Teses e Dissertações
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Item Isolamento de leveduras de cavernas e avaliação do seu potencial biotecnológico para fermentar hidrolisados lignocelulósicos(Universidade Federal de Lavras, 2023-02-27) Bonett, José Eduardo Abril; Duarte, Whasley Ferreira; Ferreira, Rodrigo LopesPretendeu-se, neste trabalho, isolar, identificar e realizar uma avaliação biotecnológica de leveduras isoladas de 15 cavernas localizadas no estado de Minas Gerais. Para tal fim, usaramse amostras de solo em distintas zonas das cavernas e, para o isolamento, realizaram-se plaqueamentos usando o meio Extrato Malte. Para a identificação das leveduras, utilizou-se a técnica de MALDI-TOF. A avaliação biotecnológica das leveduras foi realizada em relação à produção de xilitol, etanol, proteína e biomassa e, para isso aplicaram-se testes de fermentação de xilose e em hidrolisados de substratos lignocelulósicos de café. A produção de etanol foi avaliada pela técnica de HPLC, e a determinação de proteína, pelo método de Kjeldahl. A produção de biomassa foi calculada por meio de uma curva de calibração. Do isolamento, obtiveram-se 236 leveduras, analisadas por MALDI-TOF. Dessa análise, encontraram-se espécies ainda não relatadas para cavernas. Quanto à avaliação biotecnológica, foi encontrado que nenhuma cepa produziu xilitol e que algumas cepas foram capazes de produzir etanol. A respeito da produção de proteína, uma cepa identificada como C. orthopsilosis apresentou maior porcentagem de proteína (35,8%). Os resultados obtidos permitiram verificar que as cavernas não são ambientes totalmente isolados do meio externo. A estrutura da caverna, a sua interação com o meio externo e as alterações do meio circundante influenciam na entrada de matéria orgânica nas cavernas. Isso influencia na presença de leveduras nas diferentes zonas das cavernas. Além disso, este é o primeiro trabalho em que é realizada a caracterização biotecnológica de leveduras de caverna. Os resultados obtidos permitiram conhecer os parâmetros-chave para melhorar a produção de etanol, proteína e biomassa dessas leveduras em hidrolisados lignocelulósicos para futuros trabalhos.Item Síntese de materiais carbonáceos a partir de palha de café arábica para remoção de contaminantes em sistemas aquosos(Universidade Federal de Viçosa, 2022-05-23) Guimarães, Tiago; Moreira, Renata Pereira Lopes; Silva, Antonio Alberto da; Teixeira, Ana Paula de CarvalhoA utilização do biochar na remediação de contaminantes em sistemas ambientais tem crescido nos últimos anos, devido às suas características de área superficial específica e superfície funcionalizada com grupos oxigenados. Portanto, esta tese teve como objetivo produzir biochars com diferentes características a partir da palha de café arábica (Coffea arabicca) e aplicá-los na remoção de contaminantes em sistemas aquosos. Essa tese foi dividida em cinco (5) capítulos. No primeiro capítulo é descrita uma breve revisão da literatura sobre as características, métodos de produção, caracterização e aplicações do biochar. No segundo capítulo são descritos os processos de síntese do biochar em diferentes temperaturas (350 e 600 o C) via pirólise, assim como a caracterização e aplicação na remoção de Fe(II). O biochar apresentou características amorfas antes da adsorção do Fe, bem como a formação de uma nova estrutura em forma de agulhas após a adsorção. O processo de remoção desse íon foi endotérmico, apresentando cinética de pseudo-segunda ordem. O modelo de Langmuir foi o que melhor se ajustou aos dados experimentais. No terceiro capítulo o material contendo ferro, produzindo no primeiro capítulo, foi usado na produção do BIOFe, via redução química empregando borohidreto de sódio. Esse material foi usado na remoção dos corantes alaranjado de metila (ALM) e azul de metileno (AZM) em sistemas aquosos. Na remoção de ambos os corantes acontecem, simultaneamente, o processo de adsorção e degradação, sendo o primeiro mais favorável. Por isso, foi proposto um processo de degradação sequencial (adsorção com biochar seguida de redução com nanopartículas de Fe de valência zero), em que a principal vantagem seria a diminuição do volume de efluente a ser degradado. No quarto capítulo foram descritos os resultados de degradação do herbicida dicamba (produto comercial) em solução aquosa empregando BIOFe em um sistema Fenton-like. Pôde-se observar que o compósito apresentou potencial para ser utilizado na degradação do dicamba, uma vez que o ensaio biológico com planta indicadora (feijão - Phaseolus Vulgaris) apresentou resultados de intoxicação considerados aceitáveis (10%). No quinto capítulo, foram descritos os resultados da degradação do herbicida dicamba utilizando um compósito a base de biochar produzido via síntese hidrotérmica. Pôde-se observar que o compósito apresentou melhores resultados que o biochar produzido via pirólise, e o sistema desenvolvido foi relativamente simples e de fácil aplicação. Palavras-chave: Biomassa. Adsorção. Degradação. Alaranjado de metila. Azul de metileno. Dicamba.Item Aplicação do agente biológico Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries “Cladosporin” como bioprotetor da qualidade do café (Coffea arabica L.)(Universidade Federal de Lavras, 2012-02-27) Angélico, Caroline Lima; Pimenta, Carlos JoséO produto à base do agente bioprotetor da qualidade do café Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries é uma alternativa promissora para a aplicação no frutos de café ainda na lavoura, por se tratar de um produto biológico contendo um micro-organismo com características GRAS (General Regarded as Safe) e com reconhecida ação deletéria sobre fungos prejudiciais à qualidade do produto final. A aplicação do produto nos frutos poderia promover a manutenção ou a melhoria da qualidade de cafés com histórico de problemas de bebida, principalmente em regiões com alta umidade relativa do ar. O produto “Cladosporin” foi aplicado em diferentes doses e épocas em frutos de café da cultivar Catuaí Amarelo IAC 62, com 3 anos de idade, durante dois anos consecutivos em uma lavoura da Fazenda Santa Helena, no município de Alfenas – MG, localizada às margens da represa de Furnas. Os testes de viabilidade apontaram que refrigeração e congelamento foram as melhores temperatura para a manutenção do fungo; apenas um aplicação, num intervalo de 60 dias antes da colheita na menor dose testada, é suficiente para que ocorra uma colonização de Cladosporium no frutos e diminua, consideravelmente, a incidência de fungos potencialmente toxigênicos; Cladospororium inibiu a germinação dos fungos potencialmente toxigênicos por período superior a 20 dias e hiperparasitou o conídio de Aspergillus ochraceus G. Wilh, alterando sua estrutura e textura; os parâmetros condutividade elétrica, lixiviação de potássio, sólidos solúveis totais, açúcares totais e atividade da polifenoloxidase se apresentaram como importantes marcadores de qualidade. Conclui-se que a aplicação do “Cladosporin” promoveu melhoria da qualidade nos cafés com resultados mais significativos para a fração boia.Item Extração assistida por microondas de compostos bioativos do café verde (Coffea arabica) utilizando solventes eutéticos(Universidade Federal de Viçosa, 2023-07-13) Silva, Larissa Dionísio da; Sousa, Rita de Cássia Superbi de; Coimbra, Jane Sélia dos ReisO café é amplamente valorizado nos setores comercial, industrial, econômico e possui propriedades benéficas à saúde. Os ácidos clorogênicos (ACG), encontrados no grão de café, são conhecidos por suas propriedades antioxidantes, proteção hepática e regulação dos níveis de glicose. Uma abordagem moderna para a extração de compostos naturais é o uso de Solventes Eutéticos Profundos Naturais (NADES), que possuem baixa toxicidade, biodegradabilidade e capacidade de extrair compostos de diferentes polaridades. O objetivo deste estudo foi otimizar e avaliar a extração de compostos bioativos do grão de café verde, como fenólicos totais (FT), ACG e atividade antioxidante (AA). Utilizou a combinação de NADES com a técnica de extração assistida por microondas. A eficiência da extração usando NADES foi comparada com a de solventes orgânicos convencionais. Três combinações de NADES foram testadas: cloreto de colina com ácido oxálico [Ch]Cl:AO, cloreto de colina com ácido cítrico [Ch]Cl:AC e cloreto de colina com ácido lático [Ch]Cl:AL. Foi aplicada uma metodologia estatística de superfície de resposta para avaliar o efeito da temperatura, concentração de biomassa e fração de água adicionada ao solvente na extração dos fenólicos totais. Os extratos obtidos usando NADES e solventes convencionais (etanol e acetato de etila) foram analisados por Espectrofotometria UV-Vis para determinar o teor de fenólicos, ACG e AA. Os resultados mostraram que o ponto ótimo para maior rendimento de FT foi a uma temperatura de 86,75 ºC, com 30% de biomassa no solvente e 58,42% de adição de água ao NADES. Os NADES demonstraram eficiência na extração de fenólicos totais. O NADES [Ch]Cl:AO foi selecionado para determinar a concentração de ACG, apresentando um teor de 12,48%. Os extratos obtidos com NADES e com solventes convencionais exibiram AA significativa e valores próximos. O estudo evidenciou que o uso de NADES é uma alternativa promissora para a extração de compostos bioativos presentes no grão de café verde. Palavras-chave: Compostos fenólicos. Café. Química verde. NADES. Atividade antioxidante. Ácidos clorogênicos. Metodologia de superfície de resposta.Item Fungos patogênicos a insetos-praga Monalonium annulipes do cacaueiro e Hypothenemus hampei do cafeeiro, no Território da Transamazônica e Xingu, PA, e seu potencial biotecnológico.(Universidade Federal do Amazonas, 2012) Moreira, Simone Maria Costa de Oliveira; Azevedo, João Lúcio deO interesse pelo uso de microrganismos entomopatogênicos na agricultura vêm aumentando significativamente nos últimos anos, diante dos problemas inerentes à inadequada utilização de agrotóxicos, pelo acúmulo de resíduos no ambiente e desequilíbrios ecológicos. Atualmente, as instituições de pesquisa estão preocupadas em identificar um maior número de microrganismos com potencial de utilização no controle biológico de pragas que sejam adaptados ao ecossistema local. Por questões econômicas, tem aumentado a procura por tecnologias que contribuam para uma agricultura sustentável e como resposta, o controle microbiano, mais precisamente com fungos entomopatogênicos é uma alternativa promissora. O cacaueiro é a principal cultura do Território da Transamazônica e Xingu, Pará, sendo o município de Medicilândia o maior produtor brasileiro. O cafeeiro é uma cultura que teve grande expressão na região, especialmente Coffea canephora cv. Conilon, e apresenta potencial para se tornar grande cultura devido a disponibilidade de áreas. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo a identificação de fungos entomopatogênicos de ocorrência natural que poderão ser utilizados no biocontrole de insetos-praga de plantas cultivadas, visando o menor desequilíbrio ao meio ambiente. Como objetivos específicos propôs-se a: i) coletar, isolar, identificar e caracterizar fungos entomopatogênicos de ocorrência em insetos- praga das culturas do cafeeiro e cacaueiro; ii) avaliar a eficácia de agentes microbianos identificados quanto à patogenicidade e virulência em condições controladas e; iii) testar a produção de enzimas quitinases, pectinases, amilases, celulases e lipases nos isolados obtidos e identificá-los por métodos clássico e molecular. O trabalho teve inicio com várias visitas em áreas de pastagens, capoeiras e lavouras de cacaueiros e cafeeiros nos municípios de Altamira, Brasil Novo e Medicilândia. Os insetos parasitados encontrados foram brocas-do-café (Hypothenemus hampei), no cafeeiro, um inseto da ordem Hemiptera, não identificado, e monalonium (Monalonium annulipes), no cacaueiro, todos colonizados por fungos. Nos locais onde foram encontrados os insetos parasitados, coletou-se solos para possível identificação de isolados entomopatogênicos, exceto onde foi encontrado o monalônio. Foram encontrados 14 isolados de fungos colonizando insetos, sendo as principais espécies Verticillium spp., Penicillium citrinum, Hiphopichia burtonii e Fusarium sp. e no solo Rhinocladiella sp.,Cladosporium sphaerospermum, Verticillium sp. e Pseudallescheria boydii. Na análise da atividade enzimática observou-se que os isolados do solo apresentaram as maiores degradações dos substratos testados. No bioensaio realizado contra broca-do-café, com 7 isolados, os que apresntaram maior índice de mortalidade foram H. burtonii, e Icaf 5, com 96, 94 e 62%, respectivamente, sendo os mais patogênicos. Contra o monalônio, o isolado Icac 3, Fusarium sp, colonizou 96% dos insetos nos dez dias de avaliação. Assim, considera-se que os isolados estudados demonstraram potencial importante para serem introduzidos em programas de biocontrole, com perspectivas de resultados promissores para controle microbiano de insetos-praga e atividade enzimática.Item A insegurança alimentar e nutricional: correlação epigenética do gene BDNF, status social e de saúde em agricultores familiares de café do Caparaó Capixaba(Universidade Federal do Espírito Santo, 2017-02) Barbosa, Wagner Miranda; Silva, Adriana Madeira Alvares daA associação entre Insegurança Alimentar e Nutricional (INSAN) e a violação do Direito Humano à Alimentação Adequada (DHAA) já é conhecida. Adicionalmente, a associação entre condições de saúde e trabalho de agricultores familiares e a INSAN tem sido proposta em diversos países, entretanto, o impacto desta associação com a epigenética por meio de estudos de metilação ainda recebe pouca atenção. O fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) é importante para a manutenção das funções cerebrais, porém o estresse favorece a metilação da região promotora do gene BDNF e está associada à depressão. Objetivo: Avaliar os fatores determinantes da INSAN, considerando a metilação do éxon I do BDNF e o estilo de vida dos cafeicultores familiares. Métodos: Cafeicultores familiares entre 18 e 60 anos de idade, de 22 comunidades rurais, de 11 cidades do Sul do Estado do “Espírito Santo”, sudeste do Brasil, participaram do estudo respondendo a um questionário com aspectos socioeconômicos, de posse e uso da terra, de comportamento, saúde e condições de trabalho. A avaliação da INSAN foi realizada pela Escala Brasileira de Insegurança Alimentar. A metilação do éxon I gene BDNF foi verificada pela Reação em Cadeia da Polimerase Específica para Metilação (MS-PCR). O índice de massa corporal (IMC) e avaliação nutricional bioquímica foram realizados. Modelos de regressão logística foram usados para verificar os fatores associados à INSAN. Resultados: Avaliação dos resultados mostrou a prevalência de INSAN e metilação em 23,68% e 39,01%.A ocorrência de INSAN explicada pela metilação do gene BDNF ORa = 5,03 (95% CI 1,98 – 12,83), trabalho extra fora de sua propriedade, ORa = 3,36 (95% CI 1,23 – 9,21), tamanho da terra (hectares) ORa = 0,77 (95% CI 0,67 – 0,90) e número de sintomas e/ou doenças realatados ORa = 1,12 (95% CI 1,04 – 1,20). Conclusões: A condição de INSAN dos pequenos cafeicultores, pode ser influenciada pelas condições de vida e pela metilação do BDNF.Item RNA-guided silencing pathways in Coffea spp.: genome-transcriptome-wide analyses(Universidade Federal de Lavras, 2017-02-24) Brum, Christiane Noronha Fernandes; Chalfun Junior, AntonioO Brasil é o maior produtor e exportador de café, a segunda commodity mais comercializada no mundo. O café é uma cultura bianual cuja fenologia é fortemente influenciada por fatores ambientais, como fotoperíodo, temperatura e distribuição de chuvas. A planta do cafeeiro apresenta desenvolvimento floral sequencial e vários eventos de florescimento. Esses eventos levam à maturação desigual dos frutos e, portanto, a uma baixa qualidade da bebida e a um aumento nos custos de produção. Dentro do panorama das mudanças climáticas, são extremamente necessários estudos que visem esclarecer os mecanismos de regulação do desenvolvimento para o melhoramento genético. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de RNAs pequenos não codificantes (sRNAs), com 21 nt de comprimento, em média, que regulam a expressão de mRNA em plantas inibindo a sua tradução com ou sem clivagem do alvo. O objetivo desta tese foi fornecer uma ampla análise de miRNAs de café e desvendar as vias de silenciamento guiadas por RNA nesta cultura. Para isso, o genoma de C. canephora foi pesquisado para a identificação e caracterização dos miRNAs e dos componentes das vias de silenciamento de RNA. Além disso, foram construídas bibliotecas de RNAseq pequenos RNAs a partir de gemas florais de C. arabica em diferentes estádios de desenvolvimento, visando identificar genes miRNAs conservados e de gênero específico relacionados ao desenvolvimento floral no café. Estes dois estudos representam um trabalho pioneiro que oferece um passo significativo para uma melhor compreensão da regulação transcricional e pós- transcricional desta grande cultura. A identificação e caracterização dos componentes das vias de silenciamento guiadas por RNA nesta importante cultura não somente proporcionam conhecimento da biologia destas plantas, mas também fornecem base para o melhoramento vegetal através de ferramentas biotecnológicas para lidar com as restrições dessa cultura.Item Molecular mechanisms in the first step of ABA-mediated response in Coffea ssp(Universidade Federal de Lavras, 2016-09-16) Cotta, Michelle Guitton; Andrade, Alan CarvalhoO ácido abscísico (ABA) é um fitohormônio universalmente conservado entre as plantas o qual coordena vários aspectos de resposta ao déficit hídrico, tais como, arquitetura radicular, dormência de sementes e regulação do fechamento estomático. Um mecanismo de transdução de sinal de ABA foi proposto envolvendo os receptores intracelulares de ABA (PYR/PYL/RCARs) que interagem com as fosfatases PP2Cs e proteínas quinases SnRK2. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar pela primeira vez os genes ortólogos desse sistema tripartite em Coffea. Sequências proteicas de Arabidopsis, citros, arroz, uva, tomate e batata foram escolhidas como query para buscar genes ortólogos no Coffee Genome Hub (http://coffee- genome.org/). A expressão diferencial em folhas, sementes, raízes e órgãos florais foi verificada por meio de análises in silico. As análises de expressão gênica in vivo foram também realizadas por RT-qPCR em folhas e raízes de clones de C. canephora (Cc) tolerantes (D T 14, 73 e 120) e suscetíveis (D S 22) à seca os quais foram submetidos ou não ao déficit hídrico. Os perfis de expressão desses genes foram também analisados em folhas de plantas de Ca e Cc crescidas em condição hidropônica e submetidas à tratamento com ABA exógeno (500 μM). Essa abordagem permitiu a identificação e a caracterização de 24 genes candidatos (9 PYL/RCARs, 6 PP2Cs e 9 SnRK2s) no genoma de Cc. Os motivos proteicos identificados permitiram caracterizar os respectivos genes como membros das famílias de receptores PYL/RCARs, fosfatases PP2Cs e quinases SnRK2 da via de resposta ABA- dependente. Essas famílias foram funcionalmente anotadas no genoma de Cc. Análises in vivo revelaram que oito genes foram super expressos em condição de seca em tecidos foliares e radiculares. Entre eles, três genes que codificam fosfatases foram expressos em todos (D T e D S ) clones, consequentemente sugerindo que esses genes foram ativados como uma resposta geral para lidar com o déficit hídrico. Entretanto, dois outros genes que codificam fosfatases foram super expressos somente nos clones D T , sugerindo que eles constituem genes-chave para a tolerância a seca nesses clones. Os clones D T também apresentaram perfil de expressão gênica diferencial para cinco outros genes e desse modo reforçam a ideia de que múltiplos mecanismos biológicos estão envolvidos na tolerância a seca em Cc. Em resposta a ABA exógeno, 17 genes foram expressos em folhas de plantas de Cc e Ca. Muitos genes foram diferencialmente expressos no clone 14 D T tanto em condição controle como após 24h de tratamento com ABA. Em condição controle, cinco genes foram mais expressos tanto nas plantas D T de Cc como de Ca. A quinase CcSnRK2.6 se destacou por ser expresso somente nas plantas de Cc (D T e D S ) após 72h de tratamento com ABA. De forma geral, foi observado que a via de sinalização de ABA é atrasada nos Ca var Rubi D S . Tais evidências moleculares corroboram com as análises microscópicas que mostram que o clone 14 D T foi mais eficiente para controlar o fechamento estomático em resposta ao tratamento com ABA do que as outras plantas de café. Todas essas evidências irão nos ajudar a identificar o determinismo genético para a tolerância à seca por meio da via ABA-dependente essencial para obter marcadores moleculares que podem ser usados em programas de melhoramento.Item Expression of the CcDREB1D promoter in coffea arabica: functional genomics and transcriptome analysis(Universidade Federal de Lavras, 2017-04-20) Torres, Luana Ferreira; Diniz, Leandro Eugenio CardamoneA mudança climática está colocando um grande desafio para a produção mundial de café e uma das estratégias para superar esses problemas consiste na geração de culturas com maior tolerância à seca e outros estresses abióticos, através de abordagens biotecnológicas e avançadas técnicas de melhoramento molecular. Ao longo de sua evolução, as plantas desenvolveram uma série de mecanismos de tolerância ao estresse abiótico. No entanto, a ativação desses mecanismos varia dependendo da espécie da planta, que determina o seu nível de tolerância ao estresse. A elucidação da função dos genes de tolerância ao estresse e também do processo de defesa vegetal nestas condições é de fundamental importância para a obtenção de variedades agrícolas mais resistentes, o que consequentemente pode contribuir para a redução de perdas nas culturas em condições climáticas adversas. Estudos recentes resultaram na identificação de muitos genes candidatos em Coffea para tolerância à seca apresentando perfis de expressão diferencial contrastantes entre genótipos. Entre estes genes, os DREBs estão envolvidos na via de resposta ao estresse hídrico como os fatores de transcrição vegetais que regulam a expressão de muitos genes induzíveis por estresse e desempenham um papel crítico na melhoria da tolerância ao estresse abiótico das plantas através da interação com um cis –elemento (DRE/CRT) presente na região promotora de vários genes responsivos ao estresse abiótico. Entre outros DREBs, o gene CcDREB1D mostrou um aumento nos níveis de mRNA durante a aclimatação por estresse de seca. Isto indica uma regulação distinta para a expressão de genes homólogos nos dois genótipos e sugere que este gene pode contribuir para a diversidade observada entre genótipos. Atualmente, as estratégias de sequenciamento de alto desempenho do transcriptoma (RNA-Seq) permitem gerar um grande volume de dados, a baixo custo e em um curto período de tempo. Esta informação permite a realização de estudos de perfis transcripcionais e redes genéticas numa compreensão aprofundada de vários perfis de genes. Diante deste contexto, o capítulo 1 apresenta uma revisão de literatura englobando desde as características de origem e comerciais do café até o estudo de genes e seu transcriptoma. O Capítulo 2 compreendeu o estudo de três haplótipos do promotor CcDREB1D isolados de clones tolerantes e sensíveis à seca de C. canephora avaliando a capacidade do promotor para controlar a expressão do gene repórter uidA em resposta ao déficit hídrico. O Capítulo 3 compreendeu o estudo do haplótipo pHP16L isolado de C. canephora e sua participação na expressão do gene repórter uidA em resposta aos estresses de seca, altas e baixas temperaturas, alta intensidade luminosa e aplicação exógena de ABA, acompanhados de dados de RT-qPCR. O capítulo 4 compreendeu analisar as condições de expressão do haplótipo pHP16L do promotor DREB1D sob uma faixa representativa dos estresses abióticos mais comuns, utilizando a técnica de RNA-seq como ferramenta para entender o mecanismo de tolerância ao estresse das plantas e a expressão dos genes estresse induzido bem como dos genes DREBs, acompanhados de validação dos dados pela técnica RT-qPCR.Item Calogênese em anteras de cafeeiro Coffea arabica L.(Universidade Federal de Lavras, 2004-01-30) Araújo, Jose Sérgio de; Pasqual, MoacirObjetivou-se com este trabalho, estudar a calogênese em anteras oriundas de uma população segregante F, de Coffea arabica L. Na indução de calogênese, foi efetuada a assepsia dos botões florais com álcool 70% por 1”, hipoclorito de sódio 1,4% durante 15º. Em seguida, as anteras foram extraídas, inoculadas em meio “IC” (indução de calos) e mantidas em estufa tipo BOD, sob temperatura de 27 + 1º €. Para controlar a contaminação causada por fungos e bactérias, foram acrescidos ao meio 10 mg L” de benomyl e 50 mg L' de cloranfenicol após o meio ter sido autoclavado. Os meios de cultura tiveram o pH ajustado para 5,7 + 1 antes de serem autoclavados. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com 4 repetições e 30 anteras por placa. Experimento 1: meio IC suplementado de 2,4-D (0, 1,2 e 4 mg L'") e cinetina (0, 2, 4e 8 mg L'). Experimento 2: meio IC suplementado de cinetina (0, 2, 4e 8 mg L”"), ácido indol butírico (0;0,5;1e2 mg Le 2mgL' | ' de 2,4-D. Experimento 3: meio IC suplementado de cinetina (0, 1,2,4e $mg L', ácido giberélico (0; 2,5, 5; 10 e 20 mg L!) e 8 mg L'! de ácido naftalenoacético. Concluiu-se que a presença de fungicida e bactericida adicionado ao meio de cultura reduz consideravelmente a contaminação causada por microorganismos. A combinação entre 2,4-D e cinetina favorece a indução de calos primários. A combinação de concentrações de 8 mg L* cinetina e AIB a 1 mg L'! atua favoravelmente na indução de calos. Sugere-se que o Gás tenha um efeito no aumento da rapidez de crescimento dos calos provenientes de anteras de cafeeiro.