Biblioteca do Café
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Item Efficiency of RNA extraction protocols in different types of coffee plant tissues(Editora UFLA, 2012-09) Paula, Márcia Fabiana Barbosa de; Ságio, Solange Aparecida; Lazzari, Fabiane; Barreto, Horllys Gomes; Paiva, Luciano Vilela; Chalfun-Junior, AntonioIn order to use sensitive techniques of molecular biology, such as the study of differentially expressed genes, a high- quality RNA in suitable quantities is necessary. Due to the presence of several varieties and often expressive quantities of secondary compounds in plants, there is no standard method for the isolation of nucleic acids that can be used for all species. Polyphenols and polysaccharides are the compounds that interfere the most in the extraction process, and when they are present, a low-quality RNA is produced. Four RNA extraction methods (CTAB method, Hot Borate, CONCERT and Tri Reagent), in four different coffee tissues (root, leaf, flower and fruit) were tested in this work, aiming at determining which method is more efficient. It was observed that the CTAB and Hot Borate methods, in which PVP and/or β -mercaptoethanol were added and precipitation with LiCl was performed, presented more pure RNA, with no degradation observed in any of the tissues, being suitable for further gene expression analysis. High-quality RNA was not obtained from any tissue in the extraction with Tri Reagent, which includes the use of phenol, and thus expression analysis was disturbed. The CTAB macroextraction method presented samples with the highest RNA quality and largest quantities in all tissues. Future works need to be carried out aiming the standardization of this macroextraction method.Item Análise dos genes homólogos de florescimento em café arábica(Universidade Federal de Lavras, 2011-02-23) Barreto, Horllys Gomes; Chalfun Júnior, AntonioApesar dos vários estudos que abordaram a fisiologia e os processos de desenvolvimento do café, muitos aspectos diretamente relacionados com a qualidade do café ainda requerem uma melhor compreensão, como o processo de regulação do florescimento. A maturação desuniforme dos frutos do cafeeiro, gerada pelo florescimento sequencial encontrado nessa espécie, afeta diretamente a sua produtividade e leva a aumentos nos custos de produção e também a uma bebida de menor qualidade. Assim, objetivando uma melhor compreensão do processo de florescimento do café (Coffea arabica), realizou-se neste trabalho a identificação e caracterização dos genes FLOWERING LOCUS C, FRIGIDA, REDUCED VERNALIZATION RESPONSE 2 e VERNALIZATION INSENSITIVE 3 em café. Análises in silico realizadas no banco de ESTs (Expressed Sequence Tags) CAFEST permitiram a identificação dos genes estudados, os quais tiveram suas sequências confirmadas. As análises de expressão realizadas pela técnica da PCR quantitativa em tempo-real (qPCR) mostraram que os quatro genes foram expressos em todos os tecidos analisados (raízes, folhas de plantas submetidas ao estresse hídrico, folhas, e flores) e sugeriram que todos estejam envolvidos na regulação do florescimento em café. Estudos futuros que envolvam mutantes para esses genes em plantas- modelo e em café possibilitarão um melhor entendimento das funções desempenhadas por cada um desses genes no florescimento, assim como uma melhor compreensão desse processo como um todo.