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    Reproducibility of the RAPD marker and its efficiency in coffee tree genotype grouping analysis
    (Crop Breeding and Applied Biotechnology, 2002) Sakiyama, Ney Sussumu; Teixeira-Cabral, Terezinha Aparecida; Zambolim, Laércio; Pereira, Antonio Alves; Barros, Everaldo Gonçalves; Sakiyama, Cássia Camargo Harger
    The genetic diversity of Coffea arabic L. cultivars is relatively narrow and its assessment and increase is important for breeding. Fifty two arbitrary primers were used to evaluate the reproducibility and the influence of the number of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) markers on the estimation of genetic distances among 40 genotypes of Coffea spp. The average number of polymorphic bands was 6.69 per primer among all genotypes, and 1.27 among arabica coffee genotypes. RAPD markers were efficient in estimating the genetic distances among the genotypes. The increase in RAPD loci number during grouping analysis did not affect the major groups’ composition; however, it affected the composition of subgroups. Marker reproducibility was 76.88% and replicated data was recommended for distinguishing genotypes with the same genetic background.
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    Quantificação e caracterização da microbiota da superfície de frutos de café (Coffea arabica L.) em Viçosa, MG durante a safra de 2000
    (2000) Sakiyama, Cássia Camargo Harger; Paula, Evandro Marcus de; Pereira, Pollyana C.; Hara, André; Silva, Daison Olzany; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
    Amostras de frutos de café arábica cultivar Catuaí Vermelho IAC-99, em diferentes estádios de desenvolvimento, foram coletadas com o objetivo de quantificar e caracterizar morfologicamente a microbiota da superfície. Após o processamento das amostras, determinou-se o número de células viáveis pela contagem de colônias em placas. Uma colônia representativa de cada tipo morfológico foi isolada e estocada. Um banco de culturas foi obtido, com um total de 1042 isolados, sendo 894 bactérias, 86 leveduras e 62 fungos filamentosos. Verificou-se uma sucessão de populações microbianas nos estádios de cereja e passa, com decréscimo da população de bactérias e aumento de fungos filamentosos e, especialmente, leveduras.
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    Uso de marcadores RAPD no estudo de variabilidade em clones de Coffea canephora var. Conillon
    (2000) Silva, Dalza Gomes da; Zambolim, Laércio; Sakiyama, Ney Sussumu; Sakiyama, Cássia Camargo Harger; Fonseca, Aymbiré Francisco Almeida da; Pereira, Antônio Alves; Cabral, Terezinha Aparecida Teixeira; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
    Avaliou-se quatro repetições de 12 clones que apresentaram variabilidade de reação à H. vastatrix. Oito indivíduos dos clones 03 e 07 foram analisados quando inoculados com as raças I, II, III e XIII. Selecionou-se também, cinco clones que apresentaram reação uniforme quando inoculados com quatro raças do patógeno, totalizando 76 indivíduos. Pelo método de agrupamento de Tocher, os 76 indivíduos formaram 16 grupos. As quatro repetições de cada clone formaram grupos distintos, entretanto, o indivíduo 21, correspondente à repetição I do clone 104-A, formou isoladamente o grupo 16, mostrando-se divergente dos demais. Os clones 104-A e 104-B formaram um grupo, e os clones 110-A e 110-B, outro grupo, indicando que são muito próximos geneticamente. Os primers utilizados não foram capazes de detectar diferenças entre os clones quando se considera o ciclo de maturação, da mesma forma que não foi possível observar diferenças intraclones. Por meio de marcadores RAPD, não foi possível detectar diferenças intraclones da variedade Conillon que apresentaram instabilidade de reações a H. vastatrix. Da mesma forma, não foi possível diferenciar clones de diferentes ciclos de maturação. A técnica de RAPD foi eficaz no estudo de variabilidade genética em C. canephora.
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    Uso de marcadores RAPD na avaliação da diversidade genética entre acessos de Coffea
    (2000) Cabral, Terezinha Aparecida Teixeira; Sakiyama, Ney Sussumu; Zambolim, Laércio; Pereira, Antônio Alves; Sakiyama, Cássia Camargo Harger; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
    A ampliação da diversidade genética é importante para o melhoramento genético do café, fazendo com que informações sobre distâncias genéticas entre acessos de um banco de germoplasma baseadas em marcadores moleculares sejam úteis na identificação desta diversidade. Marcadores RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) foram usados para avaliar as distâncias genéticas entre 40 genótipos de café do banco de germoplasma da Universidade Federal de Viçosa (incluindo quatro espécies diferentes). Foram utilizados 11 primers arbitrários da Operon Technologies, Inc., com repetição. Os produtos amplificados foram separados em geis de agarose 1,4%, tratados com brometo de etídeo e visualizados em um transiluminador UV. A técnica RAPD foi eficiente na identificação de variações entre acessos de Coffea. O agrupamento baseado no estudo com estes marcadores concordou com as relações genéticas previamente conhecidas.
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    Comparação da microbiota da superfície de frutos de café (Coffea arabica L.) colhidos em duas localidades
    (2000) Paula, Evandro Marcus de; Sakiyama, Cássia Camargo Harger; Pitta, Otávio P. L.; Borges, Arnaldo Chaer; Silva, Daison Olzany; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café
    A expressão final da qualidade da bebida do café é o resultado de um conjunto complexo de interação de fatores bióticos e abióticos, entre os quais se destaca a microbiota presente nos frutos durante os vários estádios de maturação. Este trabalho objetivou quantificar e caracterizar quanto à morfologia as populações microbianas encontradas na superfície dos frutos durante quatro estádios de desenvolvimento. As amostras de frutos de café arábica ‘Catuai Vermelho’ nos estádios verde, verde-cana, cereja e passa foram coletadas em Viçosa, MG, e Serra do Salitre, MG. Os grãos foram desinfestação individualmente para se determinar o número de células viáveis pela técnica de contagem de colônias em placas de Petri. A seguir foi feito o isolamento de microrganismos, a partir de colônias morfologicamente distintas, em cada uma das placas. Foram isolados 141 culturas a partir dos grãos amostrados em Viçosa, 85% delas sendo de bactérias, 10% de leveduras e 4% de fungos filamentosos. Diferentemente, de um total de 268 culturas provenientes dos isolados de Serra do Salitre, 94% foram bactérias, 2,5% leveduras e 3,5% fungos filamentosos. Nesta localidade, a diversidade de tipos morfológicos foi maior. Foi constatada a ocorrência da sucessão microbiana, a qual é evidente nos estádios cereja e passa. As culturas de bactérias, fungos filamentosos e leveduras provenientes das duas localidades foram incorporadas ao banco de germoplasma do Departamento de Microbiologia da UFV, para futuros estudos de biotecnológicos.
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    Colonização de Coffea arabica L. por bactérias endofíticas promotoras de crescimento
    (Universidade Federal de Viçosa, 2001) Sakiyama, Cássia Camargo Harger; Silva, Daison Olzany; Universidade Federal de Viçosa
    Os protocolos de esterilização superficial e de isolamento de bactérias endofíticas foram estabelecidos para frutos e caules de café arábica. Um isolado bacteriano produtor de pectina liase extracelular foi fisiologicamente e fenotipicamente caracterizado. A incidência de microbiota epifítica e endofítica foi constatada em amostras de frutos de café arábica oriundas de diferentes localidades. Bactérias, leveduras e fungos filamentosos foram isolados, sendo em Viçosa 1.042 isolados epifíticos e 282 potencialmente endofíticos, em Serra do Salitre 71 isolados epifíticos e 28 potencialmente endofíticos e em Patrocínio 85 isolados epifíticos e 33 potencialmente endofíticos. As bactérias foram isoladas em maior número, sendo que os bastonetes predominaram sobre os cocos e, dentre os bastonetes, as bactérias Gram negativas. A colonização de explantes de Coffea arabica L. por bactérias endofíticas foi demonstrada in situ pela técnica de imunofluorescência e comprovada pela recuperação das bactérias após sua reintrodução. Cinco isolados de bactérias endofíticas promoveram o crescimento de explantes de Coffea arabica e Coffea canephora, indicando que a sua interação não é espécie-específica.