Teses e Dissertações
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Item Criopreservação de embriões zigóticos de Coffea arabica por vitrificação(Universidade Federal de Lavras, 2002-03-25) Freitas, Rodrigo Therezan de; Paiva, RenatoDevido à importância econômica e social do cafeeiro para o Brasil, é necessário que sejam adotadas medidas para a conservação do seu recurso genético. Entretanto, em consequência da dificuldade de armazenamento de sementes de café de forma convencional, alternativas biotecnológicas tal como a criopreservação tem sido requerida. Neste contexto, objetivou-se desenvolver um protocolo para a criopreservação de embriões zigóticos de Coffea arabica L. cv. Catuaí Vermelho (IAC 144) pela técnica de vitrificação. Primeiramente, avaliou-se a desinfestação das sementes e a excisão dos embriões zigóticos. Na desinfestação as sementes foram imersas em diferentes concentrações de formaldeído (0; 0,5; 1 e 1,5%) durante diferentes períodos de tempo (5, 15 e 30 min). Para a excisão dos embriões as sementes foram desinfestadas e imersas em solução de ácido bórico 0,5% durante diferentes períodos de tempo (1, 2 e 3 dias). Para o estudo de criopreservação, foram avaliados antes do congelamento diferentes tempos de imersão no Plant vitrification solution 2 (PVS2) (0, 10, 25, 50, 100, e 250 min) em duas temperaturas (0°C e 25ºC). Na sequência foi determinado o melhor tempo de descongelamento em banho-maria (1, 3, 5 ou diretamente em Recovery solution (RS)). Um estudo anatômico foi realizado em embriões zigóticos não criopreservados (controle), e criopreservado com ou sem o uso do crioprotetor PVS2. Posteriormente, foi realizada a aclimatização das plântulas oriundas de embriões criopreservados e não criopreservados. A completa desinfestação das sementes é obtida com 1 ou 1,5% de formaldeído por 30 min. A imersão das sementes por 2 ou 3 dias em solução de ácido bórico 0,5% torna as sementes mais maleáveis para a posterior excisão dos embriões, proporcionando 100% de germinação com plântulas normais. A criopreservação dos embriões zigóticos foi obtida com sucesso por meio da vitrificação. A imersão em solução crioprotetora por 100 min a temperatura de 0ºC permite a criopreservação dos embriões promovendo 80% de germinação com 87% de plântulas normais. Para o descongelamento os embriões zigóticos congelados podem ser descongelados diretamente em RS, eliminando a necessidade de uso do banho-maria. Anatomicamente, observou-se que a solução de PVS2 reduziu o conteúdo interno de água das células verificando-se plasmólises celular, permitindo o congelamento e a posterior retomada de crescimento dos embriões após o descongelamento. Em relação à aclimatização trabalhos adicionais são necessários para melhorar a taxa de sobrevivência das plântulas oriundas de embriões congelados, uma vez que apenas 13% das plântulas sobreviveram após a aclimatização.Item Embriogênese somática indireta em clones elite de Coffea arabica L.(Universidade Federal de Lavras, 2008-08-29) Rezende, Juliana Costa de; Pasqual, MoacirEste trabalho foi conduzido visando alcançar alta eficiência na embriogênese somática indireta em explantes foliares de plantas matrizes de Coffea arabica. Na indução de embriões somáticos, avaliou-se o potencial de produção de calos embriogênicos de clones elites em diferentes meios de cultura e variações nas concentrações de 2,4-D e 2-iP, nos meios primário e secundário de Teixeira et al. (2004 ). Na fase de multiplicação de calos, os tratamentos constituíram-se de dois meios de cultura (meio do estágio dois de Albarran et al., 2004 e meio de multiplicação de Teixeira et al., 2004) e dois sistemas de cultivo (gelificado e líquido). As avaliações foram realizadas aos 21, 42 e 63 dias após a instalação do experimento, por meio da pesagem dos calos. Na conversão de embriões somáticos em estádio cotiledonar para plântulas, avaliou-se o efeito do IBA e do BAP no meio de crescimento (PRM) de Teixeira et al. (2004). Plantas produzidas via embriogênese somática foram comparadas, em condições de campo, com plantas provenientes de sementes. Observou-se que a produção de embriões somáticos é fortemente dependente do genótipo. A indução de calos depende da época de coleta dos explantes e da relação de 2-iP e 2,4-D. O sistema gelificado apresentou maior eficiência na multiplicação de calos embriogênicos dos clones estudados. Considerando a porcentagem plântulas normais e plântulas com raízes e os valores médios do comprimento da parte aérea, não há necessidade da adição de IBA e BAP, no protocolo empregado, para a conversão de embriões somáticos em estádio cotiledonar para plântulas. As plantas provenientes de embriogênese somática apresentaram maior diâmetro de copa em relação às plantas provenientes de sementes, não havendo diferença significativa para as demais características avaliadas. Não foi detectada, pela inspeção visual, qualquer alteração no fenótipo na plantas provenientes da embriogênese somática. Assim, o comportamento de plântulas de Coffea arabica produzidas via embriogênese somática é semelhante ao de plântulas oriundas de sementes.