Teses e Dissertações
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Item Potential of antimicrobial peptide of seeds of Coffea canephora cv Robusta Tropical in the control of phytopathogenic microrganisms(Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro, 2016-10-27) Bard, Gabriela da Costa Vieira; Gomes, Valdirene MoreiraPeptídeos antimicrobianos, os quais desempenham um papel importante na defesa das plantas, têm sido identificados particularmente de sementes. Neste trabalho nós isolamos e imunolocalizamos uma proteína transportadora de lipídeos (LTP), denominada Cc-LTP2, de sementes de Coffea canephora. Também descrevemos sua atividade antimicrobiana contra vários fungos fitopatogênicos de importância econômica e contra a bactéria Xanthomonas euvesicatoria. Os peptídeos de sementes de C. canephora foram inicialmente extraídos em tampão ácido e submetidos à cromatografia de troca iônica e de fase reversa. Um peptídeo purificado de aproximadamente 9 kDa foi então submetido ao seqüenciamento de aminoácidos. As análises mostraram que o peptídeo era semelhante a LTPs isoladas de várias plantas e foi denominado de Cc-LTP2. A localização tecidual de LTPs de Coffea canephora indicou localização tanto nas paredes celulares do parênquima paliçádico como localização intracelular no em grandes vacúolos. Os resultados de imunohistoqúimica e histoquímica de tecidos de sementes de C. canephora sobrepostos mostrou que LTPs e corpos lipídicos estão presentes em organelas, apoiando a hipótese de que as LTPs de sementes estão envolvidas na mobilização de lipídeos durante a germinação. Cc-LTP2 não inibiu o desenvolvimento dos fungos fitopatogênicos,mas inibiu o crescimento de X. euvesicatoria.Cc-LTP2 promoveu a permeabilização das membranas e induziu a produção endógena de espécies reativas de oxigênio em todos os fungos testados. Outro objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana dos peptídeos Cc-LTP2 e Cc-GRP isolados de sementes de C. canephora e sua possível atividade sinérgica com a droga azólica Fluconazol. Cc-LTP2 e Cc-GRP separadamente e em combinação com 20 μg/mL de Fluconazol foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana sobre o fungo Fusarium solani, e os efeitos destes peptídeos sozinhos e em conjunto com o Fluconazol sobre a permeabilização de membranas e a indução de estresse oxidativo foram determinados. Os nossos resultados mostraram que estes peptídeos, em uma concentração de 400 μg/mL combinados com 20 μg/mL de Fluconazol foram capazes de inibir o crescimento do fungo testado, promover alterações no seu padrão de crescimento, permeabilizar sua membrana e induzir espécies reativas de oxigênio (ROS). Alguns desses resultados não foram observados com os peptídeos sozinhos ou com o Fluconazol sozinho, sugerindo que os peptídeos e o Fluconazol atuem sinergicamente promovendo uma potencialização da atividade antimicrobiana. Por fim os peptídeos Cc-LTP e Cc- GRP foram submetidos à clonagem, porém com a estratégia empregada não foi possível a obtenção da sequencia dos fragmentos clonados.