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    Calogênese in vitro em anteras de Coffea arabica L.
    (Editora UFLA, 2004-07) Palú, Ednamar Gabriela; Silva, Adriano Bortolotti da; Pasqual, Moacir
    O café é um dos mais importantes produtos do mercado internacional; porém, o tempo gasto e os recursos despendi- dos são fatores limitantes para o melhoramento do cafeeiro por meio de métodos convencionais. Contudo, a cultura de anteras surge como uma alternativa viável e de curto prazo para solução desses problemas. Com o presente trabalho, objetivou-se a produção de dihaplóides com a cultura de anteras do cafeeiro (androgênese indireta), buscando um protocolo para a fase de indução de calos. Para tanto, foi efetuada a assepsia dos botões florais e das anteras, que, em seguida, foram inoculadas em meio IC e mantidas no escuro por 8 semanas, sob temperatura de 25 o C ± 1. Para induzir a calogênese em anteras da cv. Acaiá Cerrado, foram testadas as concentrações de 2,4-D (0, 1, 2 e 4 mg.L -1 ) x cinetina (0, 2, 4 e 8 mg.L -1 ) e 2,4-D (0; 0,5; 1 e 2 mg.L -1 ) x AIB (0; 0,5; 1 e 2 mg.L -1 ) mais 2iP (2 mg.L -1 ) e, para a cv. Rubi, as concentrações de 2,4-D (0, 1, 2 e 4 mg.L -1 ) x cinetina (0, 2, 4 e 8 mg.L -1 ). Foi observado que a maior porcentagem de indução de calogênese em anteras na cv. Acaiá Cerrado ocorre com as combinações de 2,4-D (2 mg.L -1 ) + cinetina (1,9 mg.L -1 ) e 2,4-D (0,86 mg.L -1 ) + AIB (1 mg.L -1 )+ 2iP (2 mg.L -1 ); para cv. Rubi, a combinação de 2,4-D (1,9 mg.L -1 ) e cinetina (4 mg.L -1 ).
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    Criopreservação de embriões zigóticos de Coffea arabica por vitrificação
    (Universidade Federal de Lavras, 2002-03-25) Freitas, Rodrigo Therezan de; Paiva, Renato
    Devido à importância econômica e social do cafeeiro para o Brasil, é necessário que sejam adotadas medidas para a conservação do seu recurso genético. Entretanto, em consequência da dificuldade de armazenamento de sementes de café de forma convencional, alternativas biotecnológicas tal como a criopreservação tem sido requerida. Neste contexto, objetivou-se desenvolver um protocolo para a criopreservação de embriões zigóticos de Coffea arabica L. cv. Catuaí Vermelho (IAC 144) pela técnica de vitrificação. Primeiramente, avaliou-se a desinfestação das sementes e a excisão dos embriões zigóticos. Na desinfestação as sementes foram imersas em diferentes concentrações de formaldeído (0; 0,5; 1 e 1,5%) durante diferentes períodos de tempo (5, 15 e 30 min). Para a excisão dos embriões as sementes foram desinfestadas e imersas em solução de ácido bórico 0,5% durante diferentes períodos de tempo (1, 2 e 3 dias). Para o estudo de criopreservação, foram avaliados antes do congelamento diferentes tempos de imersão no Plant vitrification solution 2 (PVS2) (0, 10, 25, 50, 100, e 250 min) em duas temperaturas (0°C e 25ºC). Na sequência foi determinado o melhor tempo de descongelamento em banho-maria (1, 3, 5 ou diretamente em Recovery solution (RS)). Um estudo anatômico foi realizado em embriões zigóticos não criopreservados (controle), e criopreservado com ou sem o uso do crioprotetor PVS2. Posteriormente, foi realizada a aclimatização das plântulas oriundas de embriões criopreservados e não criopreservados. A completa desinfestação das sementes é obtida com 1 ou 1,5% de formaldeído por 30 min. A imersão das sementes por 2 ou 3 dias em solução de ácido bórico 0,5% torna as sementes mais maleáveis para a posterior excisão dos embriões, proporcionando 100% de germinação com plântulas normais. A criopreservação dos embriões zigóticos foi obtida com sucesso por meio da vitrificação. A imersão em solução crioprotetora por 100 min a temperatura de 0ºC permite a criopreservação dos embriões promovendo 80% de germinação com 87% de plântulas normais. Para o descongelamento os embriões zigóticos congelados podem ser descongelados diretamente em RS, eliminando a necessidade de uso do banho-maria. Anatomicamente, observou-se que a solução de PVS2 reduziu o conteúdo interno de água das células verificando-se plasmólises celular, permitindo o congelamento e a posterior retomada de crescimento dos embriões após o descongelamento. Em relação à aclimatização trabalhos adicionais são necessários para melhorar a taxa de sobrevivência das plântulas oriundas de embriões congelados, uma vez que apenas 13% das plântulas sobreviveram após a aclimatização.
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    Vegetative vigor conilon coffee and its potential for in vitro callus induction
    (Editora UFLA, 2013-10) Santos, Maurício Reginaldo Alves dos; Ferreira, Maria das Graças Rodrigues; Oliveira, Carla Liegi Lonardoni Gomes de; Ramalho, André Rostand; Espíndula, Marcelo Curitiba
    Considering the importance of the culture of Coffea canephora in the Brazilian Amazon and the need for genetic improvement of this species for cultivation in the state of Rondonia, he objective of this study was to evaluate the correlation between the initial vigor of clonal plants of C. canephora variety Conilon, under field conditions, and its potential for in vitro propagation. Promising clones belonging to the Genetic Improvement Program of Coffea sp were used Embrapa (Brazilian Agricultural Research Corporation) Rondonia. The plant height, number and length of orthotropic shoots in coffee at 10 months after planting were evaluated. In the laboratory, leaves of plants of each clone were segmented into fragments of 1 cm 2 which were inoculated on MS medium containing half the concentration of salts, AIB (10 μM), 2,4-D (20 μM) and 2iP (10 μM), sugar (20 g cm -3 ) and agar (6 g cm -3 ). Cultures were maintained in a growth chamber under 16 h photoperiod at 2000 lux and 24 ± 2 o C. The callus induction and the percentage of leaf area covered with callus cells were observed within 90 days. Clone 9 showed greater vegetative growth in the field. Only clone 12 showed no callus induced, all other clones were highly responsive to callus induction, and clone 5 showed a higher percentage of leaf area covered with callus cells. There was no phenotypic correlation between early vigor in the field and calogênico potential in vitro, for clones of coffee used.
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    Embriogênese somática indireta em clones elite de Coffea arabica L.
    (Universidade Federal de Lavras, 2008-08-29) Rezende, Juliana Costa de; Pasqual, Moacir
    Este trabalho foi conduzido visando alcançar alta eficiência na embriogênese somática indireta em explantes foliares de plantas matrizes de Coffea arabica. Na indução de embriões somáticos, avaliou-se o potencial de produção de calos embriogênicos de clones elites em diferentes meios de cultura e variações nas concentrações de 2,4-D e 2-iP, nos meios primário e secundário de Teixeira et al. (2004 ). Na fase de multiplicação de calos, os tratamentos constituíram-se de dois meios de cultura (meio do estágio dois de Albarran et al., 2004 e meio de multiplicação de Teixeira et al., 2004) e dois sistemas de cultivo (gelificado e líquido). As avaliações foram realizadas aos 21, 42 e 63 dias após a instalação do experimento, por meio da pesagem dos calos. Na conversão de embriões somáticos em estádio cotiledonar para plântulas, avaliou-se o efeito do IBA e do BAP no meio de crescimento (PRM) de Teixeira et al. (2004). Plantas produzidas via embriogênese somática foram comparadas, em condições de campo, com plantas provenientes de sementes. Observou-se que a produção de embriões somáticos é fortemente dependente do genótipo. A indução de calos depende da época de coleta dos explantes e da relação de 2-iP e 2,4-D. O sistema gelificado apresentou maior eficiência na multiplicação de calos embriogênicos dos clones estudados. Considerando a porcentagem plântulas normais e plântulas com raízes e os valores médios do comprimento da parte aérea, não há necessidade da adição de IBA e BAP, no protocolo empregado, para a conversão de embriões somáticos em estádio cotiledonar para plântulas. As plantas provenientes de embriogênese somática apresentaram maior diâmetro de copa em relação às plantas provenientes de sementes, não havendo diferença significativa para as demais características avaliadas. Não foi detectada, pela inspeção visual, qualquer alteração no fenótipo na plantas provenientes da embriogênese somática. Assim, o comportamento de plântulas de Coffea arabica produzidas via embriogênese somática é semelhante ao de plântulas oriundas de sementes.
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    Embriogênese somática em genótipos de Coffea arabica L.
    (Editora UFLA, 2008-07) Almeida, Julieta Andrea Silva de; Silvarolla, Maria Bernadete; Fazuoli, Luiz Carlos; Stancato, Giulio Cesare
    A espécie Coffea arabica L. possui genótipos com características de interesse, como o AC1, AC2 e AC3, cujas sementes apresentam conteúdo reduzido de cafeína. No entanto, cada um desses genótipos conta com uma única planta no Banco de Germoplasma do IAC, tendo, portanto, somente um acesso. Objetivou-se com este estudo avaliar a capacidade de embriogênese somática indireta dos genótipos AC e da cultivar Mundo Novo visando à sua multiplicação. Verificou-se que os três genótipos apresentaram capacidade embriogênica e formaram calos de tamanhos semelhantes entre si; no entanto, quanto à formação de embriões, o AC1 foi o mais eficiente.
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    Características histo-anatômicas dos calos a partir de embriões zigóticos imaturos de Coffea arabica L. cv. Rubi
    (Embrapa Café, 2015) Lacerda, Guilherme Araújo; Oliveira e Silva, Brenda de; Chalfun Junior, Antonio; Paiva, Luciano Vilela
    Com o objetivo de estudar o processo de calogênese utilizando-se embriões zigóticos imaturos de cafeeiro C. arabica L. cv. Rubi como fonte alternativa de explantes, foi realizado o presente trabalho. Foram coletados frutos de cafeeiro C. arabica L. cv. Rubi em estádio verde-cana e mantidos em sacos de papel, por 24 horas, sob refrigeração (4ºC). Os frutos foram desinfestados com hipoclorito de sódio comercial 70% (v/v) durante 30 minutos, em câmara de fluxo laminar e lavados 3 vezes em água destilada e autoclavada. Em seguida, os embriões foram isolados utilizando-se placas de Petri esterilizadas contendo papel filtro e água destilada e autoclavada. Para induzir a calogênese, foi realizada uma incisão no hipocótilo do embrião zigótico imaturo no momento de sua excisão do fruto. Calos provindos de plantas de cafeeiro com um ano de estabelecimento foram observados quanto aos seus aspectos histo-anatômicos. Foram feitos cortes transversais corados com safrablau (safranina e azul de astra) e observados e fotografados em microscópio fotônico. Foi observado, ao MEV, que as células acumulam grande quantidade de amiliplastídeos, sugerindo que os grãos de amido podem ser utilizados como marcadores iniciais do potencial embriogênico. A microscopia fotônica revelou que os calos provindos de embriões zigóticos apresentam-se como uma fonte de explante responsiva à embriogênese, mostrando indícios de formação de embriões somáticos.
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    Indução de calos embriogênicos em Coffea arabica L. cv. Catuaí Amarelo
    (Embrapa Café, 2015) Souza, Ana Cristina de; Paiva, Renato; Reis, Michele Valquíria dos; Carvalho, Milene de Figueiredo; Silva, Luciano Coutinho; Silva, Diogo Pedrosa Corrêa da; Nery, Fernanda Carlota; Sales, Thais Silva; Rosa, Stella Veiga Franco da
    O cafeeiro (Coffea sp.) é um arbusto pertencente à família Rubiaceae e ao gênero Coffea. O grande valor comercial do Coffea arábica é devido ao fato de seus grãos apresentarem sabor mais pronunciado e refinado. A embriogênese somática é um importante método de multiplicação em larga escala de plantas in vitro e pode maximizar a propagação do cafeeiro. Além disso, apresenta aplicações práticas para estudos de desenvolvimento embriológico e como técnica conjunta aos trabalhos de transformação genética de plantas. Várias pesquisas de cultivo in vitro já foram desenvolvidas com a espécie, entretanto, existe uma grande variedade de cultivares carentes deste tipo de estudo. O objetivo deste trabalho foi de indução de calos embriogênicos em Coffea arábica L. cv Catuaí Amarelo. Plântulas de cafeeiro Catuaí Amarelo cultivadas in vitro foram utilizadas como fonte de explantes. As folhas foram excisadas (1 cm2), pequenos cortes foram feitos na nervura central para indução de calos e os explantes foram inoculados com o lado abaxial voltado para o meio de cultivo MS com metade da concentração dos sais, 10 μM de Cinetina e diferentes concentrações (0, 2,5, 5, 10 e 20μM) do ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D). Os explantes foram mantidos em sala de crescimento, no escuro e com temperatura de 25 ± 2 °C. Após 45 dias de cultivo, a porcentagem de formação de calos e formação de raízes foram avaliados e os dados submetidos à ANAVA. A formação de calos e de rizogênese foi significativa (p<0.001). O uso de 2,5 μM e 10 μM de 2,4-D promoveram maiores porcentagens de formação de calos em 51% dos explantes. Ocorreu a formação de rizogênese quando utilizado 2,5 μM ou ausência de 2,4 D. O tratamento com 10 μM de 2,4-D é o mais indicado para a indução de calos em explantes foliares da cultivar Catuaí Amarelo.