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Item Expressão gênica e atividade de catalase e fenilalanina amonia liase ativadas por indutores de resistência em cafeeiro(Universidade Federal de Lavras, 2012-02-23) Valente, Thaís Cainã Teixeira; Resende, Mário Lúcio VilelaA ferrugem alaranjada, causada pelo fungo Hemileia vastatrix, é uma das doenças mais destrutivas do cafeeiro, podendo ocasionar grandes perdas na produção. Diante disso, estudos vêm sendo realizados a partir da perspectiva do controle dessa doença pela ativação de mecanismos de defesa inerentes às plantas. A análise da expressão de genes relacionados à defesa, assim como a análise da atividade de enzimas de defesa, em resposta ao tratamento com moléculas eliciadoras é uma ferramenta importante para estudar estes mecanismos. Este trabalho foi realizado com o objetivo de analisar a expressão quantitativa de dois importantes genes, CAT e PAL, que codificam para as proteínas catalase e fenilalanina amonia-liase, e avaliar a atividade destas proteínas envolvidas no mecanismo de defesa induzida de plantas a patógenos. Avaliou-se o efeito do NEFID (extrato de folha de cafeeiro), fosfito de manganês e associação de NEFID + fosfito de cobre + fosfito de manganês em mudas de cafeeiro suscetíveis à ferrugem, inoculadas e não inoculadas com Hemileia vastatrix. Para a análise do perfil de expressão gênica, utilizou-se a técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR). Os genes CAT e PAL foram induzidos em cafeeiro por todos os tratamentos, tendo os perfis de expressão sido bastante variados em relação ao indutor utilizado e ao período analisado, tanto na análise molecular quanto na análise bioquímica. Os maiores níveis de expressão dos genes CAT e PAL ocorreram em plantas induzidas por NEFID sem inoculação com H. vastatrix. Após a inoculação em mudas de cafeeiro induzidas, observaram-se variações entre as expressões destes genes, dos indutores e os tempos analisados, e os maiores níveis de expressão para os dois genes ocorreram em plantas tratadas com NEFID + fosfito de cobre + fosfito de manganês. A atividade da enzima PAL apresentou um perfil diferente em relação à atividade da enzima CAT, de modo que há uma menor atividade da enzima PAL para a maioria dos períodos analisados.Item Análise quantitativa da expressão de genes relacionados à defesa induzida em Coffea arabica por Soloflex® e Reforce® contra Hemileia vastatrix(Universidade Federal de Lavras, 2011-02-28) Pires, Natália Faustino; Resende, Mario Lúcio Vilela deEntre várias doenças que atingem o cafeeiro, a ferrugem alaranjada, causada pelo fungo Hemileia vastatrix, é uma das mais destrutivas, podendo ocasionar decréscimos na produção que variam de 35% a 50%. Diversos estudos vêm sendo realizados a partir da perspectiva do controle dessa doença pela ativação de mecanismos de defesa inerentes às plantas, através da aplicação prévia de produtos bióticos ou abióticos, não tóxicos, que atuam como indutores de resistência. Soloflex ® e Reforce ® são dois indutores de resistência que já comprovaram sua eficácia no controle ao fungo Hemileia vastatrix, mas os mecanismos moleculares que controlam a resistência são pouco conhecidos. Este trabalho estudou, pela primeira vez, a expressão de genes relacionados à defesa induzida por esses dois elicitores. A estratégia utilizada foi a avaliação da expressão quantitativa de genes marcadores das vias SAR e ISR após o tratamento com esses elicitores. Desta forma, a expressão dos genes AOS2, GLU1 e PR5, foi avaliada por PCR após tratamento com Soloflex ® e Reforce ® em cafeeiro, em tempo Real. Análises do perfil de expressão de cada gene indicaram que os tratamentos com Soloflex ® e Reforce ® induziram a expressão do gene GLU1 em mudas de cafeeiro suscetíveis à ferrugem alaranjada 192 e 24 horas, respectivamente, após a pulverização. Para o gene AOS2, houve indução após 24 horas apenas para as plantas tratadas com Reforce ® . O gene PR5 apresentou aumento da expressão 24 horas após o tratamento com os dois indutores, Soloflex ® e Reforce ® . A expressão gênica foi potencializada pelo patógeno em mudas de cafeeiro pulverizadas com Soloflex ® e Reforce ® para os genes GLU1 e PR5. Para o gene GLU1, a indução ocorreu 24 horas após a inoculação das plantas pulverizadas tanto com Reforce ® , quanto com Soloflex ® e, para o gene PR5, a indução ocorreu 24 horas após a inoculação nas plantas tratadas com Reforce ® e 48 horas após a inoculação naquelas tratadas com Soloflex ® , não se observando variações significativas de indução para o gene AOS2. Nossos dados sugerem então que o tratamento das plantas de café com Soloflex ® e Reforce ® aumentam a expressão de genes relacionados à resposta de defesa, resposta esta mediada pelo ácido salicílico e pelo ácido jasmônico. Estudos mais detalhados deverão ser conduzidos futuramente para confirmar esta hipótese.Item Análise quantitativa da expressão gênica de quitinase e peroxidase induzida por acibenzolar-S-metil e extrato vegetal em cafeeiro contra Hemileia vastatrix(Universidade Federal de Lavras, 2009-10-30) Cardoso, Danielle Cunha; Resende, Mário Lúcio Vilela deA análise da expressão de genes relacionados à defesa, em resposta ao tratamento com moléculas elicitoras é uma ferramenta importante para estudar os mecanismos de resistência induzida. Este estudo foi realizado com o objetivo de analisar a expressão quantitativa de dois importantes genes, POX e CHI, que codificam para as proteínas quitinase e peroxidase, envolvidas no mecanismo de defesa induzida de plantas a patógenos. Utilizou-se o indutor padrão de resistência acibenzolar-S-metil (ASM) e uma nova formulação constituída por extrato de folhas de café (NEFID) em mudas de cafeeiro susceptíveis à ferrugem, inoculadas e não inoculadas com Hemileia vastatrix. Para a análise do perfil de expressão gênica, utilizou-se a técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR). Os genes CHI e POX foram induzidos em cafeeiro por ambos os tratamentos, tendo os perfis de expressão sido bastante variados em relação ao indutor utilizado e ao gene analisado. ASM induziu a expressão do gene CHI mais rapidamente que NEFID, no entanto, os maiores níveis de expressão de ambos os genes foram observados em plantas induzidas por NEFID. A expressão de genes CHI e POX foi potencializada pelo patógeno em mudas de cafeeiro induzidas, observando-se variações entre os genes, indutores e tempos analisados. Observou-se, ainda, que cafeeiro susceptível à ferrugem eleva os níveis de transcritos dos genes CHI e POX na presença do patógeno e ausência de indutores de resistência.Item Indutores de resistência e os eventos bioquímicos de defesa do cafeeiro (Coffea arabica L.) contra Hemileia vastatrix(Universidade Federal de Lavras, 2011-08-04) Toyota, Márcia; Resende, Mário Lúcio Vilela deA ferrugem alaranjada é uma das principais doenças do cafeeiro e, cada vez mais, buscam-se novas alternativas de controle dessa enfermidade que causem menores impactos ao homem e ambiente. Objetivou-se, neste trabalho, avaliar o efeito de produtos alternativos, como formulações à base de extratos vegetais e produtos comerciais, como fertilizantes foliares, no manejo da ferrugem do cafeeiro em condições de campo e mudas de cafeeiro, bem como caracterizar alguns mecanismos bioquímicos envolvidos na resposta de defesa da planta. O ensaio de campo foi instalado em área cultivada com Coffea arabica, cv. IAC-144, com quatro anos, sob sistema convencional de produção. Os produtos utilizados foram: extrato aquoso de folha de café com ferrugem (Nefid), extrato aquoso de casca de fruto de café (Ecfc), acibenzolar-S-metil (ASM), fosfito de cobre (Fulland ® ), mananoligossacarídeo fosforilado proveniente da parede celular de Saccharomyces cerevisiae, Viça-Café plus ® e testemunha sem aplicação. Foi utilizado também um fungicida (ciproconazol + azoxistrobina). Foram realizadas pulverizações mensais dos produtos, à exceção do fungicida, que foi pulverizado duas vezes a cada ano. Avaliando-se a severidade da ferrugem de forma acumulada, nos três anos de avaliação (2008 a 2010), observou-se que os extratos vegetais (Nefid e Ecfc) e o fosfito de cobre, na dose 10 mL L -1 , foram capazes de reduzir a área abaixo da curva de progresso da severidade da ferrugem (AACPS) em 32%, 31% e 23%, respectivamente. Em casa de vegetação, foram realizados dois experimentos para avaliar o controle da ferrugem. Para tanto, mudas de cafeeiro cv. Mundo Novo foram pulverizadas com os mesmos tratamentos utilizados em campo, além de uma testemunha inoculada. Verificou-se que o extrato Nefid e o produto à base de fosfito de cobre, na dose 10 mL L -1 , conferiram proteção às mudas de cafeeiro em relação à testemunha, com controle médio nos dois experimentos de 79% e 75%, respectivamente. Para as análises bioquímicas, as mudas foram tratadas com Nefid, fosfito de cobre, na dose 10 mL L -1 e ASM, e observou-se aumento nas atividades das enzimas peroxidase, polifenoloxidase, β-1,3-glucanase e quitinase nas folhas, sem alteração dos teores de lignina e fenóis solúveis totais. No presente estudo observou-se que o extrato Nefid e fosfito de cobre apresentaram controle parcial da ferrugem em condições de campo e em mudas de cafeeiro, provavelmente pela indução de resistência, pois promoveram aumento nas atividades de algumas proteínas relacionadas à patogênese .Item Atividade antioxidante em cafeeiro e proteção contra a cercosporiose por indutor de resistência e fungicidas(Universidade Federal de Lavras, 2014-02-21) Fernandes, Luiz Henrique Monteiro; Resende, Mário Lúcio Vilela deO presente trabalho foi realizado com os objetivos de avaliar os efeitos da aplicação do fosfito de potássio em formulação com subprodutos da indústria cítrica e fungicida, associados ou não, na proteção de mudas de cafeeiro contra ataque de Cercospora coffeicola e, também, investigar os efeitos destes tratamentos nas trocas gasosas e no sistema antioxidante enzimático como mecanismos de resistência pós-formados durante a indução de resistência. Para tanto, realizaram-se dois trabalhos em casa de vegetação, no Departamento de Fitopatologia da Universidade Federal de Lavras, utilizando-se como material vegetativo a cultivar Mundo Novo. Em ambos foram feitas as pulverizações, com os produtos Fortaleza (fosfito de potássio formulado com subprodutos da indústria cítrica), fungicida sistêmico Priori Xtra (ciproconazol e azoxystrobim) e as associações entre os produtos e, 7 dias após, inoculou-se com o patógeno Cercospora coffeicola. No ensaio para avaliar a proteção promovida pelos produtos contra progresso da cercosporiose, verificou-se que os tratamentos com Priori Xtra, sozinho ou associado com Fortaleza, foram os que promoveram o melhor controle e, consequentemente, menos área abaixo da curva de progresso, tanto da incidência quanto da severidade da cercosporiose, sendo, estatisticamente, diferente do tratamento com o fertilizante foliar Fortaleza, este último, por sua vez, com controle estatisticamente superior à testemunha, mostrando um controle parcial da doença. Avaliando-se as trocas gasosas, ficou nítido que os tratamentos, onde se associou o produto Fortaleza, mantiveram a taxa de fotossíntese das plantas inoculadas constante e similares das plantas que não receberam o inóculo, ao longo dos períodos de avaliação. O tratamento com Priori Xtra inoculado, foi estatisticamente semelhante à testemunha e inferior aos com Fortaleza no que tange à taxa fotossintética das plantas aos 14 e 18 dias após pulverização. O trabalho permite associar tal comportamento às atividades enzimáticas da catalase, peroxidase do ascorbato e dismutase do superóxido, onde se destacaram nas plantas que receberam os tratamentos com o produto Fortaleza, sendo estatisticamente diferente dos demais, constatando-se maior atividade destas enzimas do sistema antioxidante e que, por sua vez, foram responsáveis por eliminar excessos de radicais livres provenientes da produção de espécies reativas de oxigenio (ERO’s), em virtude da indução de resistência contra o elicitor biótico, mantendo, assim, suas atividades ecofisiológicas estáveis. Pode-se, também, associar tais resultados ao ácido ascórbico, presente no produto Fortaleza, conforme análise feita em Laboratório, sendo este um importante substrato para ação da enzima peroxidase do ascorbato, crucial na eliminação do peróxido de hidrogênio, sendo este último uma importante ERO.Item Formulações de extratos vegetais e micronutrientes na indução de resistência em mudas de cafeeiro contra Cercospora coffeicola(Universidade Federal de Lavras, 2008-03-07) Amaral, Daniel Rufino; Resende, Mário Lúcio Vilela deO presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes formulações à base de extratos vegetais, em mistura e em combinação com os compostos ASM (acibenzolar-S-metil), sulfato de cobre, sulfato e cloreto manganês, na severidade da cercosporiose e no enfolhamento de mudas de café. Avaliaram-se também os mecanismos bioquímicos envolvidos na resposta de defesa contra C. coffeicola. Todos os tratamentos foram aplicados via foliar, sete dias antes da inoculação com C. coffeicola . Verificou-se que os tratamentos com pyraclostobin + epoxiconazole, ASM, EFID e EFID + ASM (no primeiro experimento), Viça Café ® e o NEFID (2 aplicações) (no segundo experimento) fosfito de cobre, a mistura de EFID com cobre e EFID isoladamente (no terceiro e quarto experimentos); fosfito de cobre, a formulação EFID, a mistura de EFID com sulfato de manganês (0,29 g/L) e EFID com cloreto de manganês (0,435 g/L) (no quinto e sexto experimentos) proporcionaram maior proteção contra a doença e aumento no número de folhas quando comparados à testemunha inoculada. As atividades de peroxidase, quitinase e 1,3-glucanase foram maiores nas últimas coletas, a partir de 7 até 21 dias. A exceção foi para a enzima 1, 3-glucanase, que a atividade aumentou nas primeiras horas para os tratamentos com ASM e NEFID. Para o conteúdo de fenóis totais, observaram- se maiores atividades aos 11 dias de tratamento. A área abaixo da curva do conteúdo de fenóis totais foi significativamente maior para os tratamentos com EFID e NEFID em relação ao ASM e às testemunhas inoculada e absoluta.Item Extrato de casca de café e óleo de tomilho no controle de Cercospora coffeicola Berk & Cooke em cafeeiro(Universidade Federal de Lavras, 2006-07-28) Pereira, Ricardo Borges; Alves, EduardoOs objetivos deste trabalho foram: (i) avaliar o efeito de diferentes doses do extrato de casca de frutos de café (ECC) e óleo essencial de tomilho (OET) na germinação e no crescimento micelial de Cercospora coffeicola; (ii) avaliar a eficiência do EEC e OET como possíveis indutores de resistência em casa-de- vegetação; (iii) caracterizar bioquimicamente os efeitos dos indutores de resistência, ECC e OET, usando como marcadores a atividade das enzimas peroxidases e a lignificação; (iv) e observar por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV) os efeitos destes na germinação e no desenvolvimento do fungo. De acordo com os resultados observados, o ECC não apresentou efeito fungitóxico aos conídios de C. coffeicola, promovendo uma maior germinação em relação à testemunha. O OET apresentou efeito fungitóxico aos conídios, nas concentrações de 500, 1000 e 2000ppm. No ensaio de crescimento micelial, todas as doses do ECC e OET inibiram o crescimento micelial em relação à testemunha. Nos experimentos realizados em casa-de-vegetação, o ECC (150g.L -1 ) e o OET (500ppm), apresentaram melhor controle da cercosporiose, 28,1% e 20%, respectivamente, em relação à testemunha. Em relação à caracterização das respostas de defesa, as plantas somente tratadas com ECC apresentaram pico de atividade de peroxidases no sétimo e décimo primeiro dias após tratamento. As plantas inoculadas apresentaram comportamento semelhante. As plantas tratadas com OET apresentaram picos de atividade no segundo e terceiro dias após tratamento, voltando a atingir o pico no nono dia, no qual mantiveram-se até o décimo quarto dia. As plantas inoculadas apresentaram pico apenas no primeiro dia após inoculação. Não foram observadas diferenças significativas na concentração de lignina aos 14 dias após pulverização entre os tratamentos testados. Observou-se em MEV que o ECC promoveu melhor germinação dos conídios e desenvolvimento do fungo, diferentemente do OET, que reduziu a germinação dos conídios e o desenvolvimento do fungo em todos os tempos.Item Fosfito de potássio no controle de Colletotrichum gloeosporioides, isolado de plantas de cafeeiro com sintomas de mancha manteigosa(Universidade Federal de Lavras, 2011-02-24) Ogoshi, Cláudio; Abreu, Mário Sobral deO presente trabalho foi realizado com os objetivos de avaliar o efeito do fosfito de potássio na germinação, formação de apressórios e no crescimento micelial de Colletotrichum gloeosporioides; verificar o controle in vivo do patógeno; estudar os mecanismos envolvidos na resposta de defesa em mudas de cafeeiro e analisar os eventos de germinação e penetração do patógeno por meio da microscopia eletrônica de varredura. Foram realizados quatro experimentos. Os tratamentos utilizados foram: fosfito de potássio nas doses 1,25 mL L -1 ; 2,5 mL L -1 ; 5,0 mL L -1 e 10,0 mL L -1 ; Acibenzolar-S-Metil 0,1g L -1 e água destilada esterilizada que foi a testemunha padrão. As doses 5,0 mL L -1 e 10,0 mL L -1 de fosfito de potássio se destacaram na redução da porcentagem de conídios germinados, na inibição da formação de apressórios e na redução do índice de velocidade do crescimento micelial. O fosfito de potássio na dose 10,0 mL L -1 reduziu a área abaixo da curva de progresso da severidade da doença em 62,5% destacando-se dos demais tratamentos. Esse mesmo tratamento sem inoculação aumentou a atividade da peroxidase um dia depois da pulverização, da polifenoloxidase seis dias após e da quitinase três dias. Já quando inoculado, não induziu aumento da atividade da peroxidase, mas aos 13 dias após pulverização houve um pico de formação das enzimas polifenoloxidase e da quitinase. Todos os tratamentos não induziram aumento da formação da β-1,3 glucanase. A germinação dos conídios, observados por meio da microscopia eletrônica de varredura, iniciou-se quatro horas após a inoculação do patógeno com máximo de formação 12 horas após, onde se iniciou a formação dos apressórios. A penetração ocorreu na maioria das vezes mecanicamente e com 16 horas após inoculação, constataram-se hifas do patógeno dentro dos tecidos da planta. Este trabalho mostrou que o fosfito de potássio é um produto promissor no controle de Colletotrichum gloeosporioides em cafeeiro, mas para que o mesmo venha se tornar uma inovação tecnológica para os produtores são necessários mais estudos em campo.Item Manejo da ferrugem e da cercosporiose do cafeeiro com produtos alternativos, fungicida e suas associações, em condições de campo(Universidade Federal de Lavras, 2012-09-10) Costa, Bruno Henrique Garcia; Resende, Mário Lúcio Vilela deO presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito de formulações à base de subprodutos das indústrias de café e citros, formulações de fosfitos, e as associações destes e também com fungicida, no manejo da ferrugem e cercosporiose do cafeeiro, em condições de campo. O ensaio foi realizado em cafeeiro da cultivar Catuaí Vermelho IAC 99, com seis anos de idade. Foram utilizados os tratamentos Reforce Mn (fosfito de manganês) 3,0 L ha -1 , Fortaleza (fosfito de potássio + formulação à base de subproduto da indústria de citros) 3,0 L ha -1 , Fitoforce Full (formulação à base de subproduto da indústria de café a 1o Brix + nutrientes), fungicida (ciproconazol + azoxistrobina) 0,5 L ha -1 e as associações Reforce Mn + ET 64 (formulação à base de subproduto da indústria de café a 1o Brix), Reforce Mn + fungicida, Fortaleza + ET 64, Fortaleza + fungicida, Reforce Mn + Fortaleza, Reforce Mn + Fortaleza + fungicida, ET 64 + fungicida e uma testemunha sem pulverização. Os tratamentos foram aplicados em quatro épocas (dezembro, janeiro, fevereiro e março) das safras 2010/2011 e 2011/2012 à exceção do fungicida, que foi pulverizado duas vezes, quando aplicado isoladamente (dezembro e fevereiro) e apenas no mês de fevereiro, quando em associação com as outras formulações. Avaliou-se o efeito destes na intensidade da ferrugem e da cercosporiose do cafeeiro, além da produtividade e do enfolhamento. As formulações à base de subprodutos das indústrias de café e citros e as formulações de fosfitos (Fortaleza, Reforce Mn e Fitoforce Full) promoveram redução na intensidade da ferrugem e da cercosporiose do cafeeiro, com consequente redução da desfolha e aumento da produtividade. Os tratamentos com Reforce Mn e Reforce Mn + Fortaleza proporcionaram aumentos na produtividade de 72% e 88%, respectivamente, no ano de alta produtividade, sendo este aumento semelhante ao proporcionado pelo tratamento com fungicida. A associação dos indutores de resistência ao fungicida permitiu a redução de 50% da aplicação deste, mantendo a eficiência no controle da ferrugem e da cercosporiose e os níveis de enfolhamento e produtividade dos cafeeiros.