Biblioteca do Café
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Item Levantamento populacional do nematoide das galhas em cafeeiros do Cerrado mineiro e diagnose de Meloidogyne exigua por meio de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP)(Universidade Federal de Viçosa, 2022-02-25) Babilônia, Gustavo Braga; Lopes, Everaldo Antônio; Vieira, Bruno SérgioO nematoide das galhas (Meloidogyne spp.) parasita as principais culturas agricolas, incluindo o cafeeiro. O ataque de nematoide das galhas ao cafeeiro causa prejuizos à cadeia produtiva do café e para o controle eficiente deste fitopatógeno é importante ressaltar algumas medidas, como o levantamento populacional por regiões, afim de evitar a introdução do patógeno na lavoura, e a correta identificação da espécie. Visando tais medidas, abordou-se neste trabalho o levantamento populacional do nematoide das galhas na região produtora de café do Cerrado mineiro, e o estabelecimento de um ensaio para a utilização da amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) a fim de identificar M. exigua. No Capítulo 1, abordou-se levantamento populacional do nematoide das galhas no Cerrado mineiro. Após a coleta, as amostras foram identificadas utilizando eletroforese de isoenzimas, reação em cadeia da polimerase, observação dos padrões perineais da fêmea e da morfologia do macho. Após o levantamento, a espécie mais encontrada foi M. exigua, seguida de M. paranaensis e M. incognita. Também foi diagnosticado em uma amostra M. arenaria. No Capítulo 2, foi realizada uma revisão sobre a utilização da LAMP na identificação de fitonematoides, discutindo detalhes da técnica e seu potencial para diagnose desses patógenos. No Capítulo 3 estabelecemos um ensaio LAMP para a identificação de M. exigua, com primers baseados na região 28S do rDNA do patógeno, sendo monitorada em gel de eletroforese e a olho nu por colorimetria, utilizando o mastermix WarmStant?. A reação proposta foi capaz de amplificar especificamente DNA de M. exigua, não amplificando de M. incognita e M. paranaensis. Além disso, o ensaio LAMP foi altamente sensível, amplificando 0,0026 ng de DNA alvo. Palavras-chave: Identificação. Isoenzimas. Medidas. Patógeno.Item Teste de tetrazólio em café: fisiologia e bioquímica de enzimas na estimação da germinação das sementes(Universidade Federal de Lavras, 2018-02-28) Fantazzini, Tatiana Botelho; Rosa, Sttela Dellyzete Veiga Franco da; Clemente, Aline da Consolação SampaioDevido às discrepâncias entre os resultados do teste de germinação e do teste de tetrazólio na avaliação da qualidade de sementes de café, quatro estudos foram realizados objetivando-se investigar estas discrepâncias. Foram avaliadas as mudanças metabólicas que ocorrem em sementes de café com diferentes níveis de qualidade em relação aos testes de germinação e de tetrazólio. Primeiramente, foi realizado um estudo estatístico de dados históricos de resultados do teste de germinação e do teste de tetrazólio em amostras de sementes de café, analisando-se a correlação existente entre estes resultados, por meio de modelos de Regressão Generalizados Aditivos de Locação, Escala e Forma (GAMLSS). De acordo com os resultados da análise GAMLSS, a estimativa da germinação pelo teste de tetrazólio é variável em função das classes de porcentuais de germinação. Há maiores correlações de GAMLSS entre as porcentagens de plântulas normais e de viabilidade no teste de tetrazólio, para valores de germinação acima de 70% e baixas correlações abaixo deste valor, evidenciando que a avaliação de sementes de café, baseada apenas no teste de tetrazólio, pode não corresponder ao real desempenho fisiológico. No segundo estudo foi avaliada a aplicabilidade do teste de tetrazólio para estimar a viabilidade de sementes de café com diferentes tipos e níveis de estresses. Constatou-se que o teste de tetrazólio pode superestimar o potencial de sementes de café para produzir plântulas normais, principalmente em lotes de sementes com baixo nível de qualidade. No terceiro estudo, as alterações fisiológicas, respiratórias e de enzimas desidrogenases foram avaliadas em endospermas e embriões de sementes de café submetidas a diferentes tipos de estresses. O teste de tetrazólio superestima a germinação das sementes de baixa qualidade, principalmente quando estas são submetidas aos estresses de secagem em alta temperatura, exposição à temperatura subzero e armazenamento em ambiente não controlado. As enzimas glicose-6-fosfato desidrogenase, álcool desidrogenase e glutamato desidrogenase apresentam maior atividade em embriões do que em endospermas de sementes de café. Ocorrem variações na atividade das isoformas das enzimas xantina desidrogenase e diaforase nos embriões e endospermas das sementes de café. No quarto e último estudo, foram avaliadas as alterações fisiológicas e do sistema enzimático antioxidante em endospermas e em embriões de café, após estes serem submetidos a diferentes condições de estresse. As discrepâncias entre os resultados do teste de germinação e os resultados do teste de tetrazólio com superestimação da germinação foi confirmada neste estudo. As enzimas catalase e isocitrato liase apresentam maior atividade em endospermas do que em embriões, sendo esta atividade associada à maior deterioração. A enzima peroxidase não apresenta atividade em embriões de sementes de café.Item Cryopreservation in Coffea canephora Pierre seeds: slow and fast cooling(Editora UFLA, 2018-11) Coelho, Stefânia Vilas Boas; Rosa, Sttela Dellyzete Veiga Franco da; Fantazzini, Tatiana Botelho; Baute, Júlia Lima; Silva, Luciano CoutinhoCoffee is one of the main agricultural commodities in the country, and it is important to conservation of plant material for breeding programs. Cryopreservation is a promising alternative for preserving in the long-term the germplasm of species considered recalcitrant. However, studies should be performed to achieve maximum survival of seedlings after immersion in liquid nitrogen. The objective of this work was to find a cryopreservation protocol for storing seeds of Coffea canephora, studying two methods of cryopreservation, slow and fast cooling. Seeds were subjected to drying in silica gel up to the water content of 0.25 g g -1 . In the first experiment, dried seeds were subjected to treatments of slow cooling at speeds of -1 oC min -1 ,-3 oC min -1 and -5 oC min -1 until the end temperatures of -40 oC, -50 oC and -60 oC, by means of a bio freezer and subsequently immersed in liquid nitrogen. In the second experiment, the best result was selected of the first experiment and compared with the rapid cooling, in which dried seeds, with 0.25 g g -1 of water content, were immersed directly into liquid nitrogen. Physiological and biochemical alterations occurring in the seeds after cryopreservation were evaluated. Coffea canephora seeds respond better to cryopreservation by rapid cooling, when compared to slow cooling. Drying, one of the cryopreservation steps does not affect the viability of Coffea canephora Pierre seeds, when these seeds are dried to 0.25 g g -1 of water content. Catalase and esterase enzymes are good biochemical markers for cryopreserved coffee seeds and their activity is greater in larger seed physiological quality.Item Evidência isoenzímica sobre a origem interespecífica do café Piatã(Instituto Agronômico (IAC), 1995-07) Medina Filho, Herculano Penna; Carvalho, Alcides; Ballve, Rosa Maria Lizana; Bordignon, Rita; Silvarolla, Maria Bernadete; Lima, Marinez Muraro Alves de; Fazuoli, Luiz CarlosEncontrou-se, anos atrás, em uma lavoura de Coffea arabica (2n = 44), uma forma de café bastante distinta das demais. Inicialmente, julgou-se tratar de um cafeeiro autotetraplóide de C. liberica (2n = 22) ou de C. dewevrei (2n = 22). Estudos morfológicos e citológicos de tal cafeeiro, denominado Piatã (prefixo C387 da Seção de Genética do IAC), assim como de seus descendentes, indicaram tratar-se, provavelmente, de um híbrido natural derivado da união de um gameta normal de C. arabica e de um não reduzido de C. dewevrei. No presente trabalho, os estudos dos padrões eletroforéticos das enzimas PGI, PGM e ADH do endosperma de sementes confirmaram a origem interespecífica do café Piatã. A combinação de alelos dessas enzimas é distinta e específica para C. dewevrei e C. arabica e tais alelos segregam nas sementes do cafeeiro Piatã. O estudo das isoenzimas das sementes mostram também que, ao contrário do que se pensava, o café Piatã não é auto-incompatível, sendo freqüente a autofecundação. Análises semelhantes, além de úteis na identificação de outros híbridos naturais entre espécies de Coffea, serão de grande valia nos trabalhos básicos de genética, evolução e melhoramento do cafeeiro, nos quais importa conhecer a origem, constituição genética e biologia da reprodução das plantas.Item Expressão de genes relacionados ao processo oxidativo durante a secagem de sementes de café(Universidade Federal de Lavras, 2010-08-05) Santos, Gustavo Costa; Pinho, Édila Vilela de Resende VonAs sementes são um importante meio de propagação de culturas do gênero Coffea. A obtenção de sementes de café com alta qualidade é fundamental para a formação de mudas. O estresse oxidativo durante o processo de secagem é fator limitante para a obtenção de sementes com alta qualidade fisiológica. Diante do exposto, foi proposto nesta pesquisa estudar o efeito de diferentes métodos de secagem e graus de umidade na qualidade fisiológica de sementes de Coffea arabica e Coffea canephora e na expressão de alguns genes relacionados aos sistemas enzimáticos de combate ao estresse oxidativo, catalase e peroxidase. A colheita dos frutos no estádio cereja foi realizada no campo experimental da UFLA, na cidade de Lavras/MG. As sementes foram submetidas à secagem lenta e rápida até atingirem os graus de umidade de 40, 30, 20 e 12%. Como testemunha uma amostra de sementes não recebeu qualquer tratamento de secagem, permanecendo com grau de umidade de 46%. As amostras foram submetidas às análises de qualidade fisiológica utilizando-se as variáveis protrusão radicular e plântulas normais aos 15 dias, normais e normais fortes aos 30 dias, plântulas com abertura cotiledonar e matérias secas de hipocótilo e radícula aos 45 dias. Para as análises fisiológicas utilizou-se DIC com esquema fatorial [(2x4) + 1]. As sementes foram submetidas às analises das isoenzimas esterase, catalase, peroxidase e endo-β-mananase. Foi realizada a busca por genes alvo no banco de dados do genoma café brasileiro. As sequências foram analisadas por bioinformática e posteriormente utilizadas para confecção de primers específicos. Foi avaliada a expressão gênica por meio da técnica de RT-qPCR dos genes catalase e peroxidase em cada amostra. De forma geral, na espécie C. arabica foram observados os melhores resultados de qualidade fisiológica em sementes com 20% de grau de umidade submetidas à secagem rápida e com 40 e 12% de grau de umidade, em sementes submetidas à secagem lenta. Para a espécie C. canephora obteve-se os melhores resultados de qualidade fisiológica em sementes submetidas à secagem rápida. Nessa mesma espécie, houve tendência de perda de qualidade fisiológica com a redução do grau de umidade, em ambos os métodos de secagem. Pelos resultados pode-se inferir que as sementes de C. arabica e C. canephora apresentaram maior tolerância à dessecação quando são submetidas à secagem rápida. Houve redução dos níveis de expressão dos transcritos das enzimas catalase (CAT3) e peroxidase (POXa) com a secagem das sementes de C. arabica e C. canephora. Os padrões de expressão dos genes peroxidase e catalase são diferentes, apesar de ambos serem ligados ao estresse oxidativo. A expressão de genes associados ao processo oxidativo é influenciada pelo método de secagem.Item Variabilidade genética e biológica de Meloidogyne exigua e patogenicidade de Meloidogyne spp. em genótipos de cafeeiro(Universidade Federal de Lavras, 2007-12-19) Muniz, Maria de Fátima Silva; Campos, Vicente PauloEstudos isoenzimáticos e técnicas moleculares (SCAR e RAPD-PCR) foram realizados em 15 populações de três raças de Meloidogyne exigua, parasitas do cafeeiro no Brasil, Bolívia e Costa Rica e em uma população obtida de seringueira no Brasil. Esses estudos revelaram quatro fenótipos de esterase (E1, E2, E2a e E3) e três de malato-desidrogenase (N1, N1a e N2). Os primers SCAR em condição multiplex-PCR permitiram a identificação de todas as populações de M. exigua. Análises filogenéticas mostraram alto polimorfismo intra-específico (25,9-59,6%) para todas as populações estudadas. Entretanto, todas agruparam-se com 100% de bootstrap. Além disso, a caracterização de uma população de M. exigua obtida de seringueira revelou algumas diferenças, comparadas àquelas populações descritas no cafeeiro, principalmente na morfologia do estilete de macho e fêmea. Todavia, apresentou similaridades em várias características morfológicas e morfométricas, fenótipo E1 de esterase (Rm 1,5), em dados citológicos (número de cromossomos) e moleculares (SCAR e RAPD-PCR). Em outro estudo, 10 populações de Meloidogyne spp. foram inoculadas em sete genótipos de cafeeiro em casa de vegetação. As cultivares Obatã IAC 1669-20, Sarchimor IAC 4361 e Tupi Amarelo IAC 5111 exibiram suscetibilidade às quatro populações brasileiras de M. exigua. Entretanto, cv. Tupi Vermelho IAC 1669-33 mostrou-se resistente (FR = 0,7) a uma população de M. exigua proveniente de Lavras, MG, Brasil. A população de M. exigua oriunda de Bom Jesus de Itabapoana, RJ, Brasil, foi altamente virulenta (FR = 165,7) à cv. IAPAR 59, portadora do gene de resistência Mex-1 e ao genótipo H 419-5-4-5-2 (FR = 396,2). A população de Meloidogyne sp. do cafeeiro, Garça, SP, Brasil, reproduziu-se em baixos níveis (FR = 0,1-3,9) sobre todos os genótipos. Todas as cultivares foram suscetíveis a M. incognita e M. paranaensis. A reprodução de M. mayaguensis obtida de goiabeira, PR, Brasil, foi baixa (FR = 0,0-1,6), em todos os genótipos testados. Entretanto, a mesma espécie obtida do cafeeiro na Costa Rica apresentou valores de FR que variaram de 0,8 a 12,4. Os resultados deste trabalho mostraram, pela primeira vez, a quebra de resistência da cultivar IAPAR 59, resultante do cruzamento C. arabica cv. Villa Sarchi x Híbrido do Timor por uma população de M. exigua obtida em campo.