo detectada em seis das oito espécies avaliadas. Dentre as espécies, S. subolivaceae apresentou o maior índice de detecção (77%), enquanto que, a espécie M. consolida apresentou o menor índice (5%). A espécie O. fascialis e a do taxon novo, Neosonia sp., apresentaram resultados negati-vos para a presença de X. fastidiosa. Com relação ao período de amostragem, a maior ocorrência da bactéria foi determinada no período de novembro de 2000 a outubro de 2001, onde 44% das amostras foram positi-vas. Na população de cicadelíneos do município de Paranavaí foi observada a maior porcentagem de detecção (48%), apresentando os maiores índices de presença da bactéria durante todo o período. Nesse local, foram coletados indivíduos com a bactéria nos três anos de amostragem, porém isto não foi observado nos demais municípios.
Diversidade genética de isolados de Xylella fastidiosa de cafeeiros do estado da Bahia através de eletroforese em campo pulsado
(2001) Carvalho, Flávia Maria de Souza; Meneguim, Luciana; Souza, Sandra Elizabeth de; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Xylella fastidiosa é agente causal de doenças em diversas plantas de interesse econômico. No Brasil, foi relatada como causadora de escaldadura da folha de ameixeira, clorose variegada dos citros e depauperamento do cafeeiro. Estudos de variabilidade genética indicam que X. fastidiosa se constitui em uma única espécie. Entretanto, são necessários mais estudos para verificar a diversidade genética de X. fastidiosa que ocorre no Brasil. No presente estudo, 12 isolados de X. fastidiosa procedentes de isolamentos de cafeeiros do Estado da Bahia foram analisados através de perfis genômicos, comparativamente com isolados de cafeeiro dos Estados do Paraná e São Paulo e isolados de videira, ameixeira, citros e de vinca. Todos os isolados utilizados no presente estudo foram caracterizados por meio da análise em gel de agarose em campo pulsado ("pulsed field"). Perfis genômicos obtidos a partir de restrição com a endonuclease Swa I permitiram diferenciar cinco grupos geneticamente distintos entre os 12 isolados da Bahia. A similaridade genética variou de 0,46 a 0,75, indicando alta variabilidade da bactéria X. fastidiosa proveniente de uma mesma planta hospedeira e uma única região geográfica. A similaridade genética entre isolados de videira, ameixeira, citros, cafeeiros de São Paulo e Paraná, vinca e os isolados de cafeeiros do Estado da Bahia variou de 0,12 a 0,95. Esses dados sugerem que existe especificidade bactéria-hospedeiro, assim como alta variabilidade genética, de isolados de X. fastidiosa no Estado da Bahia.
Diversidade genética de isolados de Xylella fastidiosa de cafeeiros por eletroforese de campo pulsado
(2003) Nunes, Liliane Moreira; Meneguim, Luciana; Casagrande, Elaine C.; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Xylella fastidiosa é uma bactéria fitopatogênica responsável por perdas consideráveis em diversas culturas de importância econômica, causando doenças como a clorose variegada dos citros (CVC), mal de Pierce em videira e escaldadura das folhas em diversas outras plantas. Em cafeeiro (Coffea arabica), o primeiro relato da ocorrência desta bactéria foi no Estado de São Paulo em 1995. Plantas infectadas apresentavam sintomas de depauperamento generalizado e ramos com internódios curtos. Devido à importância deste patógeno, o presente trabalho visou a caracterização molecular de isolados de X. fastidiosa obtidos de cafeeiro, pela análise de perfis genômicos por eletroforese de campo pulsado ("pulsed-field"). Neste estudo foram incluídos isolados das regiões Norte, Norte Pioneiro, Noroeste e Oeste do Estado do Paraná. Os perfis genômicos foram obtidos pela digestão do genoma bacteriano com a endonuclease de restrição Swa I. Com base nos perfis obtidos foi construída uma matriz binária de presença (1) e ausência (0) de fragmentos de DNA. Para calcular os índices de similaridade entre os pares de genótipos foi utilizado o coeficiente de Nei & Li (1979). Pelo menos seis perfis genômicos distintos foram encontrados entre os isolados de X. fastidiosa provenientes de diferentes regiões cafeeiras do Paraná. A similaridade genética entre os isolados bacterianos variou de 0,66 a 1,00. Foram observados cinco perfis genômicos diferentes entre os isolados da região Noroeste do Paraná. Por outro lado, os perfis genômicos obtidos para os isolados das regiões Norte, Norte Pioneiro e Oeste foram mais uniformes.
Estudo de hospedeiros alternativos de Xylella fastidiosa associada a Coffea spp.
(2001) Nunes, D. H.; Carvalho, Flávia Maria de Souza; Paião, F. G.; Meneguim, Luciana; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
O café (Coffea arabica) é largamente cultivado no Brasil. A escaldadura da folha do café causada por Xylella fastidiosa tem sido associada a grandes prejuízos à cafeicultura. X. fastidiosa é uma bactéria Gram-negativa limitada ao xilema de plantas, transmitida por insetos vetores. Cafeeiros infectados podem apresentar sintomas como redução de porte e folhas de tamanho reduzido e cloróticas. O objetivo deste estudo foi identificar espécies de plantas invasoras de lavouras cafeeiras e plantas cultivadas que possam ser hospedeiras alternativas da bactéria. Foram semeadas e inoculadas 32 espécies diferentes em casa de vegetação, no IAPAR, Londrina-PR. Para inoculação, foram utilizadas suspensões dos isolados 12762, 12726, 12781, 12968 e 12373 de X. fastidiosa. As plantas foram inoculadas pelo método de perfuração com alfinete e enxertia e acompanhadas periodicamente, para verificar a manifestação de sintomas. Também foram coletadas plantas de Arachis pintoi, na Estação Experimental do IAPAR, Paranavaí-PR. As espécies inoculadas foram submetidas aos testes de PCR ("polymerase chain reaction") e DAS-ELISA ("double antibody sandwich" - "enzyme-linked assay"), para detecção da bactéria. Na espécie A. pintoi foi realizado somente o teste de DAS-ELISA. Pelo teste de PCR não foi identificada nenhuma espécie de planta hospedeira da bactéria. Pelo teste de DAS-ELISA foram identificadas como potenciais hospedeiras alternativas de X. fastidiosa as espécies A. pintoi, N. tabacum - TNN, N. clevelandii, N. turkishin, Brachiaria decumbens e Catharanthus roseus. Nenhuma das espécies inoculadas apresentou sintomas característicos de infecção por X. fastidiosa.
Expressão de genes em ramos de café depauperado com a presença de Xylella fastidiosa
(2003) Mehta, Angela; Oliveira, Angélica C. de; Eira, Mírian T. S.; Leite, Rui Pereira; Andrade, Alan Carvalho; Silva, Felipe R. da; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
A cultura do café possui grande importância econômica para o Brasil por constituir um dos principais produtos de exportação do país. Os principais problemas relacionados à cultura do café são a ocorrência de estresses bióticos causados por pragas e doenças e estresses ambientais (hídrico, nutricional, etc). Recentemente, foi reportado o depauperamento de plantas de café causado por Xylella fastidiosa. Essa doença vem atingindo todas as regiões produtoras de café no país, causando perdas econômicas apreciáveis, principalmente para o estado de Minas Gerais que é um dos principais produtores desta cultura. O mecanismo de patogenicidade de Xylella fastidiosa ainda não é bem compreendido. A bactéria coloniza os vasos do xilema formando agregados que bloqueiam a passagem de água e nutrientes. Acredita-se que polissacarídeos e enzimas extracelulares tenham um papel importante na colonização dos vasos do xilema. Entretanto, os mecanismos de interação planta-patógeno não são conhecidos. Em 2001 foi iniciado um projeto para o sequenciamento de 200.000 ESTs de café em diferentes situações biológicas. O objetivo principal deste projeto é identificar genes que possam ser utilizados em programas de melhoramento da qualidade e competitividade do café. O presente trabalho teve por objetivo identificar genes expressos em plantas de café depauperadas com a presença de Xylella fastidiosa. Ramos de plantas de café apresentando os sintomas típicos relacionados a Xylella fastidiosa, como internodios curtos, presença de folhas pequenas em tufos, foram coletados. Uma análise preliminar em microscópio foi realizada para verificar a presença da bactéria nos feixes do xilema. Posteriormente, a presença de X. fastidiosa foi confirmada através de PCR utilizando DNA dos ramos e primers específicos para a bactéria. Uma biblioteca de cDNA foi construída a partir deste material vegetal e os resultados preliminares obtidos serão apresentados. Tentativas foram também realizadas para infiltrar a bactéria em radículas de café, uma vez que esta bactéria também já foi isolada de raízes de plantas depauperadas. A presença da bactéria nas radículas foi confirmada através de PCR com primers específicos 10 e 20 dias após a infiltração. Pretende-se analisar a expressão diferencial de radículas infiltradas e sadias na tentativa de se isolar genes relacionados a resposta da planta à presença de X. fastidiosa. Espera-se, com este projeto, que genes relacionados à interação de plantas de café com Xylella fastidiosa sejam identificados de maneira a contribuir em programas de melhoramento.
Levantamento da distribuição de Xylella fastidiosa associada a Coffea Spp. em regiões cafeeiras do Paraná
(2000) Carvalho, Flávia Maria de Souza; Meneguim, Luciana; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Xylella fastidiosa causa doenças de importância econômica em diversas plantas cultivadas. No Brasil, doenças causadas por X. fastidiosa têm se constituído em fator limitante para exploração de culturas como ameixeira e citros. Em cafeeiro (Coffea arabica), a bactéria foi constatada pela primeira vez em 1995 no Estado de São Paulo. No presente estudo, foram examinadas 394 amostras de cafeeiro coletadas em 133 propriedades produtoras de café das regiões Norte, Norte Pioneiro, Noroeste e Oeste do Estado do Paraná. A presença da bactéria em cafeeiro foi examinada através do teste de DAS-ELISA, utilizando anticorpo policlonal específico para X. fastidiosa, e pela técnica de PCR. No teste de DAS-ELISA 48,8 % das amostras examinadas das quatro regiões cafeeiras do Paraná apresentaram resultados positivos para presença de X. fastidiosa. Com base na reação de PCR utilizando os "primers" RST 31 e RST 33, 74,9 % das amostras de cafeeiro das regiões Norte e Norte Pioneiro apresentaram resultado positivo para presença da bactéria. Os resultados obtidos mostraram que a reação de PCR foi mais sensível para detecção da bactéria do que o teste de DAS-ELISA. Isolamentos de X. fastidiosa em meio BCYE foram estabelecidos das amostras de cafeeiro coletados nas regiões Norte, Norte Pioneiro e Noroeste do Paraná.
Levantamento da fauna de homópteros em viveiros de mudas de cafeeiro (Coffea arabica L)
(2000) Meneguim, Ana Maria; Kimura, Luciana Akemi; Simões, Homero Christoval; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Cigarrinhas sugadoras do xilema são vetoras da bactéria fitopatogênica Xylella fastidiosa para diversas plantas cultivadas de importância econômica. Estudos foram conduzidos com o objetivo de conhecer a fauna de homópteros potenciais vetores de X. fastidiosa para cafeeiro. Amostragens quinzenais utilizando rede entomológica e armadilhas adesivas foram realizadas em viveiros de cafeeiros de quatro regiões produtoras de mudas no estado do Paraná. Foram detectadas mais de cem espécies de cigarrinhas presentes nos viveiros, sendo que mais de 80 % dessas espécies pertencem à família Cicadellidae. As espécies Acrogonia virescens, Dilobopterus costalimai Young, Oncometopia fascialis (Signoret), Sonesimia grossa (Signoret), Plesiommata corniculata Young, Homalodisca ignorata, Macugonalia leucomelas Walker, Ferrariana trivittata (Signoret) e Bucephalogonia xanthophis (Berg.), transmissoras da bactéria para citros, foram encontradas nos viveiros de café. Dentre essas, destaca-se a espécie Bucephalogonia xanthophis presente em 100% das coletas.
Levantamento de espécies de cigarras e transmissão de Xylella fastidiosa em cafeeiro
(2003) Paião, Fernanda; Meneguim, Ana Maria; Casagrande, Elaine C.; Lovato, Lidiana; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Homópteros que se alimentam do xilema das plantas são vetores potenciais da bactéria Xylella fastidiosa, responsável por diversas doenças em plantas cultivadas como a requeima em cafeeiro. Em lavouras de café, cigarras (Homoptera: Cicadidae), sugadoras de xilema, ocorrem com freqüência e são vetores potenciais de X. fastidiosa. Assim, este trabalho teve por objetivo identificar as espécies de cigarras que ocorrem em lavouras comerciais de café em diferentes regiões do Estado do Paraná, detectar a presença e avaliar o potencial de transmissão de X. fastidiosa pelas espécies coletadas. As amostragens foram realizadas nos municípios de Paranavaí, Mandaguari, Rolândia, Londrina e Ribeirão do Pinhal, PR, no período de novembro de 1998 a outubro de 2001. Os espécimes coletados foram identificados e submetidos ao teste de PCR (reação de polimerase em cadeia) e nested PCR, utilizando os primers RST31 e RST33 e RST31-interno e RST33-interno, respectivamente, para detecção da bactéria X. fastidiosa. Para avaliar a transmissão de X. fastidiosa, 20 a 30 cigarras da espécie Dorisiana virides e de uma espécie de Cicadidae não identificada foram confinadas em gaiolas contendo mudas de cafeeiro cultivar IAPAR 59 (Coffea arabica) sem acento) por três dias. As mudas foram mantidas para observação de sintomas da doença e detecção da bactéria em câmara de crescimento de plantas por um período de seis meses. As espécies identificadas foram: D. drewseni, D. virides, Carineta matura, Carineta sp. e uma espécie de Cicadidae não identificada. Todas as espécies apresentaram resultado positivo para presença da bactéria X. fastidiosa pelo teste de nested PCR. A maior porcentagem de cigarras carregando a bactéria foi da espécie D. drewseni, com 35% de amostras positivas, coletadas no município de Paranavaí. Somente para a espécie C. matura proveniente do município de Mandaguari a bactéria não foi detectada. X. fastidiosa foi detectada por PCR em quatro das 101 plantas de café submetidas ao teste de transmissão por cigarras após seis meses.
Ocorrência de cigarrinhas vetoras da bactéria Xylella fastidiosa em lavouras cafeeiras no estado do Paraná
(2001) Lovato, Lidiana; Simões, Homero Christoval; Zandoná, Carla; Meneguim, Ana Maria; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
As cigarrinhas Acrogonia sp. Acrogonia virescens, Bucephalogonia xanthophis, Dilobopterus costalimai, Oncometopia fascialis, Sonesimia grossa, Plesiommata corniculata, Homalodisca ignorata, Macugonalia leucomelas, Ferrariana trivittata e Parathona gratiosa são vetoras da bactéria Xylella fastidiosa para plantas. Com o objetivo de conhecer a fauna de homópteros potenciais vetores de X. fastidiosa para cafeeiro, foi investigada a ocorrência dessas espécies em lavouras de cinco regiões produtoras de café do Estado do Paraná. Amostragens quinzenais utilizando rede entomológica e armadilha adesiva amarela foram realizadas durante o período de novembro de 1998 a outubro de 2000. Considerando-se todas as espécies de cigarrinhas amostradas em cada região, foi constatado que mais de 9,0% são representados por indivíduos das 11 espécies de cigarrinhas transmissoras da bactéria X. fastidiosa, alcançando 21% nos municípios de Londrina, Mandaguari e Ribeirão do Pinhal. As espécies O. fascialis, D. costalimai, B. xantophis e Acrogonia sp. foram de ocorrência constante, estando presentes em 100% das coletas em quase todos os municípios estudados. De modo geral, as espécies de cigarrinhas vetoras foram mais abundantes durante o período de primavera-verão.
Otimização da técnica de PCR para detecção de Xylella fastidiosa em insetos vetores associados a cafeeiro
(2001) Paião, F. G.; Meneguim, Ana Maria; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Xylella fastidiosa é uma bactéria gram-negativa limitada ao xilema, que causa doenças em várias plantas de interesse econômico. No Brasil, foi relatada causando escaldadura da folha de ameixeira, clorose variegada dos citros (CVC) e depauperamento em cafeeiro. O principal meio de transmissão desta bactéria ocorre através de insetos sugadores do xilema. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento da técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction) para detecção de X. fastidiosa em insetos vetores. Cigarrinhas coletadas em cafezais no Paraná tiveram o DNA total extraído segundo os métodos propostos por Vega et al. (1993), Cheung et al. (1993) e pela extração utilizando a resina CHELEX 100. Devido à baixa sensibilidade apresentada pelo PCR, foi desenvolvido o nested-PCR. Esta técnica envolve inicialmente a amplificação de fragmento de DNA, utilizando primeiramente um par de "primers", e a seguir o produto deste PCR serve como molde para uma segunda amplificação usando um novo conjunto de "primers", internos à seqüência amplificada no primeiro PCR. Os "primers" utilizados para amplificar o DNA de X. fastidiosa presente em cigarrinhas foram: 272-1 e 272-2 e RST31-RST33, para o primeiro PCR; e CVC-1 e 272-2 interno e RST31-RST33 internos, para o segundo PCR (nested PCR). O nested-PCR mostrou-se mais sensível e específico, utilizando os "primers" RST31-RST33 no primeiro PCR e RST31-RST33 internos no segundo PCR, para detecção de X. fastidiosa em cigarrinhas.
Presença de Xylella fastidiosa em quatro espécies de cigarrinhas da família cicadellidae coletadas em viveiros de café no estado do Paraná
(2003) Paião, F. G.; Novaes, Tanara G. de; Rossini, Viviane; Motomura, Karina F.; Lovato, Lidiana; Meneguim, Ana Maria; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
Xylella fastidiosa é uma bactéria fitopatogênica, gram-negativa, que causa doenças em diversas plantas cultivadas de importância econômica. É responsável pelo mal de pierce em videira, clorose variegada dos citros (cvc), nanismo do pessegueiro e requeima das folhas de cafeeiro, dentre outras. Essa bactéria é transmitida por insetos sugadores do xilema, como cigarrinhas e cigarras das famílias Cicadellidae e Cicadidae, respectivamente. Indivíduos da família Cicadellidae das espécies Bucephalogonia xanthophis, Dilobopterus costalimai, Oncometopia fascialis e Sonesimia grossa, já descritas como transmissoras para citros, foram capturadas em viveiros de café nos municípios de Abatiá, Iporã e Jandaia do Sul, PR, e avaliadas quanto à presença de X. fastidiosa. As coletas dos insetos foram realizadas no período de outubro de 1998 a setembro de 2001. Um total de 236 amostras de cigarrinhas, contendo de três a cinco cibários, foram submetidas à extração de DNA, e aos testes de pcr (reação de polimerase em cadeia) e nested pcr, utilizando os primers rst31 e rst33 e rst31-interno e rst33-interno, respectivamente, específicos para X. fastidiosa. A bactéria foi detectada nas quatro espécies de cigarrinhas, com porcentagem de presença nas amostras de 6,5% em D. costalimai, 19% em S. grossa, 24% em O. fascialis e 30% em B. xanthophis. Enquanto que em indivíduos das espécies B. xanthophis e O. fascialis a bactéria foi detectada praticamente todos os meses, durante o período de amostragem nos viveiros de Abatiá e Iporã, em D. costalimai foi constatada somente no mês de abril de 2001 em indivíduos coletados no viveiro de Abatiá. A presença da bactéria foi verificada em 20 e 29% das amostras de cigarrinhas de viveiros dos municípios de Abatiá e Iporã, respectivamente. Em contraste, X. fastidiosa não foi constatada nas amostras de cigarrinhas provenientes de viveiro do município de Jandaia do Sul.
Presença de Xylella fastidiosa em sementes e mudas de cafeeiro
(2000) Yorinori, Marcos Akio; Ribas, Alessandra Ferreira; Funada, Caio Katsumi; Jr., Nelson Sidnei Massola; Leite, Rui Pereira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
A ocorrência de Xylella fastidiosa em cafeeiro (Coffea arabica) tem sido reportado em diversos estudos. O presente trabalho teve por objetivo determinar a presença de X. fastidiosa em sementes e mudas de cafeeiro, bem como a possibilidade de transmissão da bactéria via semente. Foram examinados 12 lotes de sementes de cafeeiro das cultivares IAPAR 59, Catuaí Amarelo, Catuaí Vermelho, Mundo Novo, Acaiá, Sarchimor Amarelo, Icatu Precoce, Apoatã e IAPAR 75 163-21. O lote 102/C/98 da cultivar IAPAR 59, foi utilizado para produção de mudas visando estudar a transmissão da bactéria via semente. Os testes foram realizados em diferentes estádios de desenvolvimento das plântulas, como palito-de-fósforo, orelha-de-onça, e mudas com 2, 4, 5 e 6 pares de folhas. Também foram examinadas plântulas produzidas em viveiro nesses diferentes estádios de desenvolvimento. Para detectar a bactéria nas amostras foi utilizado o teste serológico de DAS-ELISA. A presença de X. fastidiosa foi constatada em oito lotes de sementes das cultivares IAPAR 59, Catuaí Vermelho, Mundo Novo, Acaiá e Sarchimor Amarelo. Nas mudas produzidas a partir de lote de sementes naturalmente infectadas não foi detectada a presença da bactéria X. fastidiosa em todos os estádios de desenvolvimento examinados. Para as mudas de viveiro, plântulas com 3, 4 e 6 pares de folhas apresentaram resultado positivo para presença de X. fastidiosa. Este resultado indica que a infecção de cafeeiro por X. fastidiosa pode ocorrer logo nos primeiros estádios de desenvolvimento das plantas.