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Item Avaliação de genótipos de cafeeiros em diferentes níveis de acidez e alumínio(2003) Mistro, Júlio César; Fazuoli, Luiz Carlos; Gallo, Paulo Boller; Bataglia, Ondino Cleante; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféGrande parte das áreas agrícolas no Estado de São Paulo é caracterizada por solos ácidos, baixa saturação de bases, elevados teores de alumínio trocável, além de baixos teores de macro e micronutrientes. O plantio nestas áreas prejudica o crescimento do sistema radicular e da parte aérea, exigindo o uso constante de calcário e fertilizante para se atingir altas produções, elevando, assim, o custo da lavoura. A aplicação de calcário ameniza o efeito do alumínio apenas nas camadas superficiais, concentrando as raízes somente nesta área. A correção em camadas mais profundas é uma operação mais difícil, tornando as plantas mais sensíveis em épocas de seca, devido à menor exploração de solo. O conhecimento do comportamento das cultivares e/ ou linhagens de café em tal situação é de grande importância para a cafeicultura brasileira pois a sua expansão dá-se em áreas de cerrado, onde predomina solos ácidos e pobres em nutrientes. O objetivo deste trabalho é conhecer o comportamento dos cafeeiros em diferentes níveis de calagem e acidez de solo. O experimento, instalado em 2000 no Pólo Regional de Desenvolvimento de Tecnologia dos Agronegócios do Nordeste Paulista - Mococa (SP), seguiu o delineamento de blocos ao acaso no esquema de parcela subdividida, com três repe-tições. A parcela foi constituída por três doses de calcário C 0 (V = 7%), C 1 (V = 15%) e C 2 (V= 30%) na profundindade de 0-20 cm e a subparcela por quatro cultivares de porte baixo (Ouro Verde IAC 5010-5, Obatã IAC 1669-20, Catuaí Vermelho IAC 144 e Tupi IAC 1669-33) e quatro de porte alto (Icatu Vermelho IAC 3888-6, Mundo Novo IAC 376-4, Acaiá IAC 474-16 e Icatu Vermelho IAC 4045). Cada subparcela foi composta por duas linhas com doze plantas cada uma (24 plantas no total). Foram avaliadas as seguintes características: altura, diâmetros da copa e do caule das doze melhores plantas da subparcela; nas seis melhores plantas da subparcela foram marcados dois ramos laterais, na parte mediana da planta, a fim de determinar o comprimento do ramo primário, nº de nós no ramo todo e no ramo do ano, comprimento médio dos internódios do ramo todo, comprimento do 3 e 4º internódios, área foliar e o nº de flores. Colheram-se as doze melhores plantas e determinaram-se a produção de café coco, o rendimento de grãos, tipo de grão, peneira média e o peso de 100 sementes. Os dados foram submetidos a ANAVA, pelo teste F ao nível de 5%, considerando o efeito da calagem (independentemente das cultivares) e o efeito da calagem em cada uma das cultivares. Para comparação de médias, utilizou-se o teste de Tukey a 5%. De maneira geral a correção da saturação de bases proporcionou, tanto nas cultivares de porte baixo quanto nas de porte alto, melhores condições de desenvolvimento e crescimento vegetativo e reprodutivo na maioria das característi-cas avaliadas. As cultivares Tupi IAC 1669-33 (porte baixo) e Acaiá IAC 474-16 (porte alto) mostraram tendências de serem menos afetadas por uma condição de solo ácido e pobre em nutrientes, enquanto que as cultivares Obatã IAC 1669-20 (porte baixo) e Icatu Vermelho IAC 3888-6 (porte alto) mostraram ser mais sensíveis a esta condição.Item Caracterização de cultivares do cafeeiro (Coffea arabica L.) usadas no programa de melhoramento no Sul de Minas Gerais: III - Divergência genética(2003) Dias, Fábio Pereira; Mendes, Antônio Nazareno Guimarães; Carvalho, Samuel Pereira de; Souza, Carlos Alberto Spaggiari de; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféVisando obter informações sobre a divergência genética de 25 progênies de cafeeiro (Coffea arabica L.) envolvendo as cultivares Catuaí Vermelho, Mundo Novo, Acaiá, Rubi, Topázio, Catucaí, Icatu, Sarchimor, Katipó, Tupi e Obatã, conduzidas pelo Programa de Melhoramento Genético do Cafeeiro em Minas Gerais (EPAMIG, UFLA, UFV, PROCAFÉ) e São Paulo (IAC), foi instalado esse ensaio, em 1998, no delineamento em látice triplo 5x5, com sete plantas por parcela e três repetições. Os dados de duas colheitas foram obtidos e analisados no período de julho de 2000 a junho de 2001 para os 16 caracteres estudados. Os resultados obtidos por meio da aplicação do método estatístico das distâncias generalizadas de Mahalanobis, verificou que as progênies Tupi IAC 1669-333 e Icatu Vermelho IAC 4782 apresentaram as maior distância (409,19), sendo consideradas as mais divergentes, e a menor distância (9,72) entre as progênies Icatu Vermelho IAC 4040-79 e Icatu Vermelho IAC 4045-47, sendo as menos divergentes entre si. A aplicação do método de agrupamento de Thocher à matriz de Mahalanobis indicou a existência de cinco grupos de similaridade, sendo o primeiro grupo aquele com maior número de progênies (20 das 25 estudadas).Item Viabilidade de sementes de Coffea arabica e Coffea canephora(2003) Soares, Fábio Quezado; Reis, Raimunda B.; Eira, Mírian T. S.; Fazuoli, Luiz Carlos; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféAs sementes de café mantêm a viabilidade por um período de tempo relativamente curto em condições ambientes, o que dificulta o planejamento das atividades de quem as utiliza e o uso em épocas mais vantajosas. Fatores como procedência das espécies, grau de maturidade e atributos genéticos podem estar relacionados com o comportamento de cada espécie, carecendo de melhores estudos. O objetivo deste trabalho foi monitorar a longevidade das sementes de Coffea arabica e C. canephora, armazenadas sob temperaturas de +25º C, +5º C e -20º C por até um ano. Os resultados mostraram que após 6 meses de armazenamento a maior parte dos acessos de C. canephora já havia perdido totalmente a viabilidade, principalmente sementes das variedades Kouilou IAC 68-8 e Robusta IAC col. 5, enquanto que a viabilidade das sementes da variedade Apoatã IAC 2258, utilizada como porta enxerto resistente a nematóides, foi mantida a + 5ºC por um período de 12 meses. Apenas sementes da cultivar Apoatã IAC 2258 toleraram o armazenamento sob temperatura subzero, embora também tenha sido observada perda de cerca de 50% da viabilidade inicial. Em C. arabica as sementes das cultivares Mundo Novo IAC 388-17 e Catuaí Vermelho IAC 99 mantiveram a viabilidade inicial por maior período de tempo, particularmente quando armazenadas em +5º C e a -20°C, enquanto que as sementes da cultivar Iapar 59 não apresentaram tolerância à temperatura subzero. A manutenção da viabilidade das sementes de C. arabica por períodos de até um ano sob temperatura subzero é um resultado promissor para a definição do protocolo de conservação das sementes de café em Bancos de Germoplasma. O protocolo de conservação de sementes de C. canephora necessita ser melhor estudado.Item Transformação genética de Coffea arabica através do bombardeamento de calos embriogênicos e seleção em canamicina(2003) Cunha, Welcimar Gonçalves da; Barros, Érika V. S. A.; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféA obtenção de novos cultivares adaptadas às necessidades da produção agrícola é um desafio constante no melhoramento genético do cafeeiro. Nos últimos anos, a criação de técnicas biotecnológicas vem trazendo novas perspectivas para o melhoramento genético do cafeeiro ao permitir a introdução de genes específicos em variedades elite em um espaço de tempo significativamente reduzido. Entretanto, apesar dos vários estudos já desenvolvidos, ainda não foi descrito um protocolo de alta eficiência para a obtenção de plantas transgênicas de C. arabica. Como alternativa aos protocolos já existentes ou em estudo, o presente trabalho tem por objetivo o estabelecimento de um protocolo eficiente para a introdução de transgenes em C. arabica. Neste trabalho são apresentados resultados do bombardeamento de calos embriogênicos e seleção de transformantes em canamicina. Discos foliares de C. arabica variedade Catuaí Vermelho foram cultivados em meio C modificado contendo 20mM de 2,4-D e incubados por 6 meses. A massa de calos embriogênicos formada foi bombardeada 24 h após pré-tratamento osmótico com manitol 0,5 M. Para este procedimento foi utilizado o vetor pBI 426 contendo o gene gus, que codifica a enzima ²-glucuronidase, e o gene nptII que confere resistência a canamicina. A massa de calos bombardeados foi então transferida para o meio C modificado e subcultivada em doses crescentes de canamicina. Os embriões regenerantes em canamicina 400 mg/L foram transferidos para o meio WPM. O teste histoquímico dos calos, embriões ou folhas das plantas regenerantes em meio seletivo revelou a atividade da enzima GUS, indicando assim que a técnica é eficiente para a introdução de transgenes de interesse em C. arabica. As análises moleculares das plantas obtidas estão em andamento para a confirmação da transformação. Desta forma, os resultados obtidos indicam que uma nova e promissora metodologia, visando à introdução de genes de interesse em C. arabica, está sendo estabelecida. De acordo com os trabalhos de biolística em outras culturas, é possível que este método também seja viável para variados genótipos de café.Item Transformação genética de Coffea canephora mediada por Agrobacterium tumefaciens com gene heterólogo de ACC-oxidase na orientação anti-senso(2003) Ribas, Alessandra Ferreira; Kobayashi, Adilson Kenji; Cação, Sandra Maria Bellodi; Pereira, Luiz Felipe Protasio; Ayub, Ricardo Antônio; Vieira, Luiz Gonzaga Esteves; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO fitorregulador etileno está associado a vários eventos fisiológicos em plantas. Em frutos climatéricos, um aumento dramático na síntese de etileno promove os passos subseqüentes do amadurecimento. Uma das alternativas para obtenção de plantas com maturação uniforme é o controle da síntese do fitorregulador etileno, pode ser feito através da transformação genética de plantas com genes da sua rota metabólica em orientação anti-senso. A enzima ACC oxidase, que catabolisa o último passo da biossíntese deste fitoregulador, tem sido um dos alvos preferidos para inibição com genes anti-senso, com uma conseqüente redução na produção de etileno. O objetivo deste trabalho foi introduzir o gene da ACC-oxidase do melão em plantas de C. canephora P. via Agrobacterium tumefaciens, usando o herbicida glufosinato de amônio como agente seletivo. Explantes de C. canephora foram cultivados em meio para indução de embriogênese direta ED (1/4 macro e 1/ 2 dos micronutrientes do meio MS, vitaminas do meio B 5 , 30 g.L -1 de sacarose, 100 mg.L -1 de cisteína), suplementados com 5 mM de 2-iP por três semanas. Os explantes foram imersos em suspensão de Agrobacterium tumefaciens EHA105 contendo o plasmídio pIBI3 que contém os genes da fosfinotricina acetiltransferase (bar) e da ACC-oxidase do melão na orientação anti-senso. Os explantes foram submetidos à sonicação por 2 segundos, sendo em seguida transferidos para meio ED e co-cultivados por 4 dias a 24° C no escuro. Após este período, os explantes foram transferidos para meio ED fresco contendo 10 mM de glufosinato e 400 mg.L -1 de cefotaxima. Inicialmente, 87 explantes foram co-cultivados e produziram 18 calos embriogênicos resistentes ao glufosinato quatro meses após a infecção. Embriões transgênicos putativos foram transferidos para meio ED sem fitoreguladores para permitir germinação. As plântulas provenientes de cinco eventos independentes foram aclimatadas em casa-de-vegetação. A análise de PCR confirmou a presença de fragmentos amplificados do gene bar (516 pb) em 44 das 62 plantas analisadas. Em plantas controle (não transformadas) nenhuma amplificação foi observada. A análise de Southern blot foi conduzida para avaliar a integração do gene da ACC oxidase de melão em plantas de C. canephora P. Os resultados demonstraram a presença do transgene em todas as seis plantas analisadas. A dupla digestão com as enzimas de restrição EcoR I e Hind III, liberou um fragmento de aproximadamente 1200 pb que hibridizou com a sonda correspondente ao transgene. Plantas transformadas e plantas controle foram pulverizadas com 1% (v/v) de uma formulação comercial de herbicida (Finale, AgrEvo â ) contendo 20% de glufosinato de amônio. Plantas controle demonstraram os primeiros sintomas de intoxicação 48 h após a pulverização devido a acumulação de amônia nos tecidos, e uma semana após as plantas estavam totalmente necrosadas. Nas plantas transformadas nenhum sintoma foi observado. As plantas estão em fase de crescimento em casa-de-vegetação. A determinação da produção de etileno será realizada, através de cromatografia gasosa, quando as plantas iniciarem a frutificação.Item Regeneração de embriões somáticos de café (Coffea arabica L.) em meio líquido a partir de calos embriogênicos friáveis(2003) Teixeira, Joao Batista; Junqueira, Cristina Salgado; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféA embriogênese somática apresenta um grande potencial para clonagem de plantas elites de café (C. arabica L.). Entretanto, para se ter uma alta eficiência no processo, bem como uma redução substancial no envolvimento de mão de obra, é necessário que a metodologia seja otimizada, sobretudo, com a utilização de meio líquido, seja em frascos convencionais sob agitação ou, preferencialmente, em biorreatores. A regeneração de embriões somáticos foi conduzida a partir da inoculação de calos embriogênicos cultivados em Erlenmeyer contendo meio líquido sob agitação e em biorreatores de imersão temporária. Os calos embriogênicos foram isolados do explante original de folha após 4 a 5 meses de cultivo e transferidos para o meio líquido de regeneração na proporção de um grama de células para um litro de meio. Foi utilizado o meio de MS, meia força, acrescido de 10 mg de tiamina, 1 mg de piridoxina, 1 mg de ácido nicotínico, 1 mg de glicina, 100 mg de mio-inositol, 100 mg de caseína hidrolisada, 400 mg de extrato de malte, por litro, e 3% de sacarose. Como reguladores de crescimento a presença de 2,0 mg/L de BAP e 0,25 mg/L de ANA foi essencial para a completa diferenciação dos embriões. Após um mês de cultivo, já era possível observar o aparecimento dos embriões globulares, em alta freqüência. Ao final do segundo mês de cultivo, praticamente apenas embriões eram observados nos frascos de cultivo. Ao final desse período, os embriões diferenciados foram transferidos para meio de maturação, quando foram avaliados os seguintes componentes: ácido abscísico (ABA) a 5,0 µM, sacarose (3,0 e 6,0%) e sorbitol (87,7 e 175,4 mM). Uma amostra dos embriões foi igualmente inoculada em meio de germinação, EG. Este meio apresentava a seguinte constituição: o meio de MS, meia força, acrescido de 10 mg de tiamina, 1 mg de piridoxina, 1 mg de ácido nicotínico, 1 mg de glicina, 100 mg de mio-inositol, por litro, e 2% de sacarose. Como reguladores de crescimento, foram adicionados BAP a 0,25 mg/L e AIA a 0,45 mg/L. Tanto na fase de diferenciação quanto na fase de maturação, foram anotados os pesos da matéria fresca inicialmente inoculada e após o cultivo por dois meses. Ao final do cultivo no meio de maturação, foi pesada uma amostra e contado o numero de embriões. A taxa de aumento no peso da matéria fresca foi calculada pela formula TCR=(lnPFf-lnPFi)/t, sendo PFf o peso da matéria fresca final, PFi o peso da matéria fresca inicial e t o tempo em dias. O tempo de dobramento da materia fresca foi calculado pela formula dt=0,693/TCR. O período de dobramento da matéria fresca foi em torno de 11 dias para a fase de diferenciação e 18,7 dias para a fase de maturação. O numero médio de embriões por grama de calo embriogênico inoculado foi de 313.000, variando de 239.827 para o tratamento com ABA a 5,0 µM a 421.217 para o tratamento com sacarose na concentração de 6%. Visualmente, os melhores tratamentos foram os com sacarose 3%, sorbitol 87,7 mM e sorbitol 175,4 mM. O meio EG conferiu igualmente um bom desenvolvimento dos embriões.Item Recuperação assistida por marcadores RAPD do genótipo recorrente em população de retrocruzamento(2003) Oliveira, Antonio Carlos Baião de; Sakiyama, Ney Sussumu; Rufino, R.J.N.; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO melhoramento genético do cafeeiro pelos métodos tradicionais é, via de regra, lento, devido ao longo período de geração da cultura e à necessidade de vários anos para a realização dos testes de campo, para avaliações fenotípicas. Por isso, é de suma importância a implementação de técnicas que facilitem e acelerem a seleção e a avaliação de materiais superiores dentro do programa de melhoramento dessa espécie. A implementação da tecnologia de marcadores moleculares para assistir os programas de melhoramento pode, potencialmente, acelerar o progresso genético pelo aumento na eficiência de seleção, redução no intervalo de gerações e identificação de quebras indesejáveis. Uma população segregante RC 1 de 59 plantas, oriunda do cruzamento entre uma linhagem do Híbrido de Timor CIFC 2570 (resistente à ferrugem) e o cultivar Catuaí Amarelo IAC 30 (susceptível), este usado como recorrente, foi utilizada para construir um mapa de ligação para Coffea arabica L, com base em 134 marcadores RAPD. Este trabalho se propôs a utilizar as informações geradas por estes marcadores para identificar, na população segregante, as plantas com a maior proporção do genitor recorrente, visando a seleção de plantas resistentes ao agente da ferrugem e com a recuperação mais rápida das características desejáveis do genitor recorrente (Catuaí). Os 134 marcadores investigados foram obtidos pela análise de 1.200 primers decâmeros dos Kits OPA-OPZ, OPAA-OPAZ e OPBA-OPBH da Operon Technologies e de várias combinações aleatórias de pares de primers. Das 59 plantas RC 1 analisadas, pode-se constatar que 15 plantas apresentaram acima de 81,0% de recuperação do genoma do Catuaí (genitor recorrente), sendo que dessas plantas, duas exibiram 92,0% de recuperação desse genitor. Em razão da grande similaridade fenotípica observada entre as plantas da população RC 1 avaliada neste trabalho, seria praticamente impossível identificar nesta população, sem o suporte das informações de um grande número de marcadores neutros do ponto de vista fisiológico, como os marcadores de DNA, as plantas com maior proporção do genoma do cultivar comercial. Considerando que a média de recuperação do genoma de genitor recorrente no primeiro retrocruzamento é de 75,0%, pode-se atentar para a grande utilidade desse tipo de informação, como forma de acelerar a introgressão de genes de interesse, como no caso de genes condicionadores da resistência ao agente da ferrugem (Hemileia vastatrix), para cafeeiros arábicos. Em conclusão, pode-se inferir que as informações geradas pelos marcadores que deram origem ao mapa de ligação podem ser utilizadas eficientemente para identificar as plantas da população segregante com maior porcentagem de recuperação do genitor recorrente, visando a seleção.Item Progressos no mapa de ligação gênica de Coffea arabica L. obtido com base em marcadores RAPD(2003) Oliveira, Antonio Carlos Baião de; Sakiyama, Ney Sussumu; Diniz, Leandro Eugenio Cardamone; Zambolim, Laércio; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféO desenvolvimento de mapas de ligação genética é uma das aplicações de maior importância da tecnologia dos marcadores moleculares no melhoramento de plantas, pois estes mapas permitem a geração de informações básicas a respeito da estrutura, organização e evolução do genoma, a localização das regiões genômicas que controlam características de importância agronômica, a quantificação do efeito destas regiões nos caracteres estudados, a decomposição de características complexas nos seus componentes mendelianos e a utilização de todas estas informações nos programas de melhoramento. O desenvolvimento de mapas de ligação saturados possibilita o teste de marcadores distribuídos por todo o genoma, aumentando a chance de se obter associações significativas com características de interesse. No caso de Coffea arabica L. (2n=4X=44), a construção de mapas de ligação tem sido dificultada em razão do baixo polimorfismo e de complicações advindas da poliploidia. Este trabalho se propôs a construir um mapa parcial de ligação gênica para Coffea arabica L., com base em marcadores RAPD, a partir de uma população segregante RC 1 de 59 plantas oriunda do cruzamento entre uma linhagem do Híbrido de Timor CIFC 2570 (UFV 445-46) e o cultivar Catuaí Amarelo IAC 30 (UFV 2143-235), este utilizado como genitor recorrente. Na identificação dos marcadores polimórficos, foram testados 1.200 primers da Operon Technologies (Kits OPA-OPZ, OPAA-OPAZ e OPBA-OPBH) e várias combinações aleatórias de pares de primers. A população segregante (RC 1 ) foi analisada pelos marcadores polimórficos consistentes, em que a banda polimórfica estava presente no genitor não-recorrente (Híbrido de Timor) e no F 1 e ausente no genitor recorrente (Catuaí). Os marcadores obtidos foram analisados pelo aplicativo GQMOL, utilizando, na construção do mapa, os marcadores que segregaram na proporção esperada de 1:1. Grupos de ligação foram estabelecidos pela análise de dois pontos, considerando-se a freqüência de recombinação máxima de 0,35 e o LOD escore mínimo de 3.0. Análises de três pontos e multipontos foram então utilizadas para encontrar a mais provável ordem dos marcadores dentro dos grupos de ligação e a função de Kosambi foi usada para conversão das taxas de recombinação em distâncias de mapa (cM – centiMorgan). Dos 1.200 primers de RAPD testados para a identificação de marcadores polimórficos entre os genitores e F 1 , 127 (10,6%) produziram fragmentos consistentes, presentes no Híbrido de Timor e no F 1 , mas ausentes no ‘Catuaí Amarelo’. Esses 127 primers informativos deram origem a 165 marcadores RAPD polimórficos (1,3 marcador por primer), dos quais 124 (75,15%) segregaram na proporção esperada de 1:1 e 41 (24,85%) exibiram desvio nesta segregação pelo teste Ç 2 (P>0,05). O nível de polimorfismo revelado pelas combinações de primers foi bem inferior (1,43%), pois das 698 combinações testadas, apenas dez foram polimórficas, em que sete destas apresentaram um único fragmento polimórfico e três, duas bandas polimórficas. Destes 13 marcadores, dez (76,9%) apresentaram segregação esperada de 1:1 e três (23,1%) mostraram desvio nessa proporção. Os 134 marcadores RAPD que segregaram na proporção esperada de 1:1, foram utilizados para a construção do mapa parcial de ligação. Dezessete destes marcadores não se mostraram ligados a nenhum dos grupos de ligação, enquanto os 117 marcadores restantes formaram 11 grupos de ligação, cobrindo 794,3 cM do genoma. O mapa apresentou boa distribuição dos marcadores nos grupos de ligação, nos quais a distância máxima entre dois marcadores foi de 26,93 cM no grupo 11, e apenas sete intervalos entre marcadores apresentaram distâncias acima de 20 cM. O número de grupos de ligação obtido foi bastante inferior ao correspondente número haplóide de cromossomos de Coffea arabica (n=22). Por essa razão, o genoma da espécie foi parcialmente explorado e muitas regiões ainda não foram identificadas. Outros tipos de marcadores moleculares, principalmente AFLP e SSR, devem ser incluídos, para melhorar a cobertura do genoma do cafeeiro, com a formação de novos grupos de ligação, inclusão dos marcadores não ligados e saturação dos intervalos nos grupos obtidos.Item Organogênese e germinabilidade durante o desenvolvimento de sementes de cafeeiros (Coffea arabica L.)(2003) Estanislau, Wagner Tompson; Castro, R. D. de; Carvalho, Maria Laene Moreira de; Mesquita, Paulo Rogério de; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféEste trabalho teve o objetivo de caracterizar a organogênese e os aspectos físicos e fisiológicos durante o desenvolvimento e maturação de sementes de cafeeiros (Cv. Acaiá Cerrado MG-1474). Foram marcados ramos no terço superior das plantas dois dias após o início da florada. As sementes foram isoladas de frutos colhidos em diferentes estádios de desenvolvimento, entre a antese e 255 dias após a antese (DAA), e classificados por coloração e tamanho. As análises morfológicas e anatômicas relacionadas a organogênese foram realizadas por meio de microscopia estereoscópica, que permitiu a caracterização dos diferentes estádios de desenvolvimento, com base na presença e/ou crescimento de perisperma, endosperma e embrião, avaliando-se também, o teor de água e conteúdo de matéria seca dos diferentes tecidos. Foi avaliada a germinabilidade in vitro de embriões isolados, assim como a germinabilidade de sementes no decorrer do desenvolvimento. O crescimento inicial do fruto foi relacionado ao desenvolvimento do perisperma originado a partir do crescimento do tecido nucelar. Apesar de existirem variações no desenvolvimento inicial, há uma tendência de uniformização do tamanho dos frutos. A película prateada se resume a resquícios da camada externa do perisperma observado em frutos e sementes maduros. Os embriões adquirem germinabilidade a partir dos 150 DAA, quando já apresentam formato cotiledonar, o que coincide com a fase de acúmulo crescente de matéria seca e perda de umidade. As sementes germinam somente a partir dos 210 DAA, quando o endosperma se apresenta sólido. A germinabilidade é máxima na fase verde-cana e cereja.Item Identificação de genes de cafeeiro relacionados à resistência sistêmica adquirida e à resistência vertical(2003) Guzzo, Sylvia D.; Harakava, Ricardo; Tsai, Siu Mui; Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do CaféCom o objetivo de contribuir para o esclarecimento dos mecanismos de resistência de cafeeiros contra doenças, genes relacionados à resistência sistêmica adquirida (RSA) e à resistência vertical (RV) foram identificados através da técnica de hibridização subtrativa por supressão (HSS). Para o isolamento de genes relacionados à RSA, cafeeiro cv. Mundo Novo foi tratado com o indutor benzotiodiazol (BTH) na concentração de 400 ppm. Após 72h, RNA total foi extraído de folhas de plantas tratada e controle e convertido em cDNA. Através da HSS, produziu-se uma biblioteca subtraída enriquecida de fragmentos de genes induzidos pelo BTH. Para o isolamento de genes relacionados à RV, cafeeiro Híbrido de Timor foi inoculado com urediniosporos de Hemileia vastatrix. Após 72h, seguindo a mesma metodologia anteriormente descrita, produziu-se uma biblioteca subtraída enriquecida de fragmentos de genes induzidos durante a resposta de resistência. Para confirmar que os clones continham fragmentos de genes especificamente induzidos nas condições estudadas, realizou-se seleção diferencial através de hibridização com sondas de cDNAs de plantas tratada e controle. Foram sequenciados 384 clones de cada biblioteca. As sequências obtidas foram comparadas com aquelas presentes no GenBank utilizando-se o programa BLASTX. Os genes encontrados estão envolvidos em diversos processos relacionados à resistência contra fitopatógenos como: formação de espécies de oxigênio ativadas, apoptose, síntese e transporte de metabólitos antimicrobianos, percepção e transdução de sinal e síntese de proteínas relacionadas à patogênese.