UFV - Dissertações
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Item Identificação de genes de Hemileia vastatrix candidatos a efetores capazes de ativar ou suprimir respostas de defesa no cafeeiro(Universidade Federal de Viçosa, 2015-03-23) Ramirez, Gustavo Marin; Brommonschenkel, Sérgio HerminioDurante a interação com a planta hospedeira, os fungos causadores de ferrugem secretam um arsenal de proteínas efetoras que modificam a estrutura e a função da célula hospedeira, permitindo o estabelecimento da interação biotrófica. Algumas dessas proteínas efetoras, denominadas proteínas de avirulência (Avr), são reconhecidas por proteínas codificadas por genes de resistência, o que desencadeia uma resposta de defesa da planta contra a infecção pelo patógeno. Estudos prévios demonstraram que a proteína HvEC-016 secretada por H. vastatrix apresenta características de proteína de avirulência quando expressa transientemente em genótipos de cafeeiros portadores do gene de resistência S H 1. No entanto, análises funcionais mais detalhadas ainda são necessárias para confirmar o papel dessa proteína durante a interação do patógeno com o cafeeiro. Desse modo, os objetivos deste estudo foram: (i) confirmar a atividade efetora da proteína HvEC_016 como fator de avirulência e/ou virulência em genótipos de cafeeiro com a presença ou ausência do gene de resistência S H 1; (ii) avaliar a estabilidade dos plasmídeos nos clones bacterianos utilizados nos estudos da expressão trasiente nos tecidos foliares de cafeeiro; (iii) identificar novas proteínas secretadas pela raça II de H. vastatrix (isolado Hv-01) que apresentam atividade de avirulência em cafeeiros com diferentes combinações de genes S H , utilizando o vetor de expressão transiente pEDV6 e o Sistema de Secreção Tipo III de Pseudomonas syringae pv. garcae (estirpe 1723). Confirmaram-se as atividades funcionais de avirulência e virulência da proteína HvEC_016 por meio da avaliação do crescimento populacional do clone Psg 1723 pEDV::HvEC_016 em plantas de cafeeiro com e sem o gene S H 1, respectivamente. A análise por PCR de colônia das células bacterianas isoladas a partir dos tecidos foliares infiltrados mostrou que o vetor pEDV6 apresentou estabilidade nos clones bacterianos analisados. A expressão transiente de cinco genes candidatos a efetores (HvEC_006, HvEC_054, HvEC_057, HvEC_081 e HvEC_101) suprimiu o desenvolvimento de sintomas da doença em cafeeiros portadores do gene S H 1. A análise do crescimento das populações desses clones em genótipos com ou sem o gene S H 1 deverá ser futuramente efetuada para comprovar os resultados obtidos. A expressão transiente de proteínas efetoras putativas no citoplasma do cafeeiro mediante a aplicação do sistema EDV constitui uma metodologia importante para a identificação de genes de avirulência e/ou virulência de H. vastatrix.